一、科学的突破是否延缓我们的衰老?（论文文献综述）
杨阔[1]（2021）在《苹果C2H2型锌指蛋白MdZAT10调控叶片衰老和干旱胁迫的机理研究》文中认为苹果是世界上重要的经济果树。叶片早衰严重影响苹果树体营养,进而影响果实产量及品质。因此,研究叶片衰老的机理对调节植物生长发育和提高产量具有重要意义。转录因子在植物叶片衰老调控网络中发挥重要作用,但是关于转录因子在苹果叶片衰老的研究相对较少。苹果生长过程中经常遭受干旱胁迫,严重限制了树体的生长、果实品质及产量。转录因子在植物响应干旱胁迫过程中发挥重要作用。C2H2型锌指蛋白广泛存在于植物中,并在调控植物生长发育和响应环境胁迫等方面发挥重要功能。先前的研究发现,多个C2H2型锌指转录因子在拟南芥叶片发育过程中差异表达,但是调控叶片衰老的分子机理尚不清楚。本研究利用分子生物学技术,解析了C2H2型锌指转录因子MdZAT10在苹果叶片衰老和响应干旱方面的作用。主要结果如下:1、q RT-PCR分析发现MdZAT10随叶片衰老表达量逐渐升高。与野生型相比,过表达MdZAT10能够加速苹果及拟南芥叶片衰老,而MdZAT10反义抑制表达的苹果叶片表现出延缓叶片衰老的表型。同时,过表达MdZAT10能提高衰老相关基因MdSAG29和MdPAO的表达水平,并降低叶片衰老负调控因子MdWRKY70的表达,表明MdZAT10促进植物叶片衰老。2、酵母双杂交、Pull-down和双分子荧光互补实验验证了MdZAT10与MdABI5之间的互作。对MdABI5的研究发现,过表达MdABI5能够促进苹果及拟南芥叶片衰老,而MdABI5反义抑制表达的苹果叶片则延缓叶片衰老,表明MdABI5促进植物叶片衰老。双荧光素酶活性检测结果发现MdABI5能够激活叶绿素降解基因MdNYC1和MdNYE1的表达,并且MdZAT10与MdABI5互作增强了MdABI5对MdNYC1和MdNYE1的转录激活。表型实验表明MdZAT10通过增强MdABI5对MdNYC1和MdNYE1的转录激活促进叶片衰老。3、酵母双杂交、Pull-down和双分子荧光互补实验验证了MdZAT10与MdBT2之间的互作。Me JA处理不仅提高了MdZAT10的转录水平,并且降低MdZAT10蛋白通过26S蛋白酶体途径的降解。过表达MdZAT10促进JA诱导的叶片衰老,而MdZAT10反义抑制表达的苹果叶片表现延缓叶片衰老的表型。Me JA处理促进MdBT2蛋白的降解,表型实验发现MdBT2抑制了JA诱导的叶片衰老。MdBT2通过泛素化MdZAT10,降低其蛋白的稳定性。过表达MdBT2部分抑制了MdZAT10介导的叶片衰老,表明MdBT2负调控MdZAT10介导的叶片衰老。4、MdZAT10能被PEG6000、盐及机械损伤、SA和ACC所诱导。过表达MdZAT10转基因苹果苗、愈伤组织及拟南芥均表现出降低干旱抗性的表型。干旱处理下,过表达MdZAT10提高了MDA含量、H2O2含量及O2-的水平,降低了抗氧化酶的活性,表明MdZAT10降低植株对干旱的抗性。我们的研究表明MdZAT10能提高MdABI5对MdNYC1和MdNYE1的转录激活从而促进叶片衰老;同时MdBT2负调节MdZAT10蛋白的稳定性,进而抑制JA诱导的叶片衰老。此外,MdZAT10通过降低活性氧的清除降低对干旱的抗性。因此研究MdZAT10的调控机制对于抗衰老及抗旱研究提供理论基础。
胡骏[2]（2021）在《补肾延龄方对肾虚衰老人群氧化应激及炎症指标的影响及miRNA-mRNA作用机制研究》文中研究表明老龄化是社会经济发展到一定阶段出现的必然现象。据国家统计局公布的数据,截至2018年底,我国60周岁以上人口已达2.49亿,占总人口的17.9%,比2017年增长0.6个百分点,其中65周岁及以上人口达1.67亿,占总人口的1 1.9%,比2017年增长0.5个百分点,呈现出老龄化人口基数大、增长快、未富先老、未老先衰的严峻形势,而且我国老年人口的慢病患病率成上升趋势,疾病负担逐年递增,中国2.02亿老年人口中有超过100万人至少患有一种慢性疾病,老年人同时患有多种慢性病的情况日趋严重。衰老是一个循序渐进的过程,是自然界动物从出生到死必经的过程,意味着身体机能的退化。衰老虽然不可避免,但可以延缓,面对社会老龄化的来临,让每一位公民学会科学养生,延缓衰老,预防疾病,避免得重大疾病才是最根本的办法。习近平主席提出“没有全民健康,就没有全面小康”,延缓衰老、健康长寿是我们面临的共同难题。中医作为我国传统医学,在两千多年的医疗实践中积累了丰厚的经验,在抗衰老方面有着自身的优势,形成了独特的方法和理论体系,因此发掘传统医学中的延缓衰老的理法方药积极应对社会老龄化尤为重要。目的梳理传统中医对衰老规律和机理的认识,总结抗衰方剂的组方规律和抗衰中药的主要类别;探讨“补肾延龄方”对肾虚衰老人群氧化应激及炎症指标的影响,评价其安全性;探索肾虚衰老的发生机制以及补肾延龄方的作用机制。方法1.筛选出《中国医学史》中各朝代具有代表性的中医古籍,以“衰老”“养老”“老人”“年老”等作为关键词。使用《中华医典》V5.0软件对上述纳入研究的古籍进行关键词检索,将检索结果导出为文本文档格式,对检索结果进行梳理,中药按照《中药学》的分类方法进行分类。2.采用前瞻性自身前后对照研究,对30例肾虚受试者进行临床研究。将受试者分为衰老前期组、衰老组;肾虚轻证组、肾虚较重组。采用补肾延龄方进行干预,8周后观察30例患者治疗前后的指标变化。主要疗效指标包括肾虚衰老中医证候积分、Borg疲劳指数量表、SOD、TNF-α、IL-6、睾酮、雌二醇、补体C3、补体C4水平,安全性指标包括肝功能、肾功能、血常规、不良事件/反应等。采用SPSS26.0软件进行统计分析,由于发生不良事件退出试验者进行不良反应分析。计量资料将采用均数±标准差表示（X±S）进行统计描述,计数资料用频数或百分比进行统计描述,对试验前后的结果进行配对样本t检验,组间比较采用独立样本t检验,统计检验均采用双侧检验,P<0.05认为所检验差异有统计学意义,计数资料采用频数进行统计描述,使用卡方检验计数资料采用频数进行统计描述,用Fisher确切概率法。3.从临床试验的受试者中选取衰老组中6例、肾虚较重组中6例,与招募的各年龄健康受试者中选取的非衰老受试者6例、非肾虚受试者6例,进行进行高通量侧序,通过差异表达分析筛选与肾虚衰老相关的miRNA、mRNA差异表达谱,并进行生物信息学分析,探讨肾虚衰老的发生机制。上述临床试验受试者服药4周后,进行自身前后配对高通量测序,通过差异表达分析筛选补肾延龄方的作用的靶基因,并根据第二部分的临床结果进行PCR验证,研究补肾延龄方延缓肾虚衰老的作用机制。结果1.总结出59个与衰老相关的征象或表现,发现根据中医理论上述衰老症状主要与肾虚有关;总结中医对衰老机理的认识,主要为阴虚致衰、阳虚致衰、肾虚致衰、气血虚衰、邪气致衰;总结中医抗衰方剂的功用或主要指征,发现其与肾虚有关,抗衰方剂组方仍是以补肾药、补气药、补血药、安神药为主、辅以祛邪之品。抗衰中药主要为补虚类和祛邪类,其中补虚类中药又可以再分为补气类、补血类、补阴类、补阳类、安神类;祛邪类中药可再分为清热类、活血类、化痰类、祛风湿类、利水类。2.在中医证候积分上,经治疗前后比较,治疗后受试者的肾虚衰老中医证候积分中医证候积分均显着下降,差异具有统计学意义（P<0.001）。治疗后受试者肾虚衰老症状得到明显改善,且治疗证候治疗总有效率为97%;按年龄分层,发现衰老前期组治疗前后的证候积分均较低,提示衰老前期组的肾虚症状总体是偏轻的,但两组间比较治疗前证候积分无统计学差异（P>0.05）;治疗后证候积分无统计学差异（P>0.05）,提示补肾延龄方在改善肾虚衰老的症状时,对不同年龄段的患者是一致的,不存在疗效上的差异;在体力改善情况方面,经治疗前后比较,治疗后受试者Borg疲劳指数评分显着降低,差异具有统计学意义（P<0.001）。治疗后受试者疲劳程度得到改善。在抗氧化功能方面,治疗后受试者的SOD水平明显提高（P<0.05）;降低炎症反应方面,治疗后IL-6水平有所下降,但差异尚无统计学意义（P>0.05）,治疗后TNF-α水平明显降低（P<0.05）;其他抗衰指标方面,治疗后性激素分泌水平有提高的趋势,但尚无统计学意义（P>0.05）;治疗后的补体C3、补体C4水平基本与治疗前持平（P>0.05）;按年龄分层,发现各项目治疗前组间均无差异,具有可比性,SOD治疗后组间存在差异（P<0.05）,在衰老前期组中SOD的改善更为明显,提示衰老前期（40-50岁）左右应用补肾延龄方抗氧化应激的作用更为显着;其余项目治疗后组间不存在差异（P>0.05）,在干预炎症因子、性激素、补体的结果上,不同年龄的疗效是一致的;按症状分层发现IL-6、TNF-α治疗前存在差异,IL-6在肾虚较轻组中较高,肾虚较重组中较低;TNF-1肾虚较轻组中较低,肾虚较重组中较高,治疗后的这种差异消失。其余项目治疗后组间不存在差异（P>0.05）,在干预SOD、炎症因子、性激素、补体的结果上,疗效是一致的。研究期间,无受试者发生严重不良事件,受试者治疗后AST明显降低（P<0.05）。受试者治疗后Cr升高,较治疗前有统计学差异（P>0.05）,但治疗前后,受试者治疗前后血常规、肝功能、肾功能均未出现明显异常,结果显示补肾延龄方延缓肾虚衰老安全可靠。3.衰老与非衰老的差异比较,差异倍数FC>1.5且P<0.05的差异mRNA共272个,其中上调mRNA共137个,下调mRNA共135个。差异miRNA共51个,其中上调miRNA共24个,下调miRNA共27个。肾虚与非肾虚的差异比较,差异倍数FC>1.5且P<0.05的差异mRNA共174个,其中上调mRNA共100个,下调mRNA共74个。差异miRNA共149个,其中上调miRNA共105个,下调miRNA共44个。将两组的差异mRNA取交集,可以得到8个与年龄及肾虚证候均有关有关的mRNA,为H3C6、ARL17B、FOXD2、DNAH14、IGHV3-43、SLC12A1、TBC1D3I、AC105001.2。将两组的差异 miRNA 取交集,可以得到8个与年龄及肾虚证候均有关有关的miRNA,为miR-11987-z、miR-13-y、bantam-y、miR-317-z、miR-13 7-y、miR-276-y、miR-311-z、hsa-miR-1246。治疗前后配对比较,差异mRNA共221个,其中上调mRNA共71个,下调mRNA共150个。差异miRNA共152个,其中上调miRNA共46个,下调miRNA共106个。筛选出补肾延龄方的25个潜在与年龄相关mRNA靶点COL3A1、COL1A2、POSTN、ELN、CDH11、ABI3BP、PENK、COL12A1、BGN、PRRX1、ITGA11、CLDN10、COL1A1、GJA1、DCN、IL6、COL5A1、SPDYC、PAPPA、COL6A3、IGFBP4、FOXD2、ADAM12、GCNT7、CHGA,8 个潜在 miRNA 靶点 bantam-y、miR-13-y、miR-137-y、miR-11987-z、miR-317-z、miR-276-y、novel-m0145-5p、hsa-miR-1246。得到9个潜在与肾虚证候相关的mRNA靶点SLX1B、ARG2、PROS 1、KCND3、FOXD2、FAXDC2、VSIG2、MFSD6L、TEDDM1,19 个潜在 miRNA 靶点 bantam-y、miR-13-y、miR-137-y、miR-11987-z、miR-317-z、miR-276-y、novel-m0212-3p、hsa-miR-1197、novel-m0004-5p、novel-m0005-5p、novel-m0009-3p、miR-584-x、miR-144-y、hsa-miR-375-3p、miR-313-y、hsa-miR-183-3p、novel-m0175-3p、miR-3535-z、hsa-miR-1246。1 个潜在的与年龄及肾虚证候均相关的mRNA靶点:FOXD2;6个miRNA靶点:bantam-y、miR-137-y、miR-11987-z、miR-317-z、miR-276-y、hsa-miR-1246。补肾延龄方对目标基因的调控是hsa-miR-371b-5p上调,IL-6下调,GFAP下调,p21下调。COL6A3下调,PI3K下调,AKT下调,FOXO上调,SOD2上调。结论1.肾虚为“内因”,邪气为“外因”,衰老过程伴随气血神衰。肾虚是衰老的主要因素,也是衰老的常见证型。古代抗衰方剂组方以补肾药、补气药、补血药、安神药为主、辅以祛邪之品。抗衰中药包括了补气类、补血类、补阴类、补阳类、安神类、清热类、活血类、化痰类、祛风湿类、利水类。2.补肾延龄方能改善肾虚衰老相关症状,提高肾虚衰老人群的SOD水平,降低TNF-α水平,提高人体抗氧化应激功能,降低炎症反应水平,安全有效。3.补肾延龄方可能通过使COL6A3下调,调控PI3K下调,调控AKT下调,调控FOXO上调,调控SOD2上调,提高SOD水平,发挥抗氧化应激作用;通过使hsa-miR-371b-5p上调,调控IL-6下调,调控GFAP下调及调控p21下调,起到降低炎症反应水平的作用。
王靖怡[3]（2021）在《血管抗衰方通过miR-146a/TRAF6/NF-κB改善血管衰老机制研究》文中进行了进一步梳理血管衰老在机体衰老过程中发挥重要作用,现已成为心脑血管疾病的首要危险因素。目前,血管衰老相关研究多集中于机制层面,临床干预手段较为局限,多围绕防治危险因素或改善内皮功能等方面展开。中医对于衰老的认识历史久远,围绕“未老先养”理念构建了丰富的理论和诊疗体系。因此,深入挖掘中医衰老相关认知,结合现代研究方法,进一步探索延缓血管衰老的具体干预措施及其机制是有意义的。有鉴于此,在“七情”须使合和指导下,结合血管衰老病生理过程及中医对血脉理论相关认识,选用植物基源相近、成分相似、传统功效互有重叠和补充的人参和三七组成血管抗衰方,共同发挥益气活血,通补血脉之功。为明确该方能否针对血管衰老发挥效用,本研究利用生物信息学、网络药理学、临床研究及细胞实验多种方法,旨在探索血管抗衰方的临床有效性及其具体作用机制,以期为延缓血管衰老提供切实有效的干预手段。目的利用生物信息学对衰老内皮细胞差异表达miRNA分子进行筛选,并预测差异表达miRNA分子作用的靶基因及下游通路,初步构建调控关系,利用网络药理学预测血管抗衰方干预血管衰老可能的作用靶点及涉及的生物学功能,通过临床研究验证其有效性及安全性,并在细胞实验中探讨其发挥作用的分子机制,系统构建“中医理论-组方用药-生信预测-临床验证-机制研究”的研究模式,以揭示血管抗衰方可从miRNA水平改善血管衰老。方法第一部分利用生物信息学方法筛选衰老内皮细胞差异表达miRNA及血管抗衰方延缓血管衰老作用靶点预测研究首先,利用GEO数据库筛选衰老内皮细胞差异表达miRNA分子,对GSE92655和GSE37092两个数据集进行分析,利用R语言（3.6.3版本）处理数据矩阵,以|log2FC|≥ 1 且 adjusted P value<0.05 作为筛选 DEMs（Differentially Expressed miRNAs）的条件,对筛选出的DEMs进行VENN交集,寻找共同的DEMs信息,利用ggplot2包绘制火山图并对DEMs进行标注,利用GEO2R分析工具对表达矩阵进行归一化处理后绘制相关图形。其次,利用TargetScan、miRTarBase 8.0、miRDB三大数据库对DEMs下游靶基因进行预测,进行VENN交集以提高预测准确性,同时利用Metascape网站对差异表达miRNA下游靶基因进行富集分析,miRpathDB2.0数据库及KEGG筛选并明确后续研究的下游通路。最后,利用口服生物利用度（oral bioavailability,OB≥30%）和类药性（drug-likeness,DL≥0.18）作为筛选条件,在TCMSP平台筛选血管抗衰方组成药物人参、三七主要活性成分,并利用CNKI及PubMed对其结果进行补充,利用TCMSP、ETCM及PharmMapper（norm fit≥0.9）获取成分靶点信息,利用cytoHubba获取排名前十的活性成分;利用NCBI、GeneCards、HAGR、OMIM收集血管相关疾病与衰老相关基因,取交集获得血管衰老相关基因,构建疾病靶点数据集,通过对成分靶点与疾病靶点取交集筛选出血管抗衰方主要活性成分发挥延缓血管衰老功效的潜在靶点,进行蛋白-蛋白互作网络构建与富集分析,以明确血管抗衰方可能参与的生物学过程或所涉及的信号通路。第二部分血管抗衰方干预血管衰老临床试验及miR-146a/TRAF6/NF-KB调控关系初步探索采用自身前后配对设计,对血管抗衰方临床有效性及安全性进行探索性研究,纳入血管动脉硬化检测诊断为动脉硬化的受试者共40例,给予血管抗衰方进行为期4周的干预。临床研究分为3部分开展,分别为有效性、安全性及探索性指标。有效性研究中分为主要疗效指标和次要疗效指标,主要疗效指标包括受试者脉搏波传导速度数值变化,以及血管僵硬度评级变化;次要结局指标包括血压、踝臂指数、生化指标、细胞因子、血液流变学及颈动脉超声。安全性指标包括血尿常规、肝肾功能及凝血功能,用以评估该药物的临床安全性。探索性指标包括:受试者血浆样品NO及ET-1变化情况以反映内皮功能变化;利用实时荧光定量PCR技术检测血液样品中miR-146a、TRAF6、NF-κB及下游相关炎症因子表达水平变化,并采用2-△△Ct计算治疗前后差异表达倍数。第三部分血管抗衰方调控miR-146a/TRAF6/NF-KB干预衰老内皮细胞作用机制研究首先,筛选合适的药物诱导模型,分别采用不同浓度梯度Ang Ⅱ和TNF-α对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）诱导24h,光镜下观察细胞形态学变化,CCK8法检测细胞增殖情况,SA-β-gal染色检测细胞衰老情况,流式检测细胞周期,RT-qPCR检测不同模型诱导后对miR-146a表达影响情况,综合选取适宜的造模药物及浓度。其次,在药物诱导模型上,进行血管抗衰方、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和三七总皂苷PNS无毒浓度筛选,利用CCK8法检测上述药物对细胞增殖抑制率的影响,以确定适宜药物干预浓度。最后,进行药物干预衰老内皮细胞的机制研究,共分为:对照组、TNF-α模型组、TNF-α模型组+人参皂苷Rg1组、TNF-α模型组+三七皂苷R1组、TNF-α模型组+人参皂苷Rg1组+三七皂苷R1组、TNF-α模型组+血管抗衰方组、TNF-α模型组+三七总皂苷PNS组,对各组细胞分别进行CCK8检测、SA-β-gal染色、流式检测,从增殖、衰老、细胞周期等功能层面评估药物作用,利用RT-qPCR、Western Blot和ELISA检测,判断miR-146a/TRAF6/NF-κB及其下游炎症效应分子表达水平变化。结果第一部分1、GSE92655 和 GSE37092 中获得 3 个共同的 DEMs,分别为 hsa-miR-146a、hsa-miR-181a、hsa-miR-1275。共同上调 DEM 为 hsa-miR-181a,共同下调 DEM为hsa-miR-1275,has-miR-146a在两个数据集中呈现不同差异表达趋势,故选定为本研究主变量;2、miRTarBase 8.0、TargetScan、miRDB 中对 miR-146a 下游靶基因预测交集为14 个:ERBB4、IRAK1、TRAF6、CD80、CARD10、LRP2、RARB、NUMB、CCDC6、PPP1R11、ROBO1、KDM2B、LFNG、SLC10A3,涉及前额发育、激活NF-κB诱导的激酶活性、模式规范过程、前额神经元产生、细胞间受体信号通路等。miRpathDB2.0及KEGG筛选出miR-146a与NF-κB信号通路及炎症反应关系密切。构建miR-146a/TRAF6/NF-κB作为血管衰老的可能机制。3、筛选出人参活性成分27个,作用靶点201个,三七活性成分12个,作用靶点150个,二者共同作用靶点为139个,cytoHubba分析排名前10的活性成分包括:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1等;四个数据库共获得246个血管衰老相关靶点;将成分靶点与疾病靶点取交集后有22个共同靶点,PPI网络及MCODE聚类显示以炎症和凋亡为主,GO和KEGG分析显示涉及调控NF-κB信号通路。预测血管抗衰方可能通过调控NF-κB信号通路改善血管衰老。第二部分1、血管抗衰方能够降低患者脉搏波传导速度,改善血管僵硬度评级,改善受试者血压水平,降低总胆固醇水平,升高高密度脂蛋白胆固醇水平,改善血液流变学情况,降低血液粘稠度;2、血管抗衰方对受试者血常规、肝肾功能无明显影响,对患者凝血功能有一定的调节作用;3、血管抗衰方可以降低受试者血浆中ET-1水平;在miR-146a/TRAF6/NF-KB调控关系验证中发现,血管抗衰方能够下调受试者miR-146a和NF-κB以及NF-κB1的表达水平,上调TRAF6表达水平,对于NF-κB通路后续效应因子也具有下调作用,以VCAM下调最为明显。第三部分1、形态学方面,TNF-α与Ang Ⅱ诱导后,HUVEC细胞排列逐渐稀疏,体积增大,胞内逐渐浑浊,且与Ang Ⅱ相比,TNF-α诱导后的细胞排列更为稀疏松散;CCK8法检测结果显示,采用Ang Ⅱ诱导细胞与对照组相比无显着变化,200ng/ml、100ng/ml和50ng/ml TNF-α对细胞增殖存在抑制作用,且存在浓度依赖现象;SA-β-gal染色阳性率显示,与对照组相比,Ang Ⅱ在四个浓度下诱导HUVEC的染色阳性率无显着变化,而TNF-α四个浓度均可使HUVEC的SA-β-gal染色阳性率升高;流式检测发现两种药物均可使细胞在G0/G1期聚集,且随诱导浓度的增加,GO/G1期占比随之增加。综上,选择100ng/ml TNF-α为模型诱导药物;2、CCK8法筛选药物无毒浓度分别为:人参皂苷Rgl 50μg/ml;三七皂苷R112.5μg/ml;三七总皂苷50μg/ml;血管抗衰方200μg/ml;3、功能层面,五种干预方式均能显着降低细胞增殖抑制率,提高细胞增殖能力,其中,以三七总皂苷和血管抗衰方效果更为明显;五种干预方式均能显着减少衰老细胞的数量和程度,其中人参皂苷Rg1+三七皂苷R1、三七皂苷R1更为明显;五组干预方式均能显着降低细胞G0/G1期占比,改善细胞周期阻滞,其中三七总皂苷和人参皂苷Rg1效果更为明显;4、在miR-146a/TRAF6/NF-κB通路验证中,五组药物均能降低miR-146a、TRAF6表达水平,五组药物干预后与模型组相比能够降低磷酸化形式的IκBα和磷酸化的p65,对于NF-κB起到一定的抑制作用,对于NF-κB通路下游相关炎症效应分子表达水平的改变具体包括:人参皂苷Rg1、人参皂苷Rg1+三七皂苷R1、三七总皂苷PNS可以降低TNF-α水平,人参皂苷Rg1、三七皂苷R1、血管抗衰方可以降低IL-1β的表达水平,人参皂苷Rg1+三七皂苷R1、血管抗衰方、三七总皂苷PNS可以降低VCAM表达水平;5、对于衰老相关分子标志物p16和p21而言,五组药物均能有效降低p16的表达水平,但对于p21表达水平的降低,以三七皂苷R1、血管抗衰方、三七总皂苷PNS为主发挥效应。结论1、生物信息学方法筛选出衰老血管内皮细胞差异表达miRNA分子为miR-146a,预测并构建miR-146a/TRAF6/NF-κB作为血管衰老炎症相关调控环节;2、血管抗衰方改善血管衰老临床有效,能够改善血管壁僵硬程度、内皮舒缩功能及血液粘稠度,对miR-146a/TRAF6/NF-κB可发挥调控作用,其中以miR-146a和NF-κB改善更为明显;3、血管抗衰方及其重要单体成分或组合形式,可以改善TNF-α诱导的内皮细胞衰老模型,降低衰老相关标志物水平,同时通过改善细胞增殖能力、减少细胞周期阻滞发挥功效;能够显着降低miR-146a和TRAF6表达水平,抑制NF-κB通路激活,降低其下游炎症效应分子表达水平,抑制衰老相关炎症反应。
刘奕清[4]（2021）在《益气活血养阴方调控线粒体能量代谢延缓心脏与主动脉衰老机制初探》文中提出心血管衰老指心脏衰老与血管衰老,是多种急、慢性临床疾病的致病因素,对老年人的生理、心理均产生巨大影响。因此,探索延缓心血管衰老的研究十分重要。近年来研究发现,线粒体在细胞的能量代谢、生物合成和调节细胞程序性死亡等过程中有着重要作用。随着年岁增加,线粒体的完整性、生物能量效率等均下降,产生大量与衰老相关的疾病表型。已有实验证明D-半乳糖可以短时间内诱导亚急性衰老动物模型,其衰老机制及特点与自然衰老类似。前期课题组的研究已证明,益气活血养阴方中部分成分可以延缓自然衰老大鼠、小鼠以及高糖高脂诱导的小鼠心脏、血管老化过程。因此通过构建D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型,探索线粒体能量代谢与心血管衰老之间的关系,并探究益气活血养阴方通过保护线粒体能量代谢功能来延缓心脏与主动脉衰老具有重要意义。第一部分D-半乳糖诱导小鼠心脏与主动脉衰老及益气活血养阴方的干预作用目的:通过构建D-半乳糖诱导的亚急性衰老小鼠模型,观测心脏与主动脉衰老情况及益气活血养阴方的干预作用。方法:通过颈背部注射D-半乳糖（180mg/kg）来构建亚急性衰老小鼠模型,造模2周后分组进行持续10周的药物干预。实验动物随机分为空白对照组、衰老模型组、二甲双胍组、中药低剂量组、中药中剂量组、中药高剂量组。在取材前进行整体实验:旷场试验观察小鼠焦虑状态和活动能力;抓力测试检测分析小鼠的体能状态;激光散斑测试观察小鼠背部微循环血流状态;检测血清中的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性与丙二醛（malondialdehyde,MDA）的含量;HE染色观察心脏、主动脉的形态,分析主动脉的中内膜厚度增减;免疫组化染色观察心脏、主动脉中晚期糖基化终末产物（advanced glycationend products,AGE）、基质金属蛋白酶-2（matrix metalloprotein-2,MMP-2）、抑癌基因P53（tumor suppressor,P53）、血管内皮生长因子 VEGF（vascular endothelial-derived growth factor,VEGF）表达水平;对心脏、主动脉组织的端粒相对长度以及端粒酶活性进行检测。结果:（1）与空白对照组相比,衰老模型组:体重在取材前降低（P<0.05）;旷场实验中,直立次数增多（P<0.05）,穿格个数显着增多（P<0.01）;在抓力测试中,抓力较弱（P<0.05）,其归一化抓力明显减弱（P<0.01）;激光散斑实验中,皮肤血流灌注量减少（P<0.05）;血清中SOD活性明显降低（P<0.01）;MDA含量增加（P<0.05）;小鼠心脏组织中,心肌细胞排列不齐、心肌纤维断裂增多,AGE蛋白表达明显升高（P<0.01）,MMP-2、P53蛋白表达升高（P<0.05）,端粒相对长度明显缩短（P<0.01）;小鼠主动脉组织中,主动脉形态结构异常,中内膜紊乱且增生（P<0.05）,AGE、MMP-2、P53蛋白表达提升（P<0.05）,VEGF蛋白表达明显降低（P<0.01）。（2）与衰老模型组相比,中药中剂量小组小鼠归一化抓力增强（P<0.05）,皮肤血流灌注量增大（P<0.01）,SOD活性增强（P<0.01）,MDA含量降低（P<0.05）;小鼠心脏组织中,心脏形态较为完整,所有给药组AGE蛋白的表达下调（P<0.05）,中药中、高剂量组MMP-2蛋白的表达下调（P<0.01）,中药中、高剂量组P53蛋白的表达下调（P<0.05）,二甲双胍组心脏端粒酶的活性提高（P<0.05）,中药低、中剂量组心脏端粒酶的活性提高（P<0.01）,中药中剂量组端粒相对长度增长（P<0.01）;小鼠主动脉组织中,二甲双胍组、中药低剂量组、中药中剂量组主动脉中内膜厚度减少（P<0.05）,二甲双胍组、中药中剂量组AGE蛋白的表达下调（P<0.05）,中药低剂量组MMP-2蛋白表达下调（P<0.05）,二甲双胍组、中药中剂量组P53蛋白的表达下调（P<0.05）,二甲双胍组、中药中剂量组、中药高剂量组VEGF蛋白的表达上调（P<0.01）。结论:小鼠在经过D-半乳糖注射后形成亚急性衰老状态,亚急性衰老小鼠体内出现心脏和主动脉衰老的表现,即D-半乳糖可以诱导小鼠心脏和主动脉衰老;益气活血养阴方能够改善经D-半乳糖诱导的小鼠心脏与主动脉衰老表现,延缓了心血管衰老的发展。第二部分衰老小鼠心脏与主动脉线粒体能量代谢变化以及益气活血养阴方的保护作用目的:观测D-半乳糖诱导的衰老小鼠体内能量代谢的变化及益气活血养阴方的保护作用。方法:以D-半乳糖诱导衰老小鼠心脏、主动脉组织样本为研究对象。荧光显微镜下观察心脏、主动脉冰冻切片的荧光强度,观测线粒体ROS（Mitochondrial ROS,mtROS）、线粒体膜电位（Mitochondrial membrane potential,MMP）含量,判断线粒体受损情况;采用比色法、微量法检测小鼠心脏组织中线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅲ、Ⅴ活性,采用Western blot法来观测小鼠主动脉组织中复合体I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、V蛋白的表达,以判断线粒体能量代谢功能受损情况。结果:（1）与空白对照组相比,衰老模型组:小鼠心脏组织中,mtROS水平显着增加（P<0.01）、MMP下降（P<0.05）、线粒体复合体I的活性显着降低（P<0.01）,复合体Ⅱ、复合体Ⅲ、复合体Ⅳ、复合体Ⅴ活性均明显下降（P<0.05）;小鼠主动脉组织中,mtROS含量上升（P<0.05）、MMP下降（P<0.05）、复合体I、复合体Ⅳ的蛋白表达显着下降（P<0.01）。（2）与衰老模型组相比,小鼠心脏组织中,二甲双胍组、中药高剂量组mtROS含量显着下降（P<0.01）,中药中剂量组mtROS含量下降（P<0.05）,二甲双胍组、中药低剂量组MMP上升（P<0.01）,二甲双胍组、中药高剂量组线粒体复合体Ⅱ活力提升（P<0.05）,中药中剂量组线粒体复合体Ⅱ活力显着提升（P<0.01）,二甲双胍组、中药低剂量组、中药中剂量组线粒体复合体Ⅲ活力提高（P<0.05）,二甲双胍组、中药中剂量组线粒体复合体Ⅳ活力提高（P<0.05）;小鼠主动脉组织中,二甲双胍组、中药高剂量组mtROS含量下降（P<0.05）,全部中药给药组MMP上升（P<0.05）,二甲双胍组线粒体复合体Ⅰ活力显着升高（P<0.01）,二甲双胍组复合体Ⅱ活力升高（P<0.05）,二甲双胍组、中药高剂量组线粒体复合体Ⅳ活力显着提高（P<0.01）,二甲双胍组、中药中、高剂量组线粒体复合体V活力显着提高（P<0.01）。结论:D-半乳糖诱导的衰老小鼠存在心脏与主动脉线粒体损伤,能量代谢功能下降的改变,可能是致心血管衰老的重要因素;益气活血养阴方可以减少线粒体ROS含量,增高膜电位,提高线粒体能量代谢相关复合体活力,通过保护线粒体能量代谢功能以延缓心脏和主动脉衰老。综合两部分实验结果,可以推测线粒体能量代谢功能失调可能与心血管衰老之间存在密切联系。益气活血养阴方可能通过降低mtROS含量,提高MMP,保护线粒体复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ活性的机制来延缓心脏和主动脉衰老。
王柯诺[5]（2021）在《三类功效成分对真核生物生长和衰老的影响》文中研究表明为研究三类不同功效成分对不同真核生物生长和衰老的影响并对它们的作用效果进行对比,本论文研究选取了维持能量代谢物质（烟酰胺、烟酰胺单核苷酸（NMN）、辅酶Q10）、抗氧化剂（茶多酚、α-硫辛酸、豆甾醇）、膜脂类成分（亚麻酸、亚油酸、大豆卵磷脂）三类功效成分,分别作用单细胞（小球藻、酵母菌、草履虫）和多细胞（拟南芥、黑曲霉、斑马鱼、小白菜）共7种真核生物,通过测定单细胞生物量、动物死亡时间、植物衰老指标,微生物生长曲线、细胞膜脂肪酸变化等指标,研究各功效成分对动物、微生物、植物的生长和衰老的影响,并利用荧光光谱分析和近红外无损检测技术分别研究功效成分对生物自发衰老荧光和有机化合物的影响,建立新型判断生物衰老的方法。主要结果如下:1、单细胞真核生物:（1）能量代谢物质:对于促进三类单细胞的繁殖和抑制衰老,都非常重要。烟酰胺对三种单细胞生物生长和衰老均无效;NMN和辅酶Q10能通过抑制小球藻细胞膜中不饱和脂肪酸亚麻酸、亚油酸占比下降和饱和脂肪酸棕榈酸、硬脂酸占比上升,延缓激发波长630nm,发射波长684nm处荧光的增强,延缓小球藻衰老;NMN能延缓酵母菌衰老,刺激酵母菌、草履虫繁殖;辅酶Q10能刺激草履虫繁殖。（2）抗氧化剂:三类生物需要不同抗氧化剂。α-硫辛酸对三种单细胞生物生长和衰老均无效;茶多酚能促进小球藻生长,延缓其衰老,抑制酵母菌生长;豆甾醇有利于草履虫生长,对其他两种单细胞生物无效。（3）膜脂类成分:混合脂肪酸的磷脂有利生物生长,单一脂肪酸处理对生物有害。亚麻酸抑制酵母菌、小球藻生长,致死草履虫;亚油酸抑制小球藻生长,致死草履虫,对酵母菌生长和衰老无效,可能对细胞膜有破坏作用;大豆卵磷脂能刺激小球藻生长、酵母菌繁殖,还能通过抑制棕榈油酸占比的下降,调控酵母菌细胞膜脂肪酸组成来延缓酵母菌衰老。（4）小球藻中有机化合物和衰老荧光变化与其生物量的相关系数分别为0.83和0.94,相关性强;酵母菌中有机化合物和衰老荧光变化与其生物量的相关系数分别为0.34和0.35,相关性弱;草履虫浓度太稀难以检测。说明可以通过近红外无损检测和荧光光谱分析判断小球藻的衰老情况,不适合检测酵母菌和草履虫。2、模式多细胞真核生物:（1）能量代谢物质:对多细胞生物的刺激生长和防衰效果不如单细胞生物。烟酰胺对三种模式多细胞生物生长和衰老均无效,甚至抑制拟南芥生长;NMN能通过减缓拟南芥中酰胺类、酯类、含硫化合物的降解,稳定亚油酸在拟南芥细胞膜脂肪酸中所占的比重,抑制亚麻酸比例下降和棕榈酸上升,显着延缓拟南芥衰老,但对黑曲霉和斑马鱼氧化应激无效;辅酶Q10也作为一种脂溶抗氧化剂,它能显着延长外源强氧化剂诱导下的斑马鱼存活时间。（2）抗氧化剂:对三类生物有一定毒性,但可延缓强自由基下鱼类死亡。α-硫辛酸抑制黑曲霉生长,致死斑马鱼和拟南芥;茶多酚显着抑制黑曲霉和拟南芥生长,致死斑马鱼;豆甾醇对黑曲霉无效,但能显着延长外源强氧化剂诱导下的斑马鱼存活时间,抑制拟南芥生长。（3）膜脂类成分:膜脂类处理有利曲霉生长和抗衰老,对植物和动物有一定毒性,但可减轻鱼类急性氧化死亡。亚麻酸对黑曲霉无效,致死斑马鱼和拟南芥;亚油酸能促进黑曲霉生长,延缓其衰老效果不佳,能够致死斑马鱼和拟南芥;大豆卵磷脂能显着促进黑曲霉生长,并通过减缓黑曲霉中有机物的降解,稳定油酸在黑曲霉中所占的比重,抑制亚麻酸比例下降和棕榈酸上升,延缓黑曲霉衰老,并能有效促进斑马鱼氧化应激反应,延长存活时间,但致死拟南芥。（4）黑曲霉中有机化合物和衰老荧光变化与菌丝重量的相关系数分别为0.75和-0.89,说明荧光光谱分析相关性强,可以用于判断黑曲霉的衰老情况;拟南芥中波数5187cm-1、6888cm-1处有机化合物和衰老荧光变化与其叶绿素含量的相关系数分别为0.9、0.94和-0.99,相关性极强,可以通过近红外无损检测和荧光光谱分析判断拟南芥的衰老情况。3、小白菜:有利单细胞和模式多细胞的功能成分,对小白菜保鲜效果却不好。找到了两种前面不好的或无效的功效成分却能抑制小白菜衰老,分别是抗氧化剂α-硫辛酸和膜脂类成分亚油酸,能够有效延缓贮藏过程中小白菜可溶性固形物和叶绿素含量的降低和减缓电解质外渗率以及丙二醛含量的上升,通过抑制不饱和脂肪酸亚麻酸的氧化,和抑制棕榈酸水平的上升,调控脂肪酸占比,从而达到对小白菜的抗衰老效果。发射波长229nm,激发波长324nm处的荧光强度变化与小白菜叶绿素含量的相关系数为-0.93,相关性极强,可以作为小白菜衰老情况的判断依据;在波数5187cm-1、6900 cm-1处有机化合物变化与其叶绿素含量相关系数分别为0.70和0.77,相关性较弱,可以通过算法建模判断小白菜衰老。
赵浩名[6]（2021）在《VD3/VDR对小鼠睾丸与肾脏的抗衰老作用评价及机理研究》文中研究指明衰老是一种随着时间推移而出现的人体生理功能退化的自然现象。随着老龄化人口增加,抗衰老机制的探索和抗衰老药物的研发越来越受到社会关注。VD3是一种重要的类固醇衍生物,具有多种生理功能,在骨质疏松症、佝偻病、心脑血管疾病、自身免疫系统疾病、多发性硬化症和癌症等疾病中具有重要作用。近期研究发现,VD3在抗衰老方面具有一定的生物学功能。本课题前期发现VDR-/-小鼠伴有脱毛、体型佝偻、发育迟缓、个体矮小和生殖能力低下等特点,表现出早衰的特征。据此,本研究认为VDR的敲除,阻断了 VD3的利用及生物学功能,进而加速了小鼠衰老。为了进一步阐明VD3/VDR在雄性生殖系统中的作用和抗衰老机制,本研究对6月龄与12月龄WT和VDR-/-小鼠睾丸组织进行转录组分析,以期获得受VD3/VDR调控的衰老相关基因,为抗衰老研究提供新的靶点,并为VD3功能进一步开发提供新的思路。在获得的转录组分析数据基础上,为了进一步研究VD3/VDR对小鼠睾丸与肾脏的抗衰老作用,本研究构建D-半乳糖（D-Gal）衰老模型小鼠。基于动物模型,结合组织形态观察、病理学检测及衰老相关生化指标检测分析了 VD3/VDR对雄性小鼠生殖系统的抗衰老作用。最终,本研究结合VDR-/-小鼠睾丸组织转录组数据、VD3的抗衰老作用评价及衰老相关信号通路的分子水平分析,进行了 VD3/VDR对小鼠睾丸与肾脏的抗衰老机制探索,为抗衰老领域的研究提供一定的数据补充与借鉴。本研究获得以下实验结果:1.VDR敲除雄鼠血清、睾丸及肾脏中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）活力下降;睾丸转录组分析筛选衰老相关基因,获得受VDR影响的DNA损伤修复相关基因p53结合蛋白1（53BP1）和乳腺癌1号基因（BRCA1）,炎症因子白细胞介素-1（IL-1）和白细胞介素-2（IL-2）,氧化应激相关基因核因子E2相关因子2（Nrf2）和NADPH氧化酶4（Nox4）,细胞增殖相关基因p16、p21及p53。VDR可能通过介导DNA损伤修复、炎症及氧化应激相关基因表达,进而延缓小鼠生殖系统衰老。2.构建D-Gal亚急性衰老小鼠模型,验证VD3在小鼠睾丸和肾脏中的抗衰老作用。D-Gal处理小鼠体重增长缓慢,脏器系数降低,睾丸与肾脏组织衰老现象明显,抗氧化相关酶系水平均显着下降,表明D-Gal衰老小鼠模型构建成功;VD3处理组小鼠睾丸和肾脏组织受到的损伤减轻,抗氧化相关酶系水平均显着升高,表明VD3延缓小鼠生殖系统衰老。3.VD3促进衰老小鼠睾丸和肾脏中VDR的表达;VDR抑制细胞增殖相关基因p16、p21及p53的表达;VDR促进DNA损伤修复相关基因53BP1和BRCA1的表达;VDR抑制炎症因子IL-1和IL-2的表达;VDR抑制氧化应激相关基因Nrf2和Nox4的表达。推测VDR可能通过促进DNA损伤修复、抑制炎症反应及氧化应激过程,进而延缓小鼠生殖系统衰老。
杨君君[7]（2021）在《天然食材来源的抗氧化剂参与调控骨性关节炎氧化应激的相关研究》文中研究表明研究背景骨性关节炎（osteoarthritis,OA）与基因、代谢紊乱、饮食作息、肥胖、长期体力劳动及既往关节损伤等多因素相关,发病机理不明从而使其治疗受限。间充质干细胞（mesenchymal stem cell,MSC）可选用关节腔输注手段,进入OA关节腔内,发挥其多向分化优势及旁分泌功能,但易受到局部组织微环境的干扰导致其治疗作用下降。越来越多的基础研究表明:氧化应激参与了OA发病的病理生理过程;长期摄入抗氧化剂丰富的食材（大蒜、西兰花及番茄等）有利于延缓OA的进程;MSCs关节腔注射治疗OA效果不佳可能与关节腔内过多的活性氧导致MSCs存活受限有密切联系。因此,本研究选取了来源于这些天然食材的具有抗氧化功能的生物活性物质（大蒜素、萝卜硫素及番茄红素）,并选用目前研究较为广泛的抗氧化剂N-乙酰-L-半胱氨酸（N-Acetyl-L-cysteine,NAC）作为经典对照,来探索这一系列抗氧化剂对OA的调控治疗效果、对MSCs关节腔注射治疗OA的影响及其可能相关的机制。研究目的本研究通过选取大鼠脂肪干细胞系、提取人或大鼠OA软骨细胞及建立大鼠OA模型,探讨大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人或大鼠OA软骨细胞表型影响、大鼠OA的治疗效果、大鼠脂肪干细胞表型变化及MSCs关节腔注射疗法治疗大鼠OA的疗效的作用与分子机制。研究方法第一部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人OA骨软骨组织及软骨细胞表型影响1.人OA软骨细胞的分离提取与培养提取、培养并扩增人OA软骨细胞,选用P1代人OA软骨细胞作为实验细胞,显微镜下进行拍照观察,HE、阿尔新蓝、Safranine O及COL 2荧光染色鉴定;2.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人OA软骨细胞活性的影响采用CCK-8法检测不同梯度浓度大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸对人OA软骨细胞活性的影响,并初步确定后续实验所用的药物浓度。根据CCK-8法初步筛选浓度后,于光学显微镜下检测细胞状态有无改变,并再次用Calcein-AM/PI双染检测药物处理人OA软骨细胞后细胞的存活状态;3.采用H2O2诱导体外实验中的氧化应激状态选取200μM H2O2（用培养基进行梯度稀释）对骨软骨组织和软骨细胞进行诱导,诱导8 h,即完成体外氧化应激状态的诱导;4.人骨软骨组织的获取及其处理用电钻将人骨软骨组织从全膝关节置换术的关节样本中分离并加入含有H2O2的培养基中完成氧化应激诱导,吸除原培养基后再加入含抗氧化剂的培养基中进行处理。处理完成后,固定脱钙包埋,石蜡切片,采用HE、番红O及甲苯胺蓝染色检测骨软骨组织的形态及其细胞外基质的表达;5.人OA软骨细胞的处理在人OA软骨细胞中加入含有H2O2的培养基完成氧化应激的诱导,吸除诱导培养基后再加入含抗氧化剂的培养基中处理。完成处理后,准备进行以下检测:CCK-8、光学显微镜、HE染色及流式细胞仪:检测细胞形态及凋亡比例;阿尔新蓝及Safranine O染色:检测ACAN表达;免疫荧光、Western-Blot及qPCR:COL X、iNOS、COL 2、ACAN、SOX-9、COL1、i NOS、IL-6、TNF-α、MMP-13及Nrf2的表达;ELISA检测上清IL-6、TNF-α及MMP-13含量;qPCR检测细胞中GPX1、NOX-4、GPX3、GPX4、IL-1β、SOD1、CAT、GST、ADAMTS-5及COX-2的表达;6.抗氧化剂调控人OA软骨细胞的通路研究采用全反式维甲酸抑制细胞中Nrf2的表达,在抗氧化剂添加或不添加Nrf2抑制剂的情况下按照上述方法同样处理人OA软骨细胞。Western-Blot检测细胞Keap1、p-Nrf2、Nrf2、COL 2、SOX-9、i NOS及IL-6的含量;第二部分:膝关节腔注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠OA的治疗效果1.大鼠软骨细胞的分离提取与培养提取分离大鼠软骨细胞并选用P1代大鼠软骨细胞作为本部分实验所需细胞,显微镜下进行拍照观察;2.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠软骨细胞的活性影响CCK-8法检测在第一部分使用的抗氧化剂的浓度对大鼠软骨细胞有无生物学毒性及副作用,估算后续关节腔注射实验所用的药物浓度;3.大鼠膝OA造模及大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸的膝关节腔注射采用前交叉韧带切除术（ACLT）对大鼠膝关节进行OA造模（手术4周后完成造模）。造模完成后,于大鼠关节腔内注射抗氧化剂（1次/周;5周）;4.大鼠膝关节组织学切片染色完成注射后,获取大鼠膝关节样本,固定脱钙包埋,石蜡切片。HE染色检测软骨形态及其周围基质情况;Safranine O-Fast green与COL 2染色检测关节软骨中蛋白多糖及COL 2;第三部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞表型的影响1.大鼠脂肪干细胞的培养购买大鼠脂肪干细胞系,体外培养并扩增,选用P7代脂肪干细胞作为实验细胞;2.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞活性的影响采用CCK-8法检测不同梯度浓度大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸对大鼠脂肪干细胞活性的影响,并初步估计后续实验所用的药物浓度;3.采用H2O2诱导体外实验中的氧化应激状态选取200μM H2O2进行诱导8 h,即完成氧化应激状态的诱导;4.大鼠脂肪干细胞的处理在大鼠脂肪干细胞中加入含有H2O2的培养基完成氧化应激的诱导,吸除诱导培养基后再加入含抗氧化剂的培养基处理。完成处理后,检测细胞中i NOS、p53、C-caspase3、SOX-9、COL 2、ACAN、RUNX2、IL-6、TNF-α及MMP-13蛋白的表达;上清中IL-6、TNF-α及MMP-13的含量;大鼠脂肪干细胞增殖、迁移与分化能力的变化;大鼠脂肪干细胞活性氧的含量变化;第四部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞在关节腔内生存情况及其对大鼠OA的治疗效果的研究1.大鼠ADSCs的标记采用近红外光染料Di R对大鼠脂肪干细胞进行标记;2.大鼠OA造模及抗氧化剂与抗氧化剂+ADSCs膝关节腔注射采用ACLT对大鼠膝关节进行OA造模（手术4周后完成造模）。造模完成后,于大鼠关节腔内注射抗氧化剂+Di R标记的大鼠脂肪干细胞。对于ADSCs存活实验,完成第一次注射后,注射后第3天用活体成像仪器检测大鼠脂肪干细胞在关节腔内存活情况;对于治疗效果实验,1次/周,持续5周,完成注射治疗后进行取材;3.大鼠膝关节组织学切片染色完成注射后,获取大鼠膝关节样本,固定脱钙包埋,石蜡切片。HE染色检测软骨形态及其周围基质情况;Safranine O-Fast green与COL 2染色检测关节软骨中蛋白多糖及COL 2;研究结果第一部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人OA骨软骨组织及软骨细胞表型影响1.提取人OA软骨细胞生长状态良好,呈典型的铺路石样。阿尔新蓝、番红O染色及COL 2免疫荧光染色提示提取的细胞表达较多的蛋白多糖与COL 2;2.CCK-8结果提示:大蒜素在31μM、萝卜硫素在7μM、番茄红素在1.2μM及N-乙酰-L-半胱氨酸在31μM对人OA软骨细胞活性无明显影响。光学显微镜下形态及Calcein-AM/PI染色进一步证实,抗氧化剂对人OA软骨细胞活性无明显影响;3.HE、番红O及阿尔新蓝染色结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人骨软骨组织的表面不规则,蛋白多糖降解较多;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,骨软骨组织的形态相对完整,蛋白多糖表达稍多;4.相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞核浓缩,细胞间连接与细胞外基质含量明显减少;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞核形态稍恢复,细胞间连接和细胞外基质表达相对增多。流式细胞检测计数提示:相比正常组（0.76±0.09%）,H2O2处理后,人OA软骨细胞凋亡比例明显升高（12.48±0.55%）;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的凋亡比例降低（大蒜素:0.94±0.22%）（萝卜硫素:1.46±0.15%）（番茄红素:1.21±0.16%）（N-乙酰-L-半胱氨酸:1.04±0.14%）。CCK-8提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞活性明显下降;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞活性稍增加。5.免疫荧光染色及Western-Blot结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞的i NOS表达含量明显升高;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的i NOS表达含量减少;6.qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞的抗氧化酶（GPX1、GPX3、GPX4、SOD1、CAT及GST）与Nrf2的表达含量明显下降,NOX-4的表达明显上升;相比H2O2组,人OA软骨细胞的绝大多数抗氧化酶与Nrf2的表达含量明显上升,NOX-4的表达明显下降;（相比H2O2组,GPX1在大蒜素组、GPX1与GST在萝卜硫素组、GPX3在番茄红素组及GPX1与SOD1在N-乙酰-L-半胱氨酸无明显变化）7.阿尔新蓝、番红O与软骨标志物免疫荧光染色、Western-Blot及qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞的COL 2、SOX-9及ACAN表达含量明显下降;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的COL 2、SOX-9及ACAN表达含量明显上升;8.免疫荧光染色、ELISA、Western-Blot及qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞IL-6、TNF-α及MMP-13表达含量明显上升;相比H2O2组,加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的IL-6、TNF-α及MMP-13表达含量明显下降;9.qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞IL-1β、ADAMTS-5与COX-2表达含量明显上升;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的IL-1β、ADAMTS-5与COX-2表达含量明显下降;10.免疫荧光染色、Western-Blot及qPCR结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞COL X表达含量明显上升,COL 1表达无明显变化;相比H2O2组,加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞COL X表达含量明显下降,COL 1表达无明显变化;11.荧光染色及Western-Blot提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞的Keap1、Nrf2及p-Nrf2的表达含量无明显变化;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,人OA软骨细胞的Keap1表达含量明显下降,Nrf2及p-Nrf2表达含量明显上升;12.通路实验中,Western-Blot结果提示:相比正常组,H2O2处理后,人OA软骨细胞Keap1与Nrf2表达无明显变化,SOX-9与COL2表达下降,IL-6与i NOS表达上升;相比H2O2组,加入抗氧化剂及Nrf2抑制剂后,人OA软骨细胞Keap1表达稍下降,Nrf2及p-Nrf2表达含量下降,SOX-9、COL2、IL-6与i NOS表达无明显变化;第二部分:膝关节腔注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠OA的缓解效果1.提取的大鼠软骨细胞生长状态良好,呈典型的多边型铺样,形态均一;2.CCK-8结果提示:大蒜素在31μM、萝卜硫素在7μM、番茄红素在1.2μM及N-乙酰-L-半胱氨酸在31μM对大鼠OA软骨细胞活性无明显影响;3.HE、Safranine O-Fast green及COL 2免疫组化染色结果提示:相比正常大鼠,ACLT造模的OA大鼠软骨表面不光滑,蛋白多糖与COL 2表达较少;相比OA大鼠,关节腔内抗氧化剂注射后的软骨表面稍平整,蛋白多糖与COL 2相对增多;第三部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞表型的影响1.购买的大鼠脂肪干细胞系生长状态良好,呈典型的漩涡样生长,呈长梭状;2.CCK-8结果提示:大蒜素在31μM、萝卜硫素在7μM、番茄红素在1.2μM及N-乙酰-L-半胱氨酸在31μM对大鼠脂肪干细胞活性无明显影响;3.免疫荧光染色及Western-Blot结果提示:相比正常组,H2O2处理后,大鼠脂肪干细胞的i NOS、p53、C-caspase3、IL-6、TNF-α、MMP-13、RUNX2表达含量上升,ACAN、SOX-9与COL 2表达下降;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,大鼠脂肪干细胞的i NOS、p53、C-caspase3、IL-6、TNF-α、MMP-13、RUNX2表达含量下降,ACAN、SOX-9与COL 2表达上升;4.ELISA结果提示:相比正常组,H2O2处理后,大鼠脂肪干细胞的IL-6、TNF-α及MMP-13表达含量明显上升;相比H2O2组,在加入抗氧化剂后,大鼠脂肪干细胞的IL-6、TNF-α及MMP-13表达含量明显下降;5.H2O2组大鼠脂肪干细胞的成骨与成软骨分化能力减弱,成脂分化能力增强,大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸组中的“矿化的钙结节”与蛋白多糖增多,而脂肪空泡减少;H2O2组大鼠脂肪干细胞的增殖与迁移能力减弱,大蒜素、萝卜硫素、番茄红素及N-乙酰-L-半胱氨酸组中迁移与增殖的细胞数量较多;第四部分:大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞在关节腔内生存及其作为干细胞的混悬液对大鼠OA的治疗效果的研究1.Di R标记后的大鼠脂肪干细胞生长状态活跃,显微镜下细胞膜标记良好;2.活体成像结果提示:相比未协同注射抗氧化剂OA大鼠,在协同注射抗氧化剂后,Di R标记后的大鼠脂肪干细胞在OA大鼠关节腔内存活数量明显增多;3.大鼠膝关节石蜡切片HE、番红-固绿及COL 2免疫组化染色结果提示:相比正常大鼠,OA大鼠与未协同注射抗氧化剂OA大鼠软骨表面不光滑,蛋白多糖与COL 2表达较少;相比未协同注射抗氧化剂OA大鼠,在协同注射抗氧化剂后,大鼠软骨表面稍平整,蛋白多糖与COL 2表达相对增多;研究结论1.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素通过激活Keap1/Nrf2通路降低H2O2诱导后的人OA软骨细胞的氧化应激水平、提高抗氧化酶的表达、抑制炎症因子的表达、改善软骨相关表型及缓解软骨细胞肥大化的影响;2.关节腔内注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素可有效缓解大鼠OA的进展;3.大蒜素、萝卜硫素及番茄红素降低H2O2诱导后的大鼠脂肪干细胞的氧化应激水平、抑制炎症因子的表达、改善成软骨分化及缓解干细胞凋亡衰老与肥大化的影响;4.关节腔内注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素可保护大鼠脂肪干细胞在OA大鼠关节腔内的存活,并可能有助于干细胞的注射治疗OA的效果;
岳燕[8]（2021）在《退休精神：上海老年学习团队带领人角色认同的多个案研究》文中进行了进一步梳理伴随人类平均预期寿命的提升和生育率的下降,老龄化问题已然成为全球共同面临的命题。城市老年人不但有物质养老保障的诉求,还有精神文化的渴求,老年教育机构“一座难求”的现象屡见不鲜。老年团队学习作为一种老年人自我教育与学习、自主组织与管理、灵活弹性的老年学习方式,可以有效缓解老年教育机构的这一困境。老年学习团队的核心人物——“带领人”不仅是老年学习者一员,更担负着组建与管理团队、帮教团员等重要使命。为此,从社会学的视角,理解老年学习团队带领人是如何构建角色认同的,其角色认同的特征是什么,进而探究优秀老年学习团队带领人“成为”团队领袖历程中的角色认同机制,探究其在退休后角色再造中所体现的人的终身发展的主体性,以及从中升华的退休精神,是本文的核心研究问题。斯特赖克（Stryker）的角色认同理论被用来解释人们在社会结构中所占据的象征符号及与之相关的意义诠释。角色认同显着性（Identity Salience）也是Stryker的关注焦点。本文以Stryker角色认同理论为视野,运用质性研究方法,通过访谈、参与式观察收集所甄选的六位上海老年学习团队带领人个案的数据资料并进行编码,从身份承诺、他人支持、内外奖赏、角色投入四个维度叙事带领人建构“老年教育者”角色认同显着性的图景,再结合带领人角色认同的分析框架即角色认知、角色情感、角色互动三个层面跨个例诠释不同带领人角色认同的特征,形塑老年教育者、终身学习者、组织活动者、团队管理者、志愿服务者、智慧长者等多重角色身份,形成带领人自我标定内在化即自我角色认同与社会角色认同的一致,回应了带领人通过角色认同占据某一社会位置的角色认知、角色扮演、角色执行过程。由此进一步揭示带领人角色认同的机理与本质。基于个案叙事和跨个案分析,本论文得出以下研究结论。带领人角色认同的建构过程和特征。主要概括为个体角色认知、“工作”角色情感、角色行为与互动三个层面。带领人从中形成了共通的角色认同特征:即协调团队成员,注重情感交汇;乐于奉献,具有志愿精神;上情下达,成为沟通桥梁;技艺见长,成长为老年教育者;处事见强,形成智慧积淀;各异的角色认同风格:强技艺专业特色型、强兴趣共同爱好型、强运营重视制度安排型三种。形成角色认同社会化的角色集合。主要表现为带领人价值观社会化构建社会认同,带领人组建团队学习活动强化社区（机构）认同,带领人终身学习促动自我角色认同三方面。带领人角色社会化体现为（PSPCLM）角色集合,它是带领人构建社会认同的依据;带领人的人际关系社会化表现为其自身与个体、团队、团队管理方、指导教师、赞助者、社区等利益相关方形成的多元互动体,它是带领人强化社区（机构）认同的依据;带领人作为团队发展的“粘合剂”,争取外援的“主心骨”是其促动自我角色认同的依据。带领人角色认同的机理。角色认知、角色情感、角色互动三者的互动整合。其中角色认知是角色认同的基础,角色情感是角色认同的依据,角色互动是角色认同的动力。带领人角色认同具有个体主体性和社会结构性。角色认同的个体主体性主要表现为人本主义:角色认同促进老年人终身学习、彰显人的全面发展、体现退休精神的伦理价值;角色认同的社会结构性主要表现为对老年教育的启示:角色认同昭示老年教育的外因内化作用、弥合老年教育的价值冲突、挖掘老年教育的智慧价值。在带领人实现角色认同,体现退休精神的过程中则酝酿、沉淀、生成了智慧,它外显于为人处事、对待得失的超然态度,内修于涵泳道德,润泽文明的内心平静。由此重新诠释了老年学习团队带领人角色认同的定义和退休精神的内涵。本研究拓展了角色认同理论跨学科应用的场域,展示了老年学习团队带领人的退休精神,对老年教育的理论内涵有了进一步探究,提出了培育老年学习团队带领人的建议。
汪子铃[9]（2021）在《人参皂苷Rg1调控Keap1-NRF2-ARE通路延缓骨髓间充质干细胞衰老的机制研究》文中研究表明目的:间充质干细胞作为组织工程与细胞工程的种子细胞倍受人们关注。近年来,间充质干细胞移植在再生医学研究领域中已取得了突破性进展,且在很多疾病的治疗中应用。研究证明,间充质干细胞在移植过程中会发生快速衰老,进而导致其干性逐渐丧失,移植细胞不能增殖分化为功能细胞,最终不能达到理想的治疗效果。因此,探讨调控间充质干细胞衰老的机制不仅有重要的理论意义,也有临床移植应用的潜在价值。人参是传统中药的“补气”良方,人参皂苷是人参的重要药效成分,其单体皂苷组分很多,作用也不尽相同。研究证明,人参皂苷具有多种药理学功能,包括抗肿瘤,抗氧化,抗炎症,促进新陈代谢,调控细胞增殖与分化等。课题组前期研究证明,人参皂苷Rg1是人参中重要的抗衰老单体,它能拮抗氧化致衰剂对多种组织细胞和器官的损伤,有显着延缓器官和细胞衰老的功效,推测其机制与减轻氧化应激损伤密切相关。我们最新研究表明,人参皂苷Rg1能促进骨髓间充质干细胞增殖与分化,且能延缓其衰老,但机制有待诠释。干细胞不是“长生不老”的细胞。研究证明,随着年龄增加,干细胞也会逐渐发生衰老,干细胞衰老将导致组织细胞更新障碍,甚至发生异常增殖与分化,进而伴随相关老年性疾病的发生与发展。因而在衰老生物学和延缓衰老的研究中要高度重视利用干细胞的最新研究成果。干细胞最新衰老理论认为,Keap1-NRF2-ARE通路是调控干细胞氧化应激性衰老的关键途径。本文以小鼠骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）为研究对象,探讨人参皂苷Rg1调控Keap1-NRF2-ARE抗氧化信号通路与延缓BM-MSCs衰老的机制。研究旨在为阐释祖国医学的“气血理论”与干细胞衰老学说提供新的理论依据;为搭建干细胞衰老研究新平台提供新的技术支撑;为人参皂苷Rg1用于防治老年性疾病提供理论与实验室依据。方法:1.BM-MSCs培养和鉴定:采集小鼠骨髓,分离骨髓单个核细胞,体外贴壁培养,传代纯化贴壁细胞。流式细胞术测定BM-MSCs表面抗原标志物（包括:CD34、CD45、HLA-DR、CD29和CD44）。2.人参皂苷Rg1体外拮抗D-gal对BM-MSCs的致衰老作用与机制研究:D-gal构建BM-MSCs体外衰老模型,加入人参皂苷Rg1干预致衰老过程。采用免疫荧光法和Western blot法检测BM-MSCs的DNA损伤情况;采用衰老相关-β-半乳糖苷酶（SA-β-gal）染色及Western blot法检测BM-MSCs衰老特异性酶和衰老相关蛋白（P51,P21）表达;采用实时荧光定量PCR技术（RT-PCR）检测BM-MSCs衰老相关分泌表型（SASP）;Ed U法检测细胞增殖情况;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡情况;成纤维细胞集落（CFU-F）形成实验检测细胞克隆增殖能力。3.人参皂苷Rg1体内拮抗D-gal对小鼠重要器官的保护作用研究:选用野生型C57BL/6J小鼠及NRF2-/-型C57BL/6J小鼠,随机分为四组（正常组,Rg1组,D-gal组,Rg1+D-gal组）,采用D-gal体内注射构建衰老小鼠模型,建模过程中腹腔注射人参皂苷Rg1干预致衰过程,观察Rg1对D-gal致衰老小鼠心脏、肝脏和肺组织的保护作用;SA-β-gal染色检测器官衰老水平;Western blot法检测器官衰老相关蛋白（p-P53,P53,P21,P16）表达;免疫荧光及Western blot法检测DNA损伤应答标记物γ-H2AX表达;RT-PCR检测器官中SASP表达情况。4.构建D-gal体外与体内诱导BM-MSCs衰老模型,采用人参皂苷Rg1干预致衰过程,检测相关指标:采用免疫荧光及Western blot法检测细胞及组织中NRF2蛋白表达;Western blot法检测NRF2下游靶标（GCLC,GCLM,HO-1和NQO1）的表达量;RT-PCR检测NRF2下游靶基因（Srx,NQO1和GSTA1）的相对表达量;SA-β-gal染色法检测BM-MSCs衰老细胞比例;Western blot法检测细胞衰老相关蛋白（P21和P16）的表达量;DCFH-DA荧光染色法检测BMMSCs中ROS含量;ELISA检测小鼠血清中氧化与抗氧化相关指标（包括:CAT,SOD,8-OHd G,MDA和4-HNE）。5.构建D-gal体外与体内诱导BM-MSCs衰老模型,采用人参皂苷Rg1干预致衰过程,检测相关指标:采用免疫荧光及Western blot法检测细胞及器官中Keap1蛋白表达情况;Western blot法检测细胞内自噬及P62依赖相关自噬途径调控Keap1的降解情况;采用Western blot法、免疫荧光法、DCFH-DA荧光染色法、CFU-F形成实验检测PI3K-Akt信号通路在人参皂苷Rg1激活NRF2活性中的作用。结果:1.成功分离、培养和鉴定出BM-MSCs:贴壁纯化后的细胞表达BMMSCs抗原标志物CD29和CD44,不表达CD34、CD45、HLA-DR。证明研究成功分离获得小鼠BM-MSCs。2.人参皂苷Rg1在体外能拮抗D-gal对BM-MSCs的致衰老作用:人参皂苷Rg1可以有效降低BM-MSCs的DNA损伤反应标志物γ-H2AX和衰老标志物P16和P21蛋白表达水平;人参皂苷Rg1可以减少D-gal致衰老BM-MSCs中SA-β-gal染色阳性细胞数量和降低SASP分泌能力;人参皂苷Rg1可以提高致衰BM-MSCs生成CFU-F能力;人参皂苷Rg1可以降低BM-MSCs中ROS水平;人参皂苷Rg1可以提高BM-MSCs增殖能力和抗氧化酶SOD2,CAT和HO-1的表达水平。3.人参皂苷Rg1能拮抗D-gal诱导所致器官损伤与衰老:人参皂苷Rg1可减轻D-gal致衰所致心脏、肝脏和肺组织的损伤,并延缓其衰老进程。人参皂苷Rg1能降低心脏、肝脏和肺脏中DNA损伤反应标志物γ-H2AX的蛋白表达水平和下调衰老标志物P16和P21蛋白表达水平;人参皂苷Rg1能减少器官中SA-β-gal阳性细胞数量和降低SASP分泌能力;人参皂苷Rg1可降低致衰小鼠血清中氧化损伤产物MDA、8-OHd G和4-HNE的积累,同时增加抗氧化物质SOD及TAC活性。4.人参皂苷Rg1通过激活NRF2转录因子减轻D-gal致衰老作用:（1）人参皂苷Rg1干预衰老过程可增加BM-MSCs的NRF2表达量,并激活NRF2转录因子活性,进而促进NRF2由胞质向胞核转位;人参皂苷Rg1干预衰老过程可增加NRF2下游靶蛋白（GCLC,GCLM,HO-1和NQO1）和靶基因（Srx,NQO1和GSTA1）表达;NRF2抑制剂（ML385,Brusatol）能阻滞Rg1拮抗D-gal对BM-MSCs的致衰老作用;能阻断Rg1降低SA-β-gal活性的作用;能拮抗Rg1对衰老相关蛋白（P16,P21）表达下调的作用;能降低Rg1对SASP分泌能力的抑制作用;也能减少Rg1对ROS生成的抑制作用。（2）用NRF2-/-小鼠验证NRF2转录因子在Rg1拮抗D-gal致衰老中的作用:NRF2基因缺失能阻断Rg1对DNA损伤的保护作用:能增高DNA损伤反应标志物γ-H2AX表达;能阻滞Rg1拮抗D-gal对BM-MSCs的致衰老作用,表现为SA-β-gal阳性细胞数量增高;能降低抗氧化蛋白（GCLC,GCLM,HO-1和NQO1）的表达量;能增高衰老相关蛋白（P16和P21）的表达。5.人参皂苷Rg1通过PI3K-AKT信号通路调控P62依赖性自噬增强所致Keap1降解,促进NRF2表达和提高其活性:（1）人参皂苷Rg1通过P62蛋白依赖性自噬增强Keap1降解。人参皂苷Rg1可减少BM-MSCs中Keap1蛋白的表达量;蛋白酶体抑制剂（MG-132）不能阻滞Rg1对Keap1蛋白表达的抑制作用;自噬抑制剂（3-MA,CQ）可以抑制Rg1下调Keap1蛋白表达的作用,提示人参皂苷Rg1下调Keap1表达可能通过自噬降解所介导。P62抑制剂（XRK3F2）能阻滞人参皂苷Rg1对NRF2蛋白和Keap1蛋白的调节作用,即增加了Keap1蛋白表达,降低了NRF2蛋白表达;P62抑制剂（XRK3F2）能拮抗人参皂苷Rg1对衰老相关蛋白表达的抑制作用:增加了P16和P21蛋白表达。（2）人参皂苷Rg1干预致衰过程,可增加BM-MSCs中磷酸化Akt（T380,S473）的活性,降低BM-MSCs中磷酸化S6蛋白的表达。LY294002（PI3K抑制剂）和Rg1联合处理BM-MSCs,能减少LC3-Ⅰ向LC3-II的转化;能阻滞人参皂苷Rg1对BM-MSCs产生ROS的降低作用;能抑制人参皂苷Rg1对BM-MSCs克隆形成能力的保护作用;能逆转人参皂苷Rg1干预后降低了BM-MSCs中衰老蛋白（P16,P21）表达;能减少SA-β-gal染色阳性的细胞数量。结论:1.成功分离和鉴定出符合国际标准的小鼠BM-MSCs;2.人参皂苷Rg1能拮抗氧化致衰剂对BM-MSCs的致衰老作用;3.人参皂苷Rg1能拮抗氧化致衰剂对重要器官的致衰老作用;4.人参皂苷Rg1拮抗氧化致衰剂对BM-MSCs与器官的致衰老作用与减轻氧化应激损伤密切相关。5.人参皂苷Rg1能通过调控NRF2与PI3K/Akt抗氧化信号通路,减轻BM-MSCs的氧化应激损伤,进而延缓细胞衰老。
谢雅[10]（2021）在《头顶一颗珠通过Pink1/Parkin介导的线粒体自噬对D-gal诱导的衰老大鼠学习记忆的影响及机制研究》文中认为目的:通过D-半乳糖（D-galactose,D-gal）建立衰老大鼠模型,用头顶一颗珠（Trilliumtschonoskii Maxim,TTM）的提取物进行干预处理,观察Pink1/Parkin介导的线粒体自噬对衰老大鼠学习记忆的影响及机制。方法:50只SD大鼠按随机数字法平分为5组,每组10只,分别为正常对照组、模型组、头顶一颗珠低、中、高剂量组。对模型组、头顶一颗珠低、中、高剂量组的大鼠分别每日经皮下注射100mg/kg D-gal构建大鼠脑衰老模型。头顶一颗珠低、中、高剂量组每日同时分别50、100、200mg/kg头顶一颗珠提取物进行灌胃。正常对照组与模型组用同样体积的双蒸水进行灌胃,共42日。第37日开始利用水迷宫实验检测衰老大鼠学习记忆的能力;HE染色检测衰老大鼠海马组织的形态变化;尼氏染色观察大鼠海马神经元形态的变化;免疫组化观察海马组织中Pink1、Parkin的表达;免疫印迹法（Western Blot）观察海马组织内Pink1、Parkin、P62、LC3和Beclin1的表达情况。结果:1.Morris水迷宫检测结果:与对照组比较,模型组大鼠逃避潜伏期时间明显延长（P<0.05）,穿越平台次数与第三象限停留时间明显减少（P<0.05）。与模型组比较,头顶一颗珠各剂量组大鼠逃避潜伏期时间明显减少（P<0.05）,穿越平台次数与第三象限停留时间明显增加（P<0.05）。2.形态学检测结果:（1）海马组织切片HE染色结果:对照组海马神经元数量丰富、排列整齐、胞质丰富、胞核饱满;模型组内神经元排列分散、疏松,有较多细胞核缩小,有空泡化现象;头顶一颗珠各剂量组与模型组相比,神经细胞增加明显,且细胞损伤性改变有所改善。（2）海马组织Pink1、Parkin免疫组织化学结果:与对照组比较,模型组大鼠海马组织中Pink1、Parkin阳性表达颗粒明显减少。与模型组比较,头顶一颗珠各剂量组大鼠海马组织中Pink1、Parkin阳性表达颗粒明显增加。（3）海马组织尼氏染色结果:模型组大鼠与正常组大鼠相比,其海马组织内CA1区尼氏小体的数量明显减少,且其排列不整齐,着色较浅,其胞体之间的间隔较大;而头顶一颗珠低、中、高剂量组大鼠与模型组相比,其海马组织内CA1区尼氏小体的数量明显增加,且其排列相对整齐,着色较深,其胞体之间的间隔较小。3.Western Blot检测结果:与对照组比较,模型组大鼠海马组织中的P62表达明显增加,LC3、Beclin1的表达明显减少（P<0.05）;与模型组比较,头顶一颗珠低、中、高剂量组的P62表达明显减少,LC3、Beclin1的表达明显增加（P<0.05）。与对照组比较,模型组大鼠海马中的Pink1、Parkin的表达明显减少（P<0.05）;与模型组比较,头顶一颗珠低、中、高剂量组Pink1、Parkin的表达明显增加（P<0.05）。结论:头顶一颗珠可提高衰老大鼠在Morris水迷宫各项测试中的成绩,可一定程度改善D-gal所致衰老大鼠学习记忆的能力,其机制可能与提高Pink1、Parkin蛋白的表达、激活线粒体自噬有关。
二、科学的突破是否延缓我们的衰老?（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、科学的突破是否延缓我们的衰老?（论文提纲范文）
（1）苹果C2H2型锌指蛋白MdZAT10调控叶片衰老和干旱胁迫的机理研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 1 前言 |
| 1.1 叶片衰老 |
| 1.1.1 叶片衰老的特征 |
| 1.1.2 影响叶片衰老的因素 |
| 1.1.2.1 叶龄与生殖发育 |
| 1.1.2.2 植物激素与叶片衰老 |
| 1.1.2.3 茉莉酸信号通路与叶片衰老 |
| 1.1.2.4 环境因素与叶片衰老 |
| 1.1.3 苹果与叶片衰老 |
| 1.2 植物C2H2 型锌指蛋白 |
| 1.2.1 植物C2H2 型锌指蛋白的研究进展 |
| 1.2.2 植物C2H2 型锌指蛋白的功能 |
| 1.3 BTB-TAZ蛋白 |
| 1.3.1 泛素连接酶复合体 |
| 1.3.2 BTB-TAZ蛋白的功能 |
| 1.4 bZIP转录因子 |
| 1.4.1 bZIP转录因子简介 |
| 1.4.2 ABI5 的研究进展 |
| 1.5 干旱胁迫 |
| 1.5.1 植物与干旱胁迫 |
| 1.5.2 转录因子在干旱胁迫中的作用 |
| 1.5.3 干旱胁迫与ABA |
| 1.6 研究目的及意义 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 植物材料 |
| 2.1.2 菌株 |
| 2.1.3 载体 |
| 2.1.4 试剂和药品 |
| 2.1.5 引物 |
| 2.1.6 培养基配方 |
| 2.1.7 抗生素 |
| 2.1.8 溶液和缓冲液 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 基因的克隆 |
| 2.2.2 PCR产物回收 |
| 2.2.3 连接反应 |
| 2.2.4 大肠杆菌感受态细胞的转化 |
| 2.2.5 质粒的提取 |
| 2.2.6 质粒DNA的酶切 |
| 2.2.7 表达载体的构建 |
| 2.2.7.1 过量表达载体的构建 |
| 2.2.7.2 抑制表达载体的构建 |
| 2.2.7.3 原核表达载体的构建 |
| 2.2.7.4 酵母双杂载体的构建 |
| 2.2.8 农杆菌转化 |
| 2.2.9 植物材料的遗传转化 |
| 2.2.9.1 拟南芥的遗传转化 |
| 2.2.9.2 苹果愈伤组织的遗传转化 |
| 2.2.9.3 苹果苗的遗传转化 |
| 2.2.9.4 苹果叶片瞬时转化 |
| 2.2.10 植物基因组DNA的提取 |
| 2.2.11 植物总RNA的提取 |
| 2.2.12 cDNA的反转录 |
| 2.2.13 植物总蛋白的提取 |
| 2.2.14 酵母双杂交 |
| 2.2.14.1 试剂的配制 |
| 2.2.14.2 酵母双杂交步骤 |
| 2.2.16 双分子荧光互补(BiFC)实验 |
| 2.2.17 蛋白相关的实验技术 |
| 2.2.17.1 原核诱导蛋白 |
| 2.2.17.2 原核诱导蛋白的变性和复性 |
| 2.2.17.3 Pull-down实验 |
| 2.2.17.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) |
| 2.2.18 蛋白免疫印迹(Western blotting) |
| 2.2.18.1 转膜 |
| 2.2.18.2 洗膜和显影 |
| 2.2.19 Co-IP免疫共沉淀 |
| 2.2.20 蛋白泛素化 |
| 2.2.21 蛋白体外降解实验 |
| 2.2.22 GUS组织化学染色 |
| 2.2.23 丙二醛含量测定 |
| 2.2.24 叶绿素含量、Fv/Fm和离子泄漏率的测定 |
| 2.2.25 过氧化氢(H_2O_2)含量和O_2~-产生速率测定 |
| 2.2.26 抗氧化酶活性检测 |
| 2.2.27 DAB染色 |
| 2.2.28 NBT染色 |
| 3 结果与分析 |
| 3.1 MdZAT10 调控苹果叶片衰老 |
| 3.1.1 MdZAT10 的表达模式和亚细胞定位 |
| 3.1.2 MdZAT10 促进苹果叶片衰老 |
| 3.1.3 MdZAT10与MdABI5 互作 |
| 3.1.4 MdABI5 正调控苹果叶片衰老 |
| 3.1.5 MdZAT10 促进MdABI5 介导的叶片衰老 |
| 3.1.6 MdZAT10 促进JA诱导的苹果叶片衰老 |
| 3.1.7 MdZAT10与MdBT2 互作 |
| 3.1.8 MdBT2 促进MdZAT10 泛素化降解 |
| 3.1.9 MdBT2 抑制JA诱导的苹果叶片衰老 |
| 3.1.10 MdBT2 负调控MdZAT10 介导的叶片衰老 |
| 3.2 MdZAT10 影响植株干旱抗性 |
| 3.2.1 MdZAT10 响应不同逆境胁迫和激素处理 |
| 3.2.2 过表达MdZAT10 降低植株对干旱的抗性 |
| 3.2.3 过表达MdZAT10 增加苹果愈伤组织对PEG6000 的敏感性 |
| 3.2.4 过表达MdZAT10 降低拟南芥的干旱抗性 |
| 3.2.5 MdZAT10 转基因拟南芥降低活性氧的清除 |
| 4 讨论 |
| 4.1 MdZAT10 促进茉莉酸介导的叶片衰老 |
| 4.2 MdZAT10 促进MdABI5 介导的叶片衰老 |
| 4.3 MdBT2 抑制MdZAT10 介导的叶片衰老 |
| 4.4 MdZAT10 负调控苹果干旱抗性 |
| 5 结论 |
| 6 参考文献 |
| 7 附录 |
| 8 致谢 |
| 9 攻读学位期间发表的学术论文 |
（2）补肾延龄方对肾虚衰老人群氧化应激及炎症指标的影响及miRNA-mRNA作用机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 综述一 衰老机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 人体各系统衰老相关研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 基于中医古籍的中医药抗衰理论研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 古籍记载衰老的表现或病证 |
| 2.2 中医衰老机理研究 |
| 2.3 抗衰中医方剂主治证及组方研究 |
| 2.4 古籍记载的延缓衰老的中药研究 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 补肾延龄方对延缓肾虚衰老的自身前后对照研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 一般情况 |
| 2.2 肾虚衰老证候积分 |
| 2.3 体力及疲劳改善情况 |
| 2.4 延缓衰老客观指标 |
| 2.5 安全性指标 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 补肾延龄方延缓肾虚衰老的miRNA-mRNA的机制 |
| 实验一 肾虚衰老差异miRNA-mRNA的筛选及调控关系研究 |
| 1 研究对象与方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 样本质检结果 |
| 2.2 年龄相关差异mRNA、miRNA结果及生物信息学分析 |
| 2.3 肾虚证候相关差异mRNA、miRNA结果及生物信息学分析 |
| 2.4 与年龄及肾虚证候均相关mRNA、miRNA |
| 3 小结 |
| 实验二 补肾延龄方延缓肾虚衰老的机制及验证 |
| 1 研究对象及方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 样本检测结果 |
| 2.2 差异mRNA、miRNA结果 |
| 2.3 比较组的关联分析结果 |
| 2.4 生物信息学分析 |
| 2.5 补肾延龄方延缓肾虚衰老的相关靶点mRNA、miRNA |
| 2.6 PCR验证 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
| 附录 |
（3）血管抗衰方通过miR-146a/TRAF6/NF-κB改善血管衰老机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略语 |
| 文献综述 |
| 综述一 血管衰老研究进展 |
| 综述二 人参三七应用沿革及血管抗衰方配伍理论基础 |
| 前言 |
| 第一部分 利用生物信息学方法筛选衰老内皮细胞差异表达miRNA及血管抗衰方延缓血管衰老作用靶点预测研究 |
| 第一章 基于GEO数据库筛选衰老内皮细胞差异表达miRNA |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第二章 差异表达miRNA下游靶基因及作用通路预测和筛选 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第三章 基于网络药理学预测血管抗衰方改善血管衰老作用靶点 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第二部分 血管抗衰方干预血管衰老临床试验及miR-146a/TRAF6/NF-κB调控关系初步验证 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第三部分 血管抗衰方调控miR-146a/TRAF6/NF-κB干预衰老内皮细胞作用机制研究 |
| 第一章 药物诱导衰老细胞模型构建及鉴定 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 第二章 药物干预内皮细胞衰老机制研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论与小结 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
| 中医药科技查新报告书 |
（4）益气活血养阴方调控线粒体能量代谢延缓心脏与主动脉衰老机制初探（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 英文缩略词表顺序 |
| 文献综述 |
| 综述一 线粒体与心血管衰老关系的探讨 |
| 参考文献 |
| 综述二 基于中医理论探讨益气活血养阴方药对延缓衰老的作用 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 D-半乳糖诱导小鼠心脏与主动脉衰老及益气活血养阴方的干预作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 衰老小鼠心脏与主动脉能量代谢变化以及益气活血养阴方的保护作用 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 结语 |
| 研究创新点、不足与展望 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（5）三类功效成分对真核生物生长和衰老的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩写词表 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 研究背景及意义 |
| 1.2 各功效成分的研究现状 |
| 1.2.1 能量代谢物质 |
| 1.2.1.1 烟酰胺 |
| 1.2.1.2 烟酰胺单核苷酸 |
| 1.2.1.3 辅酶Q10 |
| 1.2.2 抗氧化剂 |
| 1.2.2.1 α-硫辛酸 |
| 1.2.2.2 茶多酚 |
| 1.2.2.3 豆甾醇 |
| 1.2.3 膜脂类成分 |
| 1.2.3.1 亚麻酸 |
| 1.2.3.2 亚油酸 |
| 1.2.3.3 大豆卵磷脂 |
| 1.3 受试生物的选择 |
| 1.3.1 单细胞生物 |
| 1.3.1.1 小球藻 |
| 1.3.1.2 酵母菌 |
| 1.3.1.3 草履虫 |
| 1.3.2 多细胞生物 |
| 1.3.2.1 拟南芥 |
| 1.3.2.2 黑曲霉 |
| 1.3.2.3 斑马鱼 |
| 1.3.2.4 小白菜 |
| 1.4 研究内容及路线 |
| 1.4.1 研究内容 |
| 1.4.2 技术路线 |
| 第2章 三类功效成分对单细胞生物生长和衰老的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验试剂与仪器 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 主要试剂和仪器 |
| 2.3 处理方法 |
| 2.3.1 配制功效成分母液 |
| 2.3.2 酵母菌 |
| 2.3.3 草履虫 |
| 2.3.4 小球藻 |
| 2.4 实验方法 |
| 2.4.1 酵母菌生长曲线的测定 |
| 2.4.2 草履虫数目的测定 |
| 2.4.3 小球藻生物量的测定 |
| 2.4.4 叶绿素含量的测定 |
| 2.4.5 叶绿素荧光的测定 |
| 2.4.6 近红外可见光光谱分析 |
| 2.4.7 荧光分光光度法测衰老荧光物质变化 |
| 2.4.8 细胞膜脂肪酸的测定 |
| 2.5 数据处理 |
| 2.6 结果统计与分析 |
| 2.6.1 三类功效成分对酵母菌生长和衰老的影响 |
| 2.6.1.1 影响酵母菌衰老的功效成分选择 |
| 2.6.1.2 NMN和大豆卵磷脂对酵母菌48h生长曲线的影响 |
| 2.6.1.3 NMN和大豆卵磷脂对酵母菌衰老荧光变化的影响 |
| 2.6.1.4 NMN和大豆卵磷脂对酵母菌有机化合物的影响 |
| 2.6.1.5 NMN和大豆卵磷脂对酵母菌细胞膜脂肪酸组成的影响 |
| 2.6.2 三类功效成分对草履虫生长和衰老的影响 |
| 2.6.3 三类功效成分对小球藻生长和衰老的影响 |
| 2.6.3.1 影响小球藻衰老的功效成分选择 |
| 2.6.3.2 茶多酚、NMN、大豆卵磷脂和辅酶Q10对小球藻叶绿素含量的影响 |
| 2.6.3.3 茶多酚、NMN、大豆卵磷脂和辅酶Q10对小球藻叶绿素荧光变化的影响 |
| 2.6.3.4 茶多酚、NMN、大豆卵磷脂和辅酶Q10对小球藻衰老荧光变化的影响 |
| 2.6.3.5 茶多酚、NMN、大豆卵磷脂和辅酶Q10对小球藻有机化合物的影响 |
| 2.6.3.6 茶多酚、NMN、大豆卵磷脂和辅酶Q10对小球藻细胞膜脂肪酸组成的影响 |
| 2.7 小结 |
| 第3章 三类功效成分对模式多细胞生物生长和衰老的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验试剂与仪器 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 主要试剂和仪器 |
| 3.3 处理方法 |
| 3.3.1 黑曲霉 |
| 3.3.2 斑马鱼 |
| 3.3.3 拟南芥 |
| 3.3.3.1 配制拟南芥水培营养液 |
| 3.3.3.2 拟南芥水培法 |
| 3.3.3.3 拟南芥平板培养法 |
| 3.4 实验方法 |
| 3.4.1 黑曲霉菌丝重量测定 |
| 3.4.2 黑曲霉发酵液中还原糖含量的测定 |
| 3.4.3 叶绿素含量、叶绿素荧光、细胞膜脂肪酸、近红外可见光光谱分析、荧光分光光度法测荧光物质变化 |
| 3.5 数据处理 |
| 3.6 结果统计与分析 |
| 3.6.1 三类功效成分对黑曲霉生长和衰老的影响 |
| 3.6.1.1 影响黑曲霉衰老的功效成分选择 |
| 3.6.1.2 亚麻酸和大豆卵磷脂对黑曲霉发酵液中还原糖含量的影响 |
| 3.6.1.3 亚麻酸和大豆卵磷脂对黑曲霉衰老荧光的影响 |
| 3.6.1.4 亚麻酸和大豆卵磷脂对黑曲霉有机化合物的影响 |
| 3.6.1.5 亚麻酸和大豆卵磷脂对黑曲霉细胞膜脂肪酸组成的影响 |
| 3.6.2 三类功效成分对斑马鱼生长和衰老的影响 |
| 3.6.3 三类功效成分对拟南芥生长和衰老的影响 |
| 3.6.3.1 影响拟南芥衰老的功效成分选择 |
| 3.6.3.2 NMN处理对拟南芥叶绿素含量的影响 |
| 3.6.3.3 NMN处理对拟南芥叶绿素荧光变化的影响 |
| 3.6.3.4 NMN处理对拟南芥衰老荧光的影响 |
| 3.6.3.5 NMN处理对拟南芥有机化合物的影响 |
| 3.6.3.6 NMN处理对拟南芥细胞膜脂肪酸组成的影响 |
| 3.7 小结 |
| 第4章 三类功效成分对小白菜抗衰老效果的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验试剂与仪器 |
| 4.2.1 实验材料 |
| 4.2.2 主要试剂和仪器 |
| 4.3 处理方法 |
| 4.4 实验方法 |
| 4.4.1 叶片鲜重测定 |
| 4.4.2 黄化率、腐败率评价方法 |
| 4.4.3 可溶性固形物含量的测定 |
| 4.4.4 细胞膜渗透率的测定 |
| 4.4.5 丙二醛含量的测定 |
| 4.4.6 叶绿素含量、叶绿素荧光、细胞膜脂肪酸、近红外可见光光谱分析、荧光分光光度法测荧光物质变化 |
| 4.5 数据处理 |
| 4.6 结果统计与分析 |
| 4.6.1 影响小白菜衰老的功效成分选择 |
| 4.6.2 α-硫辛酸和亚油酸处理对小白菜中叶绿素含量的影响 |
| 4.6.3 α-硫辛酸和亚油酸处理对小白菜腐败指数的影响 |
| 4.6.4 α-硫辛酸和亚油酸处理对小白菜电解质外渗率的影响 |
| 4.6.5 α-硫辛酸和亚油酸处理对小白菜中总可溶性固形物的影响 |
| 4.6.6 α-硫辛酸和亚油酸处理对小白菜丙二醛含量的影响 |
| 4.6.7 α-硫辛酸和亚油酸处理对小白菜衰老荧光的影响 |
| 4.6.8 α-硫辛酸和亚油酸处理对小白菜中有机化合物的影响 |
| 4.6.9 α-硫辛酸和亚油酸处理对小白菜细胞膜脂肪酸组成的影响 |
| 4.7 小结 |
| 第5章 总结与展望 |
| 5.1 总结 |
| 5.2 展望 |
| 参考文献 |
| 附录一 近红外光谱图 |
| 附录二 荧光光谱图 |
| 附录三 各脂肪酸在总脂肪酸含量中的占比 |
| 致谢 |
（6）VD3/VDR对小鼠睾丸与肾脏的抗衰老作用评价及机理研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 衰老的研究进展 |
| 1.1.1 衰老的定义 |
| 1.1.2 环境伤害导致衰老的学说 |
| 1.1.3 遗传因素导致衰老的学说 |
| 1.2 维生素D的研究进展 |
| 1.2.1 维生素D的结构 |
| 1.2.2 维生素D受体的结构 |
| 1.2.3 VDR的生物学功能 |
| 1.3 维生素D与衰老 |
| 1.3.1 维生素D抗衰老的途径 |
| 1.3.2 维生素D在肠道钙吸收中的代谢和活性 |
| 1.3.3 维生素D在肾脏中的代谢和活性 |
| 1.3.4 维生素D在肌肉骨骼系统中的代谢和活性 |
| 1.3.5 维生素D、细胞衰老与端粒生物学 |
| 1.4 研究目的意义 |
| 第2章 VDR~(-/-)雄性小鼠生殖衰老相关基因表达分析 |
| 2.1 试验材料 |
| 2.1.1 试验动物、细胞及质粒 |
| 2.1.2 主要试剂及材料 |
| 2.1.3 主要仪器设备 |
| 2.1.4 主要试剂配制方法 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 衰老相关生化指标测定 |
| 2.2.2 WT和VDR~(-/-)小鼠睾丸组织转录组测序分析 |
| 2.2.3 WT和VDR~(-/-)小鼠DNA损伤修复相关基因表达检测 |
| 2.2.4 VDR超表达HEK293T细胞 |
| 2.2.5 VDR超表达HEK293T细胞DNA损伤修复相关基因表达检测 |
| 2.2.6 统计学方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.3.1 WT与VDR~(-/-)小鼠衰老相关生化指标检测 |
| 2.3.2 WT和VDR~(-/-)雄鼠睾丸组织转录组测序分析 |
| 2.3.3 VDR超表达HEK293T细胞 |
| 2.3.4 VDR超表达HEK293T细胞中DNA损伤修复相关基因表达 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第3章 VD_3对D-Gal亚急性衰老小鼠抗衰老作用评价 |
| 3.1 试验材料 |
| 3.1.1 试验动物 |
| 3.1.2 主要试剂及材料 |
| 3.1.3 主要仪器设备 |
| 3.1.4 主要试剂配制方法 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验动物模型的建立 |
| 3.2.2 脏器系数计算 |
| 3.2.3 组织形态学检测 |
| 3.2.4 衰老β-半乳糖苷酶染色检测 |
| 3.2.5 衰老相关生化指标测定 |
| 3.2.6 统计学处理 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 小鼠形态特征与体重观察 |
| 3.3.2 小鼠睾丸与肾脏组织形态观察 |
| 3.3.3 脏器系数 |
| 3.3.4 小鼠睾丸与肾脏组织衰老相关β半乳糖苷酶染色鉴定 |
| 3.3.5 小鼠睾丸与肾脏组织结构比较 |
| 3.3.6 小鼠衰老相关老生化指标差异 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第4章 VD_3/VDR对小鼠睾丸与肾脏的抗衰老作用机理研究 |
| 4.1 试验材料 |
| 4.1.1 试验动物 |
| 4.1.2 主要试剂及材料 |
| 4.1.3 主要仪器设备 |
| 4.1.4 主要试剂配制方法 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 衰老相关基因启动子VDR应答元件分析 |
| 4.2.2 衰老相关基因表达分析 |
| 4.2.3 Western blot检测衰老相关蛋白表达 |
| 4.2.4 统计学处理 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.3.1 VD_3促进衰老小鼠组织中VDR的表达 |
| 4.3.2 VD_3/VDR抑制细胞增殖相关基因表达 |
| 4.3.3 VD_3/VDR促进DNA损伤修复延缓衰老 |
| 4.3.4 VD_3/VDR抑制炎症反应延缓衰老 |
| 4.3.5 VD_3/VDR减少氧化应激延缓衰老 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 附录1 主要试剂及材料 |
| 附录2 主要仪器设备 |
| 攻读硕士期间取得的科研成果 |
| 致谢 |
（7）天然食材来源的抗氧化剂参与调控骨性关节炎氧化应激的相关研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| Abstract |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对人OA骨软骨组织及软骨细胞表型的影响 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料与方法 |
| 2.3 实验操作步骤 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.5 实验讨论 |
| 第三章 膝关节腔注射大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠骨性关节炎的治疗效果 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.3 实验操作步骤 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.5 实验讨论 |
| 第四章 大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞表型的影响 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料与方法 |
| 4.3 实验操作步骤 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.5 实验讨论 |
| 第五章 大蒜素、萝卜硫素及番茄红素对大鼠脂肪干细胞在关节腔内生存及其作为干细胞的混悬液对大鼠OA的治疗效果的研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 实验材料与方法 |
| 5.3 实验操作步骤 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.5 实验讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 氧化应激参与调控骨性关节炎的机制 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 致谢 |
（8）退休精神：上海老年学习团队带领人角色认同的多个案研究（论文提纲范文）
| 内容摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 研究缘起 |
| 一、现实背景:我国已呈现快速老龄化趋势 |
| 二、个人感情:老年阶段是必经的人生历程 |
| 三、工作实践:老年群体是主要的服务对象 |
| 四、专业使命:老年教育是成人教育的组成 |
| 第二节 文献综述 |
| 一、角色认同研究的基础 |
| 二、角色认同研究的三种取向 |
| 三、角色认同应用的相关研究 |
| 四、基于文献综述的启示 |
| 第三节 研究问题、思路与意义 |
| 一、研究问题 |
| 二、研究思路 |
| 三、研究意义 |
| 第四节 核心概念 |
| 一、老年学习团队 |
| 二、老年学习团队带领人 |
| 三、角色认同 |
| 四、社会认同 |
| 五、退休精神 |
| 第二章 理论基础与研究设计 |
| 第一节 多元化视角的角色认同研究 |
| 一、结构功能论与角色认同 |
| 二、批判论与角色认同 |
| 三、符号互动论与角色认同 |
| 第二节 斯特赖克(Stryker)角色认同理论 |
| 一、个体与社会 |
| 二、相关理论统合 |
| 第三节 老年学习团队带领人角色认同分析框架 |
| 一、带领人的老年学习团队认同 |
| 二、带领人的角色认同 |
| 第四节 多个案研究方法与研究设计 |
| 一、个案选定依据 |
| 二、个案情况概览 |
| 三、资料收集方法 |
| 四、研究调研实况 |
| 五、调研资料编码 |
| 第三章 个案一:瓷刻带领人的角色认同图景 |
| 第一节 禀赋和爱好滋生终身学习瓷刻的土壤 |
| 一、角色投入——个体学习:毕生精研瓷刻技艺 |
| 二、身份承诺——组团学习:组建团队传承非遗文化 |
| 三、内外奖赏——团队成员互助,肯定学习价值 |
| 第二节 瓷刻带领人的角色认同 |
| 一、角色认知:个体层面 |
| 二、角色情感:工作层面 |
| 三、角色互动:与团队、社区学校互动 |
| 第四章 个案二:形体舞带领人的角色认同图景 |
| 第一节 学习是福命的根源 |
| 一、角色投入——个体学习:活到老学到老 |
| 二、身份承诺——组建团队:心灵舞者的乐园 |
| 三、他人支持——交口称赞,情感融洽 |
| 第二节 形体舞带领人的角色认同 |
| 一、角色认知:个体层面 |
| 二、角色情感:角色自尊与幸福感 |
| 三、角色互动:与团队、家庭、社区互动 |
| 第五章 个案三:推进员带领人的角色认同图景 |
| 第一节 做老年学习的宣传者 |
| 一、角色投入——个体学习:自我学习带动他人学习 |
| 二、身份承诺——组团学习:组织运行虚拟网上学习团队 |
| 三、内外奖赏——内外力驱动团队持续发展 |
| 第二节 推进员带领人的角色认同 |
| 一、角色认知:个体层面 |
| 二、角色情感:工作使命感与责任感 |
| 三、角色互动:与团队、机构互动 |
| 第六章 个案四:编织团队带领人的角色认同图景 |
| 第一节 编织退休的学习生活 |
| 一、角色投入——个体学习:爱好是最好的老师 |
| 二、身份承诺——组建团队:团员拥戴,担任领头雁 |
| 三、他人支持——组团得法,调和矛盾 |
| 第二节 编织团队带领人的角色认同 |
| 一、角色认知:个体层面 |
| 二、角色情感:角色归属感与自信感 |
| 三、角色互动:与团员、家庭、机构互动 |
| 第七章 个案五:山水画带领人的角色认同图景 |
| 第一节 丹青挥墨述人生 |
| 一、角色投入——个体学习:自我坚持学习书画 |
| 二、身份承诺——组建团队:无私奉献,服务团队 |
| 三、他人支持——分组学习,书画协调共进步 |
| 第二节 山水画带领人的角色认同 |
| 一、角色认知:个体层面 |
| 二、角色情感:角色归属感与自尊感 |
| 三、角色互动:与团员、家庭、社区互动 |
| 第八章 个案六:老年男声合唱团带领人的角色认同图景 |
| 第一节 合唱团的起伏全记录 |
| 一、角色投入——一波三折,坚持学习 |
| 二、身份承诺——教学齐鸣 |
| 三、他人支持与内外奖赏——合唱业绩推动团队持续发展 |
| 第二节 老年男声合唱团带领人的角色认同 |
| 一、角色认知:个体层面 |
| 二、角色情感:角色使命与责任感 |
| 三、角色互动:与机构互动及意义协商 |
| 第九章 跨个案分析带领人角色认同的建构过程 |
| 第一节 带领人角色认知 |
| 一、带领人学习力分析 |
| 二、带领人性别分析 |
| 三、带领人退休前职业分析 |
| 第二节 带领人“工作”角色情感 |
| 一、带领人“工作领导力”分析 |
| 二、带领人领导力管理风格分析 |
| 三、带领人团队管理力分析 |
| 第三节 带领人角色互动 |
| 一、夫妻关系更趋于和睦 |
| 二、代际关系更趋于互补 |
| 三、增进社区参与的黏合力 |
| 四、增加个体对社区的认同度 |
| 第十章 带领人角色认同的本质 |
| 第一节 带领人角色认同的机理 |
| 一、角色认知是角色认同的基础 |
| 二、角色情感是角色认同的依据 |
| 三、角色互动是角色认同的动力 |
| 第二节 角色认同的个体主体性 |
| 一、角色认同促进老年人的终身学习 |
| 二、角色认同彰显人的全面发展 |
| 三、角色认同体现退休精神的伦理价值 |
| 第三节 角色认同的社会结构性 |
| 一、角色认同昭示老年教育的外因内化作用 |
| 二、角色认同弥合老年教育的价值冲突 |
| 三、角色认同挖掘老年教育的智慧价值 |
| 结语 |
| 第一节 研究基本结论 |
| 一、带领人角色认同的建构过程 |
| 二、带领人角色认同具有共通性特征与各异性特色风格 |
| 三、形成带领人角色认同社会化的角色集合 |
| 四、挖掘带领人角色认同的机理 |
| 五、带领人角色认同具有个体主体性和社会结构性 |
| 六、诠释带领人角色认同的定义 |
| 七、重释退休精神的内涵 |
| 第二节 实践启示 |
| 一、政府推动与老年学习团队自我发展相协同 |
| 二、培育老年学习团队与培训带领人相同步 |
| 三、知识技能与老年学习者资源化主张相互补 |
| 四、老年学习团队与全年龄段学习团队相融合 |
| 第三节 论文突破与反思 |
| 一、论文突破点 |
| 二、论文反思 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致受访对象的研究事项说明 |
| 访谈提纲 |
| 后记 |
| 作者简历及在学期间取得的科研成果 |
（9）人参皂苷Rg1调控Keap1-NRF2-ARE通路延缓骨髓间充质干细胞衰老的机制研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 主要参考文献 |
| 第一部分 人参皂苷Rg1 体外拮抗D-gal诱导所致BM-MSCs衰老的研究 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 第二部分 人参皂苷Rg1 体内拮抗D-gal诱导所致器官衰老的研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 第三部分 NRF2 在人参皂苷Rg1 拮抗D-gal诱导BM-MSCs衰老的机制研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 第四部分 PI3K-AKT-P62 信号通路在人参皂苷Rg1 调控NRF2 的机制研究 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 5 参考文献 |
| 全文总结 |
| 文献综述 NRF2 信号通路与疾病的进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间撰写发表论文目录 |
（10）头顶一颗珠通过Pink1/Parkin介导的线粒体自噬对D-gal诱导的衰老大鼠学习记忆的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 1 理论探源 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 线粒体自噬在神经退行性疾病中的应用研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士研究生期间的研究成果、参加学术会议及获奖 |
| 致谢 |
四、科学的突破是否延缓我们的衰老?（论文参考文献）
- [1]苹果C2H2型锌指蛋白MdZAT10调控叶片衰老和干旱胁迫的机理研究[D]. 杨阔. 山东农业大学, 2021(02)
- [2]补肾延龄方对肾虚衰老人群氧化应激及炎症指标的影响及miRNA-mRNA作用机制研究[D]. 胡骏. 中国中医科学院, 2021(02)
- [3]血管抗衰方通过miR-146a/TRAF6/NF-κB改善血管衰老机制研究[D]. 王靖怡. 中国中医科学院, 2021(02)
- [4]益气活血养阴方调控线粒体能量代谢延缓心脏与主动脉衰老机制初探[D]. 刘奕清. 中国中医科学院, 2021(02)
- [5]三类功效成分对真核生物生长和衰老的影响[D]. 王柯诺. 浙江工商大学, 2021(12)
- [6]VD3/VDR对小鼠睾丸与肾脏的抗衰老作用评价及机理研究[D]. 赵浩名. 陕西理工大学, 2021
- [7]天然食材来源的抗氧化剂参与调控骨性关节炎氧化应激的相关研究[D]. 杨君君. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [8]退休精神：上海老年学习团队带领人角色认同的多个案研究[D]. 岳燕. 华东师范大学, 2021(08)
- [9]人参皂苷Rg1调控Keap1-NRF2-ARE通路延缓骨髓间充质干细胞衰老的机制研究[D]. 汪子铃. 重庆医科大学, 2021(01)
- [10]头顶一颗珠通过Pink1/Parkin介导的线粒体自噬对D-gal诱导的衰老大鼠学习记忆的影响及机制研究[D]. 谢雅. 湖北民族大学, 2021(12)