一、静脉血栓形成动物模型的病理学研究（论文文献综述）
田英杰[1]（2021）在《血浆蛋白表达谱推断深静脉血栓形成时间的研究》文中指出目的:利用Agilent蛋白芯片技术结合四种机器学习算法检测分析大鼠深静脉血栓（deep venous thrombosis,DVT）形成过程中血浆蛋白谱的变化,探讨血浆蛋白表达谱与血栓形成的时序性变化规律,以此进行血栓形成时间的推断。方法:建立大鼠DVT模型,分为对照组和手术组,对照组不做任何处理（n=10）,手术组包括血栓形成后1 h、6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、6 d、7 d、10 d、14 d、21 d组（n=10）,收集140例大鼠血浆样本,采用Agilent蛋白芯片技术检测大鼠血浆蛋白表达谱,结合支持向量机、logistic回归、随机森林和Fisher线性判别模型对样本数据进行分析,运用最优数学模型对样本变量进行重要性排序。结果:（1）对照组可见静脉血管瘀血样改变,无血栓形成,12 h后可见少量血小板聚集,1 d后可见大量的血小板聚集,3 d后出现少量成纤维细胞,血栓密度增高,5 d后成纤维细胞增多,纤维素样物质渗出也增加,14 d纤维素样物质堆积;（2）不同血栓形成时间点血浆样本蛋白表达谱存在差异,峰位置和各峰含量不同;（3）主成分分析和正交偏最小二乘判别分析显示各样本组均存在显着差异;（4）建立多个血栓形成时间点分类预测模型,支持向量机模型准确率为86.8%,ROC值为0.97,logistic回归模型准确率为63.1%,ROC值为0.95,随机森林模型准确率为86.8%,ROC值为0.98,Fisher线性判别模型准确率为81.5%,ROC值为0.94,综合分析显示随机森林模型更适用于本实验数据,其外部验证准确率为85.7%;（5）运用随机森林模型对样本变量进行重要性排序,显示蛋白峰P11和蛋白峰P10排序重要性最高,查阅文献和分子预测,认为分子量为56.9 KDa的蛋白峰P11和分子量为45.8 KDa的蛋白峰P10可能与血栓形成密切相关。结论:利用蛋白芯片技术可以快速检测并准确获得大鼠不同血栓形成时间点血浆样本蛋白表达谱,联合多种机器学习算法,分析DVT血浆蛋白表达谱的时序性变化规律,建立四种数学算法模型,其中随机森林模型准确率最高,准确率为85.7%,为血栓形成时间的推断提供新的方法和思路。
张含霁[2]（2021）在《Ag490通过抑制JAK2/STAT3通路对同型半胱氨酸诱导的血栓闭塞性脉管炎治疗作用的研究》文中研究说明研究目的:1、通过循证医学荟萃分析的研究方法,研究血栓闭塞性脉管炎患者的血浆同型半胱氨酸水平与健康人群的差异,以证实高同型半胱氨酸血症可能是导致血栓闭塞性脉管炎的病因之一。2、通过使用同型半胱氨酸建立人脐静脉内皮细胞系的损伤模型,研究同型半胱氨酸对内皮细胞引起损伤作用的机制,以及Ag490对这个过程的抑制作用,为后续研究打下实验基础。3、通过建立大鼠血栓闭塞性脉管炎模型,研究同型半胱氨酸在促进大鼠血栓闭塞性脉管炎形成的机制及对其有效抑制作用的药物,为明确人类血栓闭塞性脉管炎的病因、发病机制和临床上寻找有效治疗措施提供理论依据。研究材料与方法:1、利用Pub Med、Web of Science和Science Direct数据库（截至2021年2月）来搜索评估血浆同型半胱氨酸水平与血栓闭塞性脉管炎发生风险之间关系的研究。2、细胞实验使用人脐静脉内皮细胞系。使用CCK-8检测细胞增殖活性与毒性的实验方法,检测不同浓度和不同孵育时间的同型半胱氨酸溶液对内皮细胞的毒性作用,以及不同浓度Ag490对同型半胱氨酸给内皮细胞毒性作用的抑制作用。将内皮细胞分为3组进行培养:（1）同型半胱氨酸组（给药组,同型半胱氨酸浓度为2m M,培养时间为24小时）;（2）Ag490+同型半胱氨酸组（治疗组,先用20μM的Ag490孵育细胞4小时,然后加入2m M浓度的同型半胱氨酸溶液继续培养细胞24小时）;（3）空白对照组。将培养完成的细胞,提取其细胞蛋白和总RNA,使用Western Blot法和RT-PCR法对JAK2、STAT3、p-STAT3、HMGB1、ICAM1、VCAM1等分子进行蛋白水平和基因水平的检测。3、动物实验使用成熟雄性SD大鼠。将实验大鼠分成5组:（1）空白对照组;（2）生理盐水+生理盐水+手术组（造模组,尾静脉注射生理盐水14天+手术前2小时腹腔注射生理盐水+手术+手术后尾静脉注射生理盐水14天）;（3）同型半胱氨酸+生理盐水+手术组（给药组,尾静脉注射同型半胱氨酸14天+手术前2小时腹腔注射生理盐水+手术+手术后尾静脉注射同型半胱氨酸14天）;（4）同型半胱氨酸+Ag490+手术组（治疗组,尾静脉注射同型半胱氨酸14天+手术前2小时腹腔注射Ag490+手术+手术后尾静脉注射同型半胱氨酸14天）;（5）假手术组。每组大鼠对左后肢股动脉注射月桂酸钠溶液的手术方法对大鼠进行血栓闭塞性脉管炎动物模型的构造。实验周期结束后,观察大鼠患肢皮温、颜色、动脉搏动、肿胀、坏疽及木乃伊化的病变程度和范围,并进行分级评分。使用苏木素-伊红染色的实验方法,对每组大鼠患肢股动脉进行病理学检查。提取每组大鼠患肢股动脉的蛋白和总RNA,使用Western Blot法和RT-PCR法对JAK2、STAT3、p-STAT3、HMGB1、ICAM1、VCAM1等分子进行蛋白水平和基因水平的检测。研究结果:1、荟萃分析的结果:根据纳入标准和排除标准,最终确定了5项符合条件的研究,包括180例血栓闭塞性脉管炎患者和564例年龄和性别匹配的健康参与者。Meta分析的森林图显示,血栓闭塞性脉管炎患者血浆同型半胱氨酸水平高于对照组（MD:3.19,95%CI:0.26-6.12,p<0.00001,I2:90%）。经过亚组间差异分析发现,本研究异质性过大的原因可能是由于纳入研究的种族不同造成的（p=0.001）。2、细胞实验的结果显示:（1）随着同型半胱氨酸浓度的增加和作用时间的延长,人脐静脉内皮细胞的细胞活力逐渐减低。合适浓度的Ag490可以增加同型半胱氨酸损伤后的内皮细胞的活力,但过高浓度的Ag490使同型半胱氨酸损伤后的内皮细胞的活力更低。（2）检测实验细胞的分子提取物发现,（1）组的JAK2、STAT3、p-STAT3、HMGB1、ICAM1、VCAM1等的蛋白表达和m RNA表达较（3）组明显增高,而（2）组的蛋白和m RNA表达与（1）组相比明显减低。3、动物实验的结果显示:（1）通过股动脉注射月桂酸钠溶液的方法,可以成功构造大鼠血栓闭塞性脉管炎的疾病动物模型,且观察大鼠患肢症状发现,尾静脉注射同型半胱氨酸可以加重大鼠患肢脉管炎的表现,而术前腹腔注射Ag490可以有效缓解同型半胱氨酸诱导的患肢脉管炎症状。（2）通过苏木素-伊红染色发现:（1）组和（5）组为正常股动脉;（3）组与（1）组和（5）组相比,股动脉内有大量血栓形成,股动脉内膜明显增厚,周围有大量炎性细胞浸润;（2）组和（4）组与（3）组相比,股动脉内血栓较小,且动脉内膜增厚较轻,炎性细胞浸润较少。（3）检测实验大鼠患肢股动脉的分子提取物发现,（2）组的JAK2、STAT3、p-STAT3、HMGB1、ICAM1、VCAM1等蛋白和m RNA表达较（1）组明显增高,（3）组的蛋白和m RNA表达与（2）组相比明显增高,而（4）组与（3）组相比蛋白和m RNA表达明显减少。研究结论:1、高同型半胱氨酸血症可能是引起血栓闭塞性脉管炎的病因之一,但未来还需要大规模的随机对照实验和前瞻性研究以补充结果的准确性。2、同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞的毒性作用随着药物浓度的增加和作用时间的延长均有提高。3、大鼠血浆同型半胱氨酸浓度升高,可以加重患肢血栓闭塞性脉管炎的症状,而注射Ag490可以有效减轻由同型半胱氨酸诱导的脉管炎的症状。4、同型半胱氨酸对内皮细胞的毒性作用和对大鼠血栓闭塞性脉管炎的加重作用可能是通过异常激活JAK2/STAT3通路,导致内皮细胞和大鼠患肢股动脉炎症因子的过度表达从而引起炎症反应的。5、合适浓度的Ag490通过抑制JAK2/STAT3通路,对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮损伤和大鼠血栓闭塞性脉管炎均具有治疗作用。同时,由于Ag490为JAK2的特异性抑制剂,故而印证同型半胱氨酸对内皮细胞的损伤作用及其诱导的大鼠血栓闭塞性脉管炎的加重作用可能是由于激活JAK2/STAT3通路诱发炎症反应导致的。
占钻[3]（2021）在《咖啡酸苯乙酯对早期腹主动脉瘤保护作用的研究》文中认为第1部分人体腹主动脉瘤组织的病理学研究目的:观察人体腹主动脉瘤（Abdominal aortic aneurysm,AAA）组织的病理学特点及沉默信息转录调控因子1（silent information regulator of transcription 1,SIRT1）、核因子κB（Nuclear factorκB,NF-κB）及CD40等蛋白的表达情况,为后续深入研究早期AAA的药物治疗方法及相关机制建立基础。方法:1、收集我院外科手术切除的人体AAA标本及正常人腹主动脉标本（各3例）,HE染色观察组织的病理学表现,VG染色观察血管壁弹力纤维破坏程度;2、通过免疫组织化学染色法检测CD31及CD68表达水平,评估AAA瘤壁组织新生血管形成及巨噬细胞浸润水平;3、免疫组织化学染色法检测SIRT1、NF-κBp65、基质金属蛋白酶2（Matrixmetalloproteinase-2,MMP-2）、基质金属蛋白酶9（Matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）及CD40蛋白表达水平。结果:1、HE染色显示人体AAA组织中膜变薄,中膜和外膜见明显炎症细胞浸润聚集,可见明显新生血管形成。VG染色显示血管壁弹力纤维降解,连续性中断,大量的炎性细胞浸润破坏分隔中膜;2、免疫组化染色显示人体正常腹主动脉组织CD31及CD68几乎不表达,AAA瘤壁CD31及CD68表达明显增多,以中膜及外膜区域为主,与正常腹主动脉相比差异有显着性（p<0.05）;3、正常腹主动脉组织CD40、NF-κB p65、MMP-2及MMP-9蛋白呈较低表达,SIRT1蛋白呈高表达,与正常腹主动脉组织相比,AAA瘤壁CD40、NF-κB p65、MMP-2及MMP-9蛋白表达水平明显升高,SIRT1蛋白表达水平下降,差异有显着性（p<0.05）。结论:人体AAA形成与炎症浸润、新生血管形成、MMPs、SIRT1、NF-κB及CD40等蛋白表达有关,从这些角度出发通过体内外实验进一步研究AAA的内科治疗方法及机制具有一定的意义。第2部分咖啡酸苯乙酯对大鼠AAA形成早期保护作用的研究目的:研究咖啡酸苯乙酯（Caffeic acid phenethyl ester,CAPE）在大鼠AAA形成早期的保护作用及可能的相关机制,探索CAPE在早期AAA的内科治疗中的潜力。方法:1、18只健康雄性SD大鼠被随机分为假手术组、模型组及CAPE干预组（每组各6只）。模型组通过注射（猪胰）弹性蛋白酶法建立AAA模型,CAPE干预组腹腔注射CAPE 10μmol/kg/d,持续14 d,模型组和假手术组在相同时间点注射等剂量生理盐水。14 d后处死大鼠,采用游标卡尺测量瘤体及腹主动脉最大直径,判断动脉瘤大小,模型组及CAPE干预组留取弹性蛋白酶灌注处动脉组织,假手术组留取正常肾下腹主动脉组织标本,;2、HE染色、VG染色分别观察动脉瘤组织炎症浸润和弹力纤维破坏程度等病理改变;3、免疫组化法检测α平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）表达,TUNEL检测血管平滑肌细胞凋亡水平;4、组织ROS水平测定判断氧化应激水平;5、CD31免疫组织化学染色研究内膜新生血管形成;6、CD68、i NOS及CD206免疫组织化学染色研究巨噬细胞表型变化;7、免疫组织化学法检测MMP-2、MMP-9蛋白表达;8、蛋白印迹法检测IL-6、SIRT1、NF-κBp65、MCP-1、MMP-2、MMP-9、CD40蛋白的表达。结果:1、所有大鼠均存活,模型组大鼠术后14 d AAA成瘤率100%。CAPE干预组术后14 d有一只未达AAA标准,其余5只瘤体直径均超过灌注前直径的50%,成瘤率83%。三组大鼠腹主动脉直径于弹性蛋白酶灌注前无显着差异（p>0.05）。模型组及CAPE干预组大鼠腹主动脉直径于弹性蛋白酶灌注后即刻无显着差异（p>0.05）,但均较假手术组显着增加（p<0.05）。术后14 d模型组及CAPE干预组大鼠腹主动脉直径较假手术组显着增加（p<0.05）,但CAPE干预组较AAA模型组显着下降（p<0.05）;2、HE染色显示模型组动脉管壁呈瘤样扩张,组织结构紊乱,管壁炎症浸润明显。而在CAPE干预后瘤样扩张不明显,组织结构相对完整,有炎症浸润,但较模型组明显减少。VG染色结果显示,模型组AAA管壁中膜肌纤维较假手术组明显减少,胶原纤维紊乱不连续,降解明显,外膜增厚,与模型组相比,CAPE干预组中管壁中膜肌纤维增加,胶原纤维断裂及降解情况好转;3、与假手术组相比,模型组大鼠动脉管壁组织α-SMA水平显着降低（p<0.05）,与模型组相比,CAPE干预组表达则显着升高（p<0.05）。TUNEL法检测各组血管壁平滑肌细胞凋亡水平,结果显示,假手术组凋亡细胞几乎不可见,模型组及CAPE组可见明显增多（p<0.05）,而CAPE干预组凋亡细胞数量较模型组明显减少（p<0.05）;4、与假手术组相比,模型组大鼠动脉管壁组织ROS含量显着增加（p<0.05）;与模型组相比,CAPE干预组ROS含量明显降低（p<0.05）;5、与假手术组相比,模型组大鼠动脉管壁组织CD31表达水平显着增加（p<0.05）,与模型组相比,CAPE干预组中CD31表达水平显着降低（p<0.05）;6、与假手术组相比,模型组大鼠动脉管壁组织CD68、CD206及iNOS表达水平显着增加（p<0.05）,与模型组相比,CAPE干预组CD68、iNOS表达水平显着降低（p<0.05）,而CD206表达水平增加（p<0.05）;7、与假手术组相比,模型组大鼠动脉管壁组织MMP-2及MMP-9表达水平显着增加（p<0.05）,与模型组相比,CAPE干预组MMP-2及MMP-9表达水平显着降低（p<0.05）;8、与假手术组相比,模型组大鼠动脉管壁组织CD40、IL-6、MCP-1、MMP2、MMP9和NF-κBp65的蛋白表达水平均显着上升（p<0.05）,SIRT1表达显着下降（p<0.05）;与模型组相比,CAPE干预组中CD40、IL-6、MCP-1、MMP9和NF-κBp65的蛋白表达水平均显着降低（p<0.05）,SIRT1表达显着升高（p<0.05）,MMP-2无显着差异（p>0.05）,但呈下降趋势。结论:CAPE对大鼠早期AAA具有保护作用,这种保护作用可能与其抑制炎症反应、氧化应激、新生血管形成、血管平滑肌细胞凋亡、巨噬细胞促炎型M1极化及影响SIRT1、NF-κB、CD40等蛋白表达有关。第3部分CAPE抑制TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症反应的机制研究目的:研究CAPE对肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor alpha,TNF-α）刺激人脐静脉内皮细胞后炎症反应的抑制作用及与SIRT1、NF-κB、CD40蛋白相关的可能分子学机制,为探讨CAPE对早期AAA的保护作用提供理论基础。方法:1、体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞分为对照组及40μg/L、20μg/L及10μg/L的TNF-α刺激组,通过Western blot检测细胞孵育12 h后白介素6（Interleukin-6,IL-6）及单核细胞趋化因子1（Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1）蛋白的表达水平;2、将细胞分为对照组、TNF-α组及80μM、40μM、10μM三种浓度CAPE干预组,通过Western blot检测各组细胞IL-6及MCP-1蛋白的表达水平;3、将细胞分为对照组、TNF-α组及CAPE+TNF-α组,Western blot检测比较各组细胞中SIRT1蛋白的表达;4、将细胞分为对照组、TNF-α组,CAPE组、NAM+CAPE+TNF-α组及PDTC+TNF-α组,Western blot检测比较各组细胞中CD40蛋白的表达;5、将细胞分为对照组、TNF-α组、CAPE+TNF-α组及NAM+CAPE+TNF-α组,Western blot检测比较各组细胞中NF-κBp65蛋白的表达。结果:1、TNF-α呈浓度依赖性影响IL-6及MCP-1蛋白的表达,且10μg/L的TNF-α刺激后IL-6及MCP-1表达水平即较对照组显着升高（p<0.05）;2、各浓度组CAPE预刺激可显着抑制TNF-α刺激后MCP-1表达水平的升高,80μM及40μM的CAPE显着抑制TNF-α刺激后IL-6表达水平的升高（p<0.05）,但10μM干预组IL-6表达水平与TNF-α刺激组无显着差异（p>0.05）;3、正常内皮细胞SIRT1呈高表达,10μg/L TNF-α刺激后SIRT1表达水平较正常细胞组显着降低（p<0.05）,而40μM CAPE干预后SIRT1表达水平较TNF-α组显着升高（p<0.05）;4、10μg/L TNF-α刺激后CD40表达水平较对照组显着升高（p<0.05）,40μM CAPE干预后CD40表达水平较TNF-α组显着下降（p<0.05）,加入NAM后CAPE对CD40的抑制作用减弱,与CAPE组相比有显着差异（p<0.05）,与TNF-α组相比,加入PDTC对CD40有显着抑制作用（p<0.05）,且作用与CAPE组无明显差异（p>0.05）;5、与对照组相比,10μg/L TNF-α刺激后HUVECs的NF-κBp65表达水平显着升高（p<0.05）,而40μM CAPE干预后可以显着抑制TNF-α刺激引起的NF-κBp65表达升高（p<0.05）。加入NAM后,CAPE对NF-κBp65的抑制作用减弱。结论:CAPE可抑制TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞后的炎症反应,这种作用与其通过SIRT1介导的NF-κB p65亚基去乙酰化抑制TNF-α诱导的内皮细胞中CD40表达有关。因此我们推测CAPE对早期AAA保护作用的机制可能与SIRT1/NF-κB/CD40通路有关。
唐伟[4]（2021）在《急性动脉闭塞性肠系膜缺血MDCT影像学研究》文中提出研究背景与目的:急性肠系膜缺血（acute mesenteric ischemia,AMI）是供应小肠和系膜的动脉血液急剧减少或引流静脉受阻,不能满足小肠生理代谢需求而引起小肠系膜缺血损伤,甚至缺血坏死。随着社会人口老龄化,AMI在老年人群中的发病率逐渐增加,在临床上成为急诊科、血管外科和放射科医师关注的热点。AMI属于急腹症范畴,腹部疼痛症状与体征不相对称,患者不能得到及时准确的诊治会导致很高的死亡率。尽管随着现代医学诊疗技术的快速发展,AMI的死亡率在近十年并没有得到明显改善。AMI按病因分为动脉闭塞性、静脉闭塞性和非血管闭塞性,其中动脉闭塞性AMI在临床上较常见。动脉闭塞性AMI最常见的原因是血栓栓塞。小肠系膜的血液供应主要来源于肠系膜上动脉（superior mesenteric artery,SMA）,SMA狭窄或闭塞可引起小肠系膜缺血性损伤。SMA起始部的腹主动脉开口较大,和腹主动脉成锐角,血流方向与腹主动脉几乎一致,心源性栓子随血流易经过腹主动脉开口阻塞SMA主干及其分支。另外,SMA形态略弯曲呈现一定弧度,血流对管壁的剪应力加大可引起血管内皮损伤,在内皮损伤基础上形成血栓。基于上述解剖特点,SMA在病理情况下较易发生血栓栓塞,引起小肠系膜缺血性损伤。SMA在腹腔干（celiac axis,CA）下方约1厘米起源于腹主动脉,SMA和CA的解剖位置相邻和功能相互联系。SMA和CA都是由胚胎发育早期起源于腹主动脉腹侧的原始内脏血管分支发育而成。在胚胎发育过程中,SMA和CA及其分支可发生解剖位置的变异。而动脉闭塞性AMI的患者在需要进行开腹或血管介入手术治疗时,术前需要了解肠系膜动脉的解剖变异情况,对手术计划的制定和避免医源性血管损伤具有重要的临床意义。动脉闭塞性AMI好发于老年人群。老年AMI患者常常合并心脑血管疾病、慢性肺部疾病、外周血管疾病等共存疾病,共存疾病可影响AMI患者的预后和治疗方式的选择。合并共存疾病病情较重的老年AMI患者,缺血肠管发生不可逆性坏死的几率较大,手术治疗的风险高和术后并发症多,患者术后发生死亡的风险很高。AMI的早期诊断和及时准确治疗可减少缺血肠管发生坏死的几率和改善患者的预后。多排螺旋CT（multidetector computed tomography,MDCT）具有快速成像、同时显示肠管和肠系膜血管、强大的后处理功能等特点,诊断AMI的敏感性和特异性较高,在临床上被推荐为首选的影像学检查技术。增强MDCT可显示SMA狭窄的范围和严重程度、有无解剖变异、肠管缺血性损伤情况以及治疗后随访复查,在临床上为AMI的诊断、治疗和预后提供有价值的影像学依据。肠系膜缺血性损伤的MDCT征象包括特异性和非特异性征象。通过肠缺血性损伤的MDCT征象鉴别可逆性肠缺血性损伤或不可逆性肠缺血坏死是临床上关注的热点,也是难点。在实际临床工作中,仅不可逆性缺血坏死的肠管需要手术切除,可获得标本进行组织病理学评价。通过临床病例尚不能全面理解动脉闭塞性肠缺血损伤的MDCT征象与缺血持续时间和肠缺血损伤严重程度的组织病理学分级间的关系。因此,可通过动物实验的方法,建立基于肠缺血损伤严重程度的组织病理学分级和缺血持续时间的动脉闭塞性AMI的MDCT诊断标准,为临床提供参考。基于上述,本研究目的在于应用MDCT血管成像技术,围绕SMA解剖和SMA闭塞引起AMI的影像特征进行如下论述:（1）在MDCT上系统描述SMA解剖构型,并解释SMA各种解剖构型的胚胎学发育机制;（2）联合患者的共存疾病等临床基线特征,评估定量和定性肠缺血性损伤影像征象在动脉闭塞性AMI患者中的临床应用价值;（3）建立SMA闭塞性AMI的动物模型,对照分析动脉闭塞性AMI的MDCT征象与肠缺血损伤严重程度的组织病理学评分之间的关系,理解动脉闭塞性肠缺血性损伤MDCT征象的病理学基础。材料和方法:第一部分:肠系膜上动脉解剖变异的MDCT表现及其胚胎学机制1.研究对象:回顾性分析5580例于2008年2月至2018年4月期间在中国人民解放军陆军军医大学大坪医院接受腹部增强MDCT及血管成像的影像学数据。2.MDCT检查:所有影像学数据采集在64排（LightSpeed VCT 64,GE healthcare,Unite states）或256层（Brilliance iCT 256,Philips healthcare,Cleveland）MDCT上进行。扫描范围:从膈肌顶部至右肾下缘或耻骨联合水平。扫描方法包括平扫,以及注入对比剂（Ultravist;Bayer Schering Pharma）后20秒、50秒双期（动脉期、静脉期）增强扫描。3.影像分析:动脉期影像数据传至图像后处理工作站上（ADW 4.3,GE healthcare）进行多平面重组（multiplanar reformation,MPR）、容积再现（volume rendering,VR）和最大密度投影（maximum intensity projection,MIP）重建目标动脉。由3位具有10年以上经验的腹部放射科医师独立分析肠系膜上动脉（superior mesenteric artery,SMA）和腹腔干（celiac axis,CA）及其分支—肝总动脉（common hepatic artery,CHA）、胃左动脉（left gastric artery,LGA）和脾动脉（splenic artery,SA）的解剖起源及构型。如果出现争议,观察者之间经协商达成一致。4.解剖学构型命名:因为LGA、CHA和SA存在解剖变异,我们重新定义CHA和CA:无论血管的起源和解剖走行,一个动脉干至少发出一支肝动脉和胃十二指肠动脉可认为是CHA;一个动脉干至少发出CHA、LGA和SA中的两支可认为是CA。因此,起源于腹主动脉的一个共同主干包括SMA和CA三个分支中的至少二支可定义为CA和SMA共干解剖变异（celiomesenteric trunk,CMT）。为了便于描述,SMA、LGA、CHA和SA分别以英文字母M、G、H和S表示。解剖构型命名:发出分支血管的共同主干+直接起源于腹主动脉的其余分支血管,共同主干用其分支血管的缩写字母组合加上英文单词“trunk”表示。例如:SMA和CHA起源于一共同主干,但LGA和SA直接起源于腹主动脉命名为MH trunk+LGA+S A。5.胚胎学机制:从腹部血管胚胎学发育和起源的角度,在讨论部分阐述解剖变异发生的胚胎学机制。6.统计学分析:统计分析SMA解剖变异的发生率,以及各种解剖构型的百分比。第二部分:急性肠系膜上动脉血栓闭塞性肠系膜缺血死亡风险因素的MDCT评价1.研究对象:回顾性分析2013年2月至2018年12期间在中国人民解放军陆军军医大学大坪医院经临床证实并接受腹部增强MDCT及血管成像的33例SMA血栓栓塞引起AMI的住院患者。2.MDCT检查:同第一部分。3.影像分析及共存疾病评价:阅览病历资料并记录患者的临床基本特征、共存疾病和预后,33例AMI患者被分为死亡组和存活组。在MDCT横轴位及重组影像上分析AMI患者肠缺血性损伤的影像学征象、肠系膜上动脉血栓栓塞范围及狭窄程度。共存疾病情况按照老年共病指数（geriatrics index of comorbidity,GIC）分为1-4类。4.统计学分析:皮尔森χ2检验或独立样本t检验分析AMI患者死亡组和存活组间临床基本特征、MDCT征象以及共存疾病的种类和GIC分类的差异。与AMI患者死亡具有显着相关性的风险因素进行受试者特征工作曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）分析其诊断效能。以p<0.05为差异具有统计学意义。第三部分:急性动脉血栓闭塞性肠系膜缺血MDCT血栓密度与透壁性肠坏死的相关性分析1.研究对象:回顾性分析2013年2月至2019年12月期间在陆军军医大学大坪医院经临床证实并接受腹部增强MDCT及血管成像的33例SMA血栓栓塞引起AMI的住院患者。2.MDCT检查方法:同第一部分。3.影像分析及血栓密度CT值测量:根据术中发现、术后病理结果和预后情况,33例AMI患者分为不可逆透壁性肠坏死组和可逆肠缺血损伤组。两位具有10年以上经验的腹部放射科医师分析AMI患者的肠缺血性损伤影像学征象、血栓位于SMA主干的解剖位置和范围、是否有SMA分支血管栓塞和SMA主干狭窄程度。参照动脉期横轴位影像上SMA血栓充盈缺损层面,在对应的平扫横轴位影像上测量血栓的CT值,每个层面血栓CT值相加总和再除以层面数计算出整个血栓的平均CT值。测量血栓CT值由两位放射科医师独立完成,取其平均值为最后测量结果。4.统计学分析:单因素分析AMI患者不可逆透壁性肠坏死组和可逆肠缺血损伤组的临床基本特征、MDCT征象和SMA血栓CT值的差异,与不可逆透壁性肠坏死显着相关的因素纳入多元回归分析和受试者特征工作曲线（receiver operating characteristic curve,ROC）分析。以p<0.05为差异具有统计学意义。第四部分:急性动脉闭塞性肠系膜缺血MDCT征象与组织病理学对照分析:动物实验研究1.实验对象:选取18只新西兰大白兔随机分为1个对照组（3只）和5个不同时间段缺血组（每组各3只）。通过开腹手术结扎兔子肠系膜上动脉根部建立急性小肠系膜缺血动物模型。对照组进行简单剖腹手术而不结扎肠系膜上动脉。2.MDCT检查:缺血组结扎肠系膜上动脉0.5小时、1.0小时、2.0小时、4小时和6小时后在64排MDCT（LightSpeed VCT 64,GE healthcare,Unite states）进行腹部平扫及双期（动脉期、静脉期）增强扫描。对照组在假手术后6小时进行腹部MDCT平扫及双期（动脉期、静脉期）增强扫描。3.组织病理学评价:MDCT扫描结束后立即处死兔子取出一段空肠,组织标本按照标准程序进行HE染色制作成石蜡切片,在光学显微镜下观察并按照Park/Chiu评分系统对小肠缺血性损伤的严重程度进行评分。4.影像分析:分析对照组和缺血组的小肠缺血性损伤MDCT征象,在平扫和动脉期薄层横轴位影像上随机放置相对应两个感兴趣区（ROI）测量对照组和缺血组肠壁的CT 值（HU）。5.统计学分析:分析肠缺血损伤的MDCT征象和缺血肠壁的CT值与组织病理学评分和缺血持续时间的相关性。以p<0.05为差异具有统计学意义。结果:第一部分:肠系膜上动脉解剖变异的MDCT表现及其胚胎学机制1.5580例腹部MDCT血管成像样本中,SMA或CA解剖存在变异549例（9.84%）。其中SMA解剖变异486例（8.71%）,其它解剖变异（SMA无解剖变异,CA分支有解剖变异）63例（1.13%）。发现SMA解剖构型有4大类:正常解剖（5031,90.16%）、HM trunk（248,4.44%）、SM trunk（67,1.2%）和CMT（171,3.06%）。2.248例HM trunk包括2型:HM trunk+GS trunk（230,4.12%）、HM trunk+LGA+SA（18,0.32%）;67例SM trunk包括2型:SM trunk+HG trunk（60,1.08%）、SM trunk+CHA+LGA（7,0.12%）。3.171例CMT包括5型:Ⅰ 型,HGSM trunk（96,56.1%）;Ⅱ型,HSM trunk+LGA（57,33.33%）;Ⅲ型,GSM trunk+CHA（4,2.34%）;Ⅳ型,HGM trunk+SA（3,1.75%）;Ⅴ型,符合CMT定义的其余类型（8,4.68%）。根据LGA起源变异,CMT可进一步分为4类亚型:a型,LGA起源于CA（92,53.8%）;b型,LGA起源于腹主动脉（57,33.33%）;c型,LGA起源于单一共干（11,6.43%）;d型,LGA起源于其余分支动脉（8,4.68%）。第二部分:急性肠系膜上动脉血栓闭塞性肠系膜缺血死亡风险因素的MDCT评价1.33例急性小肠系膜缺血患者住院期间死亡率为54.5%（18/33）。肠壁积气和/或门静脉-肠系膜静脉系统积气（pneumatosis and/or portomesenteric venous gas,PPMVG）（p=0.017）、SMA四个解剖区域血栓栓塞（p=0.036）、共存疾病GIC为3和4类是死亡的风险因素。2.PPMVG、SMA四个解剖区域血栓栓塞、共存疾病GIC为3和4类、联合3个风险因素诊断AMI患者死亡的敏感性和特异性分别为33.3%和100%,27.8%和100%,83.3%和73.3%,88.9%和73.3%。联合三个风险因素（0.88）和共存疾病GIC为3和4类（0.78）诊断死亡的ROC曲线下面积大于PPMVG（0.67）和SMA四个解剖区域血栓栓塞（0.64）。3.无风险因素的AMI患者死亡率为15.4%,有1个、2个和3个风险因素的AMI患者死亡率分别为66.7%、100%和100%。第三部分:急性动脉血栓闭塞性肠系膜缺血MDCT血栓密度与透壁性肠坏死的相关性分析1.33.3%（11/33）患者发生不可逆透壁性肠坏死。腹膜炎（p=0.042）、肠壁变薄（p=0.033）和PPMVG（p=0.010）是发生不可逆透壁性肠坏死的风险因素。不可逆透壁性肠坏死AMI患者的SMA血栓平均CT值显着大于可逆肠缺血损伤AMI患者的SMA血栓平均CT值（41.2±6.1HU vs 34.2±3.0HU,p=0.003）。2.多因素回归分析SMA血栓的CT值可作为独立风险因素预测AMI患者发生不可逆透壁性肠坏死（p=0.044,HR=1.82,95%CI:1.02-3.25）。3.腹膜炎、肠壁变薄、PPMVG和较高密度SMA血栓诊断AMI患者发生不可逆透壁性肠坏死的敏感性和特异性分别为54.5%和81.8%、36.4%和95.5%、45.5%和95.5%、72.7%和86.4%（截断值,36.2HU）。SMA血栓CT值（0.83）诊断AMI患者发生不可逆透壁性肠坏死的ROC曲线下面积大于腹膜炎（0.68）、肠壁变薄（0.66）和PPMVG（0.71）。第四部分:急性动脉闭塞性肠系膜缺血MDCT征象与组织病理学的对照分析:动物实验研究1.SMA闭塞持续时间在2小时范围内,缺血肠组织的Park/Chiu评分为0-5分,肠缺血损伤在MDCT上表现为肠壁强化减低和肠腔略扩张和积液。SMA闭塞持续时间超过4小时,缺血肠组织的Park/Chiu评分为4-7分,肠缺血损伤在MDCT上呈现肠壁强化减低、肠腔扩张积液、肠壁变薄、平扫肠壁密度增高和肠壁积气等影像学征象。2.随着SMA闭塞持续时间延长,在平扫和动脉期MDCT影像上缺血肠壁的CT值减低。在平扫影像上缺血肠壁的CT值（相关系数r=-0.56）、在动脉期影像上缺血肠壁的CT值（相关系数r=-0.85）、以及缺血肠壁的CT值在动脉期和平扫影像上的差值（相关系数r=-0.80）与缺血肠壁组织的Park/Chiu评分呈负相关。研究结论:1.在MDCT影像上系统阐述了SMA解剖变异构型,错位中断、不完全中断和永存纵向吻合是各种类型解剖变异构型的胚胎学机制。2.PPMVG、SMA四个解剖区域血栓栓塞、共存疾病GIC为3和4类是SMA闭塞型AMI患者死亡的风险因素,在临床管理中密切关注这三个风险因素可能改善患者预后。3.与低密度血栓比较,较高密度的血栓阻塞SMA容易发生不可逆透壁性肠坏死。SMA血栓的密度（CT值）可作为预测动脉闭塞型AMI患者发生不可逆透壁性肠坏死的独立风险因素。4.对于动脉闭塞型AMI,随着缺血时间延长和Park/Chiu评分增加,在MDCT影像上显示肠缺血性损伤的征象增多,缺血肠壁的密度降低。在动脉期影像上缺血肠壁的CT值,以及缺血肠壁CT值在平扫和动脉期上的差值定量评估肠缺血性损伤的严重程度优于在平扫影像上缺血肠壁的CT值。
孔祥雷[5]（2020）在《壳多糖酶-3样蛋白1在终末期肾病失功的自体动静脉内瘘中的表达及机制研究》文中提出研究背景和目的:血液透析为终末期肾病（end-stage renal disease,ESRD）患者主要的透析方式,功能良好的透析通路是进行血液透析治疗的首要条件。透析通路被誉为血液透析患者的“生命线”。自体动静脉内瘘（autologous arteriovenous fistula,AVF）相比于中心静脉导管及移植物内瘘,具有感染率低、并发症少等优点,为血液透析患者首选透析通路。随着透析龄的延长,AVF的失功始终是困扰广大血液透析患者及医务人员的难题,寻找AVF失功的危险因素,对于干预和预防内瘘失功至关重要。如何降低AVF的失功并保持其功能通畅,是肾脏科医生尤其是透析通路医生面临的重要课题。多种致病因素包括炎症、氧化应激、剪切应力、穿刺损伤等触发一系列细胞因子级联反应和血管重构,促进细胞增殖和迁移,常发生吻合口及近吻合口静脉流出道血管狭窄而导致AVF的失功,其狭窄的病理表现为静脉内膜增生（neointimal hyperplasia,NIH）。目前NIH的发生机制尚未完全阐明。因此,进一步探讨NIH发生机制和寻找AVF失功的生物标志物及合适的干预靶点具有重要的临床意义。壳多糖酶-3样蛋白1（chitinase-3-like protein 1,CHI3L1）是新近发现的促炎症蛋白。激活的人巨噬细胞（macrophage,Mφ）、平滑肌细胞（smooth muscle cells,SMCs）以及中性粒细胞等均能分泌CHI3L1。CHI3L1是具有多功能分泌的蛋白,可以促进细胞的增殖及分化。研究显示,ESRD患者血清CHI3L1水平升高,且CHI3L1水平增加可以预测ESRD患者的全因死亡。我们前期研究发现,失功的AVF静脉流出道血管组织病理显示NIH显着,细胞成分除了排列紊乱的内皮细胞外主要还包括Mφ和SMCs。CHI3L1与AVF的功能状态之间的关系尚无相关研究,且CHI3L1在Mφ和SMCs之间有无联系,目前尚不清楚。另外国内外小型动物内瘘模型的建立及内瘘失功的机制研究均处于探索阶段。鉴于国内外内疹失功的研究现状,该课题主要研究目的如下:第一部分:通过回顾性队列研究评估AVF建立后的通畅率及通过危险因素模型的建立来探讨AVF失功的影响因素;第二部分:建立生物样本库,通过前瞻性队列研究来探讨血清学标志物CHI3L1对AVF早期失功的预测价值;第三部分:应用尿毒症患者AVF手术时获取的血管组织进行分析,探讨内瘘建立前后静脉血管组织的病理变化;同时建立腺嘌呤诱导的肾衰竭大鼠模型,并进一步建立腹主动脉腔静脉自体内瘘（ACF）动物模型来探讨NIH的发生发展,并与尿毒症患者NIH的发生情况作对比研究;进一步探讨CHI3L1在NIH中的表达及相关机制。研究方法:第一部分:从2013年1月到2016年6月在我院肾病学科住院的418例ESRD患者初次行AVF的患者建立回顾性队列人群,收集入组患者年龄、性别、用药史、生化指标等临床资料,应用Kaplan-Meier生存曲线计算AVF通畅率;Cox多因素回归分析探讨影响AVF失功的危险因素;第二部分:建立生物样本库及人群队列,进行前瞻性队列研究,纳入从2018年1月13日到2019年4月18日在我院肾病学科诊治的109例ESRD患者为研究对象,随访中位时间为15个月。临床资料包括（年龄和性别）、原发病、合并症（高血压和糖尿病）,药物应用情况（叶酸和他汀类药物）等。通过ELISA方法检测血清CHI3L1水平。AVF早期失功定义为在AVF最初应用的3个月内不能完成充分透析（狭窄导致流量不足或血栓形成导致闭塞）。应用受试者工作曲线（ROC）来评价CHI3L1预测AVF早期失功的能力（包括曲线下面积、截断值、敏感性及特异性分析）。应用Kaplan Meier生存曲线来探讨AVF 6个月、12个月、18个月和24个月的初级通畅率,log-rank检验分析不同CHI3L1组间AVF预后情况,应用Cox多因素模型分析CHI3L1与AVF失功的关系;第三部分:临床上选取尿毒症患者血管组织标本,留取AVF术前流出道静脉及内瘘失功行手术重建的流出道静脉组织作对照研究,行血管病理学分析。选择20只成年雌性SD大鼠纳入实验研究,其中10只作为手术实验组,10只作为对照组。对照组给予标准饮食,手术实验组给予0.75%腺嘌呤饮食4周,建立肾衰竭模型,然后建立ACF。检测血清肌酐及尿素氮水平,评估肾脏功能。应用多普勒超声评估ACF通畅性（直到术后6周）,并行肾脏病理学染色及血管组织病理学分析。通过免疫组化、免疫印迹及免疫荧光共染色等方法探讨CHI3L1在NIH中的表达及相关机制。研究结果:第一部分:（1）该研究人群平均年龄为54.5±14.5岁（从18岁到87岁）,59.8%为男性。在ESRD的病因中慢性肾小球肾炎占39.0%,男性比女性有较高水平的血红蛋白、血白蛋白、血肌酐、尿酸及较高比例的糖尿病（p<0.05）;（2）Kaplan-Meier生存曲线分析显示,AVF建立后（n=418）,12个月,24个月,36个月,48个月及60个月的初级通畅率分别为85.6%,79.7%,75.1%,73.2%和73.2%,提示初次行AVF手术,其1年的通畅率比较理想,但是第5年的失功率高达26.8%。其中,根据年龄及性别分组,结果显示男性患者AVF通畅率高于女性;年轻患者通畅率高于老年患者,差异有统计学意义（P<0.05）;（3）应用Cox多因素模型探讨AVF失功的危险因素,在校正了混杂因素后,年龄（HR值1.19,95%CI,1.05-1.35）及D二聚体（HR值1.07,95%CI,1.02-1.12）等为AVF失功的独立危险因素。文献证实ESRD患者炎症状态与D二聚体水平升高密切相关,CHI3L1与静脉血栓（主要标志物D二聚体水平升高）的发生相关。第二部分:（1）该研究人群平均年龄为53.2±14.7岁,男性占67.9%。在随访过程中,24例（22.0%）患者发生了AVF的早期失功。AVF失功组血清CHI3L1基线水平明显高于AVF功能良好组,分别为 157.3（94.7-272.7）ng/mL vs.89.6（51.7-151.5）ng/mL,两组之间差异具有统计学意义（P=0.001）;（2）ROC曲线分析显示CHI3L1可以预测AVF的失功,截断值为122.6ng/ml,曲线下面积为0.73（p=0.001）;（3）Kaplan-Meier生存分析显示AVF 6个月、12个月、18个月及24个月的初级通畅率分别为95.4%,88.1%,81.7%和78.0%,我们根据CHI3L1的诊断界值进行分组,分成 CHI3L1≥122.6ng/mL 和 CHI3L1<122.6ng/mL 两组,结果显示 AVF 在 CHI3L1<122.6ng/mL组比CHI3L1>122.6ng/mL组具有较高的通畅率（Log-rank检验,P=0.001）;（4）应用Cox多因素模型探讨AVF失功的危险因素。根据CHI3L1的截断值分成的两组,在单因素分析中,血清CHI3L1水平（≥122.6ng/mL vs.<122.6ng/mL）与AVF的早期失功显着相关（HR 3.93;95%CI:1.63-9.49）。在校正了年龄、性别、糖尿病和 eGFR 后,基线 CHI3L1（>122.6ng/mL vs.<122.6ng/mL）与AVF的早期失功仍显着相关,其HR值为3.67（95%CI:1.44-9.36）。第三部分:（1）入组尿毒症患者AVF术前静脉组织存在NIH,表现为同心性增生,内瘘失功的静脉组织表现为偏心性不规则增生,在新生内膜区域伴有新生血管形成。在动物模型实验中,与对照组大鼠比较,肾衰竭大鼠血肌酐及尿素氮升高,分别为 0.80±0.47mg/dL vs.0.65±0.26 mg/dL（p=0.39）和 34.7（27.5-98.2）mg/dLvs.24.9（20.9-27.3）mg/dL（p=0.005）。肾衰竭大鼠肾脏病理表现为典型的炎细胞浸润、间质小管结晶沉积、间质纤维化、血管损伤、近端及远端肾小管萎缩。在人体及肾衰竭大鼠内瘘组织,均出现明显的NIH,EVG染色提示内弹力层断裂;且免疫组化提示人体及肾衰竭大鼠内瘘组织NIH成分类似,除了排列紊乱的内皮细胞,主要为desmin（-）SMA（+）及vimentin（+）肌成纤维细胞、SMA（+）desmin（+）平滑肌细胞（SMCs）,部分PGM-1（+）巨噬细胞（Mφ）;（2）GEO数据分析显示动物模型AVF组织中M2型Mφ浸润明显,M2型Mφ免疫浸润与上调的壳多糖酶-3样蛋白1（CHI3L1）明显相关。在尿毒症患者失功的血管组织NIH中可见较多的SMCs及Mφ;免疫组化、免疫印迹及荧光染色提示CHI3L1表达明显升高,免疫双标荧光染色显示CHI3L1与极化的M2 Mφ及SMCs均存在共定位。研究结论:第一部分:（1）随着时间的推移,AVF失功的比例逐年升高;（2）年龄、基线D二聚体水平等为AVF失功的独立危险因素;（3）D二聚体水平升高与CHI3L1有关,提示CHI3L1可能与AVF的失功有关。第二部分:通过该前瞻性队列研究进一步证实ESRD患者血清CHI3L1水平升高与AVF的早期失功相关,提示CHI3L1可以作为AVF早期失功的生物学标志物。第三部分:（1）在腺嘌呤诱导的肾衰竭模型基础上行ACF手术,构建大鼠肾衰竭动静脉内瘘模型,对比人体失功内瘘血管组织,病理组织学染色显示NIH主要细胞成分为内皮细胞、肌成纤维细胞、平滑肌细胞及巨噬细胞,证实该肾衰竭大鼠模型可以模拟尿毒症患者AVF典型的NIH表现,为进一步的基础研究及药物干预实验奠定基础;（2）通过GEO数据库分析提示在动物模型内瘘血管组织中M2 Mφ免疫浸润明显,且M2 Mφ浸润与CHI3L1明显相关;（3）在人体失功内瘘静脉组织NIH中可见较多的SMCs及Mφ;CHI3L1表达明显升高,且与极化的M2 Mφ及SMCs均存在共定位,这提示CHI3L1可能介导M2 Mφ极化改变周围免疫微环境与SMCs功能串话参与NIH的发生。
俞德帅[6]（2020）在《基于“外风引动内风”理论的风寒诱发斑块破裂及血栓形成动物模型》文中指出背景:环境因素是诱发冠状动脉粥样硬化性心脏病（CVD）患者病情加重、甚至发生急性冠状动脉综合征（ACS）的常见原因之一。王显教授在临床实践过程中观察到,在大风降温的天气里因ACS入院的患者明显增多,并将这种现象与“络风内动”理论体系中“外风引动内风”联系起来。动脉粥样硬化斑块破裂及继发血栓形成是导致ACS发生的主要机制之一。基于“外风引动内风”的理论,我们猜测以风寒为代表的“外风”可能会引起斑块破裂及继发血栓形成的“络风内动”事件发生。目的:探索风、寒和风寒混合刺激对易损斑块动物模型发生斑块破裂及继发血栓形成的概率的影响;寻找出合适的风寒刺激条件,由此构建心脉病证“外风引动内风”动物模型并观察其中医证候变化。研究方法:雄性ApoE-/-小鼠+高脂饲养+右侧颈总动脉串联缩窄术（TS）构建动脉粥样硬化易损斑块模型,术后11周将动物随机分为7组:空白组、纯寒组、纯风组、风寒6h组、风寒8h组、风寒10h组、风寒18h组,通过人工气候箱给予相应条件的纯风/纯寒/风寒刺激。干预结束后立即取材,主要从病理形态学角度比较各组间斑块纤维帽破裂、斑块内出血、管腔内血栓形成3个终点事件的发生率,并评估各组的斑块面积、血管管腔狭窄程度、以及斑块内各成分含量（脂质、平滑肌细胞、巨噬细胞）等基线特征,以验证急性风寒刺激是否会增加斑块破裂及继发血栓形成的风险。此外,我们还观察了小鼠的一般状况、使用Longa评分判断小鼠有无神经系统缺损,使用中医证候积分量表评估急性环境刺激对小鼠中医证候的影响,探索心脉病证“外风引动内风”的中医证候表现。研究结果:1.本研究中TS模型造模成功率81.3%,影响成模的主要因素包括术中出血和手术操作的误差;2.气象因素刺激可引起小鼠烦躁、蜷缩、扎堆、发抖、二便失禁,皮肤、粘膜色泽暗淡,触诊可见爪凉、尾凉,但无新发心脑血管疾病症状;3.小鼠早期中医证候以“寒症”和“表证”为主,随病邪深入或有“肝风内动”的表现,干预时间过长后出现“气虚”或“阳虚”的表现,有的小鼠并夹杂“血瘀”征象;3.急性吹风、寒冷和风寒刺激都有促进TS小鼠发生斑块破裂的趋势,但只有风寒18h组的概率有统计学意义上的升高（P<0.001）;4.各风寒组均有镜下可见的斑块内出血和小的管腔内血栓形成,风寒组和纯风组有肉眼可见的血栓形成;5.各组管腔狭窄程度普遍较高,斑块面积较大,引起严重狭窄的主要原因是大量的平滑肌细胞和细胞外基质分泌增加。结论和意义:1.小鼠颈动脉串联缩窄（TS）易损斑块模型适用于研究环境因素对斑块破裂及血栓形成的影响。2.急性风寒刺激可能会引起斑块破裂事件增加,急性吹风、风寒刺激可能会增加继发血栓形成的概率,但所有刺激均未引起动物出现神经系统缺损症状;3.急性风寒刺激等“外风”可引发斑块破裂及血栓形成等“络风内动”事件,且动物会表现出相应的中医“动风”征象。
程振兴[7]（2020）在《循环组蛋白与急重症时多器官功能障碍综合征发病机制相关性的研究》文中研究表明背景:多器官功能障碍综合征（multiple organ dysfunction syndrome,MODS）是指机体受到休克、创伤、感染、烧伤等严重打击后,短时间内同时发生两个或两个以上器官或系统功能障碍或衰竭、不能维持自身的生理功能,从而影响机体内环境稳定的临床综合征。依受损器官数量差异,MODS患者病死率维持在30%-100%之间。MODS的特征是多个脏器同时、而非依次发生功能障碍,MODS的介质至今仍未明确。凝血激活、微循环衰竭、缺氧以及细菌毒素都被认为是MODS的潜在介质,但其真正作用尚未得以充分证明。正常情况下,位于细胞核内的组蛋白（histones）是DNA包装、基因调控过程所必需的结构性蛋白质;在多种原因导致的细胞损伤过程中,细胞核内的染色质分解后将组蛋白释放到细胞外形成胞外组蛋白（extracellular histones）。若机体在短时间内发生广泛性组织损伤或细胞死亡,随即产生的大量胞外组蛋白进入血液循环即为循环组蛋白（circulating histones）。目的:胞外组蛋白会损伤单器官。本研究将阐述循环组蛋白是否以第二次打击的方式介导创伤、急性胰腺炎、脓毒症等原发性急重症时MODS的发生与发展,与此同时我们还对急重症模型小鼠的高浓度循环组蛋白的来源进行初步探讨。方法:总体来说,我们主要通过将临床研究、体外实验以及建立创伤、急性胰腺炎和脓毒症等急重症动物模型相结合的方式阐明循环组蛋白在临床常见急重症时MODS发生与发展中的作用;通过体内、外实验对脓毒症模型小鼠高水平循环组蛋白的来源进行初步探讨。1.循环组蛋白在急重症患者的特征及其临床意义采用蛋白质免疫印迹法（western blotting,WB）检测最终纳入的420名重症监护病房（intensive care unit,ICU）急重症患者入院时血浆组蛋白状况并通过一定方法换算出各自相应的血浆组蛋白浓度;检测纳入病人的肝、肾功能、心肌肌钙蛋白T（cTnT）、氧合指数等多脏器功能指标,及时采集病人入院时的序贯器官衰竭评分（sequential organ failure assessment,SOFA）评分、入院后48h-72h的MODS发生情况以及住院后28天内的病死情况等临床数据,统计分析循环组蛋白浓度与急重症患者上述各项临床数据之间的关系。另外采集10名健康献血者的血液以分离血浆或血清用于相关的体外实验。2.胞外组蛋白对多种器官来源细胞的毒性作用首先,分别使用添加不同剂量小牛胸腺组蛋白后的健康人血清、含不同浓度组蛋白的急重症患者血清处理人源性内皮细胞系EA.hy926,选择抗组蛋白单链抗体（anti-histone single chain variable fragment,ahsc Fv）、非抗凝肝素（non-anticoagulant heparin,Heparin）作为胞外组蛋白拮抗剂;然后,使用含高浓度循环组蛋白的急重症患者血清处理以下不同器官来源细胞以进一步观察循环组蛋白对组织细胞的非特异性毒性作用:小鼠心肌细胞（HL-1）、原代人肺支气管-肺泡上皮细胞（HSAEp C）、人永生化肝细胞（THLE-3）及原代人肾皮质上皮细胞（HRCE）。采用流式细胞术检测上述处理后各种细胞的PI阳性率（细胞死亡率）,以判断胞外组蛋白的细胞毒性作用。3.循环组蛋白在急重症模型小鼠MODS发病机制中的作用选择野生型C57BL/6j以建立各类急重症的小鼠模型。采用重物自由落体撞击并控制撞击次数法建立轻、中、重三种不同损伤程度的小鼠肢体闭合性创伤模型;通过腹腔注射4次、12次雨蛙素以及胆总管逆行注射胆酸盐法（taurocholate,TCL）诱导轻、中、重三种不同胰腺损伤程度的小鼠急性胰腺炎模型;选择在结扎75%长度的盲肠后制造两个或四个肠内容物溢出穿刺孔的方式建立小鼠次重度、重度盲肠结扎后穿孔（cecal ligation and puncture,CLP）模型;以静脉注射ahsc Fv或肌肉注射Heparin干预以上各模型小鼠,评价抗组蛋白治疗能否减轻这些小鼠的多脏器功能损伤。以WB法检测急重症模型小鼠的血浆组蛋白浓度,通过检测血浆ALT、BUN、cTnT来反映各模型小鼠肝、肾功能及心肌损伤情况,通过显微镜下肺组织（H&E染色）损伤评分法评估各模型小鼠肺损伤情况;经H&E染色、抗激活型Caspase-3免疫组化的方法观察各模型小鼠心、肝、肺、肾、肠、胸腺、脾脏等多脏器组织病理学特点;统计分析上述急重症模型小鼠循环组蛋白水平与多器官损伤之间的相关性,评价抗组蛋白治疗对重度CLP模型小鼠建模后72h生存率的影响。4.急重症模型小鼠的循环组蛋白来源的初步探讨为判断胸腺、脾脏对小鼠脓毒症时循环组蛋白来源的贡献,除常规使用WT C57BL/6j小鼠建模外,我们还要用到WT BALB/c小鼠及缺乏胸腺的BALB/c nude小鼠,同时需在以上小鼠完成脾脏切除术后再进行诱发脓毒症的相应处理。由于在脾脏切除术后继续对实验小鼠进行CLP操作会造成额外的损伤,进而可能影响脓毒症的自然发病过程;革兰氏阴性杆菌感染依然在细菌性脓毒症的病因中占有重要地位,而定量细菌腹腔注射法建立小动物脓毒症模型具有操作简便、效果明显且稳定的特点,我们故在此通过腹腔注射大肠杆菌K-12的方式对脾脏切除后的C57BL/6j小鼠诱发脓毒症。由于缺乏胸腺的BALB/c nude小鼠自身具有免疫缺陷性,这些小鼠的经细菌性腹膜炎（CLP术或腹腔注射大肠杆菌）导致脓毒症的病程可能不利于揭示循环组蛋白水平的变化特点,在此情况下使用造模成分明确且效果可靠、即腹腔注射LPS成为诱导BALB/c nude小鼠发生脓毒症的首选替代方法。将凋亡标记蛋白Annexin-V与荧光素m-Cherry联合形成Annexin-V/m-Cherry耦合物,因此在近红外激发光下m-Cherry的荧光强度标志着凋亡信号的强弱。通过近红外成像技术比较脓毒症模型小鼠在静脉注射m-Cherry/Annexin-V后多脏器的荧光强度;腹腔注射大肠杆菌K-12后的C57BL/6j小鼠在不同时间点接受皮下注射泛Caspases抑制剂Z-VAD-FMK;向健康的C57BL/6j小鼠尾静脉注射小牛胸腺组蛋白以探讨高浓度的循环组蛋白是否会引起脾细胞发生过度凋亡;经H&E染色、抗激活型Caspase-3免疫组化的方法观察各种方式处理后小鼠的多脏器组织病理学特点;比较野生型BALB/c、BALB/c nude及脾脏切除后的BALB/c nude小鼠在接受腹腔注射LPS后40h左右的生存率。目前人们普遍认为细胞坏死而并非细胞凋亡过程能够释放组蛋白到细胞外。糖皮质激素不仅是引发淋巴细胞凋亡的典型信号,也是临床通过诱发凋亡治疗骨髓瘤、白血病等恶性血液肿瘤的常用化疗药物。为明确细胞在发生凋亡过程中是否会直接释放组蛋白到细胞外,我们在体外实验中先采用水溶性糖皮质激素处理人B淋巴细胞系Daudi细胞、人T淋巴细胞系Jurkat细胞,然后经流式细胞术检测两种细胞的凋亡情况,通过WB法检测并比较细胞培养上清中组蛋白H3的含量变化情况。结果:1.循环组蛋白在急重症患者的特征及其临床意义总体看来,所有纳入ICU的急重症病人入院时循环组蛋白浓度[24.7（8.0,46.7）μg/ml]明显高于健康献血者[1.3（0,2.1）μg/ml]。按病因对纳入病人分类后可见,重度创伤、重症胰腺炎、脓毒症患者入院时循环组蛋白水平较其他病种患者的显着升高,但这三种疾病患者之间循环组蛋白浓度差异无统计学意义。Spearman秩相关性检验表明,纳入病人入院时循环组蛋白水平与肝功能[ALT（rs=0.545;P<0.0001）]、肾功能[BUN（rs=0.496;P<0.0001）]、呼吸功能[Pa O2/Fi O2（rs=-0.360;P=0.015）]损伤以及心肌损伤标志物[c Tn T(rs=0.607;P<0.01]升高之间均存在正相关性;入院伴发MODS或住院28天内死亡病人的入院时循环组蛋白浓度明显偏高{[30.1（7.3,63.2）μg/ml vs.10.8（4.3,30.1）μg/ml;P<0.0001]、[32.7（14.4,66.9）μg/ml vs.20.1（6.7,40.5）μg/ml;P<0.0001]}。另外,纳入病人入院时循环组蛋白浓度不仅能预测入院后48h-72h之间MODS发生情况,还有助于推断病人住院后28天病死率。2.胞外组蛋白对多种器官来源细胞的毒性作用健康人血清在加入外源性组蛋白后会对人内皮细胞系EA.Hy926产生剂量依赖性的毒性作用,当用组蛋白浓度≥30ug/ml的病人血清处理EA.hy926细胞后,其存活率也显着降低;与此相反,用胞外组蛋白拮抗剂ahsc Fv或Heparin处理均可显着降低胞外组蛋白对EA.Hy926内皮细胞的毒性作用。用含50μg/ml小牛胸腺组蛋白的健康人血清或组蛋白含量也超过50μg/ml的急重症病人血清处理不同器官来源的细胞（小鼠心肌细胞、人肝细胞、人肾皮质上皮细胞和人支气管-肺泡上皮细胞）后,这些细胞的存活率均明显下降。3.循环组蛋白在急重症模型小鼠MODS发病机制中的作用循环组蛋白的浓度—时间曲线表明,中度创伤、次重度CLP及TCL胰腺炎模型小鼠的循环组蛋白浓度峰值时间分别为建模后8h、16h、16h;各类疾病模型小鼠在各达峰时间的循环组蛋白浓度随病情加重而升高。经相关性分析后发现,各类疾病模型小鼠的循环组蛋白浓度与受损的肝功能（ALT）、肾功能（BUN）及升高的肌钙蛋白I（cTnT）、肺组织损伤评分得分（lung injury score,LIS）均呈正相关;ahsc Fv、Heparin抗组蛋白治疗能显着改善重度创伤、重度CLP及TCL胰腺炎模型小鼠的ALT、BUN、cTnT、LIS等受损脏器功能指标;其中,无论在建模前还是建模后开始抗组蛋白治疗,重度CLP模型小鼠的72h存活率均得以显着改善。多脏器组织切片抗激活型Caspase-3免疫组化检测发现,重度创伤、重度CLP及TCL胰腺炎模型小鼠的胸腺与脾脏存在细胞过度凋亡现象。4.急重症模型小鼠的循环组蛋白来源的初步探讨经腹腔注射适量大肠杆菌K-12能成功诱导野生型C57BL/6j小鼠发生脓毒症,同时细菌注射后10h循环组蛋白浓度达到较高水平（322.8±100.6μg/ml）,此后其值持续升高,峰值时间约在注射细菌后16h左右（478.2±166.4μg/ml）,且在24h仍处于高水平（424.8±154.1μg/ml）。多脏器近红外成像结果表明,从腹腔注射细菌后4h开始,C57BL/6j小鼠胸腺与脾脏的凋亡信号已明显升高,其中胸腺的凋亡信号一直持续升高到注射细菌后24h,脾脏凋亡信号高峰时间是细菌注射后8h;脏器组织切片H&E染色与抗激活型Caspase-3免疫组化染色结果显示,腹腔注射大肠杆菌后24h左右C57BL/6j小鼠的胸腺与脾脏淋巴细胞数大幅减少,两者均存在大面积细胞凋亡现象,而心、肝、肾等重要器官均未见明显的实质细胞凋亡;统计学分析发现,脓毒症模型小鼠的脾脏凋亡细胞数目与循环组蛋白浓度升高呈正相关（r=0.78;P<0.001）。将一定剂量的小牛胸腺组蛋白经尾静脉注射到C57BL/6j小鼠体内,循环组蛋白升高水平与小鼠发生严重脓毒症时相似,但免疫组化检查结果并未显示脾脏淋巴细胞凋亡增加,据此推断模型小鼠脾脏与胸腺细胞凋亡是循环组蛋白的来源,而不是循环组蛋白作用结果。皮下注射泛Caspases抑制剂Z-VAD-FMK能阻断细胞凋亡,循环组蛋白浓度也相应降低,提示细胞凋亡促进了循环组蛋白浓度的升高。我们还发现,脾脏切除后的C57BL/6j小鼠再经腹腔注射大肠杆菌K-12诱发脓毒症时,其循环组蛋白水平较未切除脾脏组显着降低（137.4.57±31.2μg/ml vs.53.8±21.8μg/ml;P<0.001）;与WT BALB/c nude小鼠比较（84.57±13.51μg/ml）,胸腺缺失（BALB/c nude小鼠）（33.49±7.59μg/ml）或胸腺缺失联合脾脏切除（BALB/c nude小鼠+脾脏切除术）（13.47±3.27μg/ml）能有效降低经腹腔注射LPS诱发脓毒症时的循环组蛋白水平并显着改善建模后实验小鼠的40h存活率。体外培养的Daudi细胞（B淋巴细胞系）、Jurkat细胞（T淋巴细胞系）均随氢化可的松剂量依赖的、不同程度的细胞凋亡（Annexin V+）,蛋白质免疫印迹法也证实未经糖皮质激素处理的淋巴细胞上清未见明显的组蛋白H3条带,而糖皮质激素处理的两种淋巴细胞上清液存在氢化可的松剂量依赖的、浓度高低不等的组蛋白H3。结论:1.重度创伤、重症胰腺炎及脓毒症等急重症患者入院时的高水平循环组蛋白与MODS进展及不良预后密切相关。2.添加外源性组蛋白后的健康人血清或含高水平循环组蛋白的急重症患者血清均对多器官来源的细胞产生由组蛋白介导的、非细胞特异性的毒性作用;抗组蛋白处理能有效抑制这种细胞毒性效应。3.在实验小鼠发生重度创伤、TCL胰腺炎（重症胰腺炎）、重度CLP（重度脓毒症）等多种原发性急重症后,循环组蛋白通过直接作用、以第二次打击的方式同时损伤多个脏器从而参与介导了MODS的发生与发展;抗组蛋白治疗有效改善以上急重症模型小鼠的MODS,显着提高重度脓毒症模型小鼠的存活率。4.胸腺与脾脏是脓毒症模型小鼠高水平循环组蛋白的重要来源,具体机制主要涉及脓毒症时胸腺与脾脏细胞的过度凋亡。
邵霖霖[8]（2020）在《剔络化瘀方改善视网膜分支静脉阻塞微循环作用及机制研究》文中研究指明目的:1.建立稳定的BRVO大鼠模型,寻找合理的评价方式,为临床药物干预治疗提供实验依据。2.观察剔络化瘀方对视网膜静脉阻塞大鼠模型视网膜血管的保护作用,以及对ICAM-1因子,凝血、血流变功能的影响。3.评估剔络化瘀方对视网膜分支静脉阻塞患者患眼及对侧眼黄斑区血流密度的影响,定量评估剔络化瘀方的作用机理。方法:1.采用532nm氪绿激光照射尾静脉注射孟加拉红溶液的SD大鼠眼底静脉,建立BRVO大鼠模型。通过苏木精-伊红染色法观察大鼠视网膜病理组织变化,视网膜消化铺片观察视网膜血管形态变化,彩色眼底照相、眼底荧光血管造影（Fundus fluorescein angiograph,FFA）及超广角眼底血管造影（Ultra-widefield fluorescein angiography,UWFA）观察眼底表现及血管再通情况。2.随机分为正常组,余SD大鼠建立BRVO模型,造模后随机分为模型组、复方血栓通组、剔络化瘀方低、中、高剂量组,除正常组外其余各组在造模后2h开始灌胃。于1d、3d、7d、21d综合眼底照相、周边视网膜照相、FFA评判大鼠眼底特征、血管再通情况得分,观察视网膜组织切片HE染色、血清中ICAM-1的变化;观察3d、7d、21d视网膜消化铺片,凝血、血液流变学的改变。3.采用前瞻性研究方法,纳入符合标准的BRVO患者,以剔络化瘀方为干预手段,治疗组患者予口服中药剔络化瘀方,入组时CRT高度>500μm,玻璃体腔注射抗VEGF药物1次;访视CRT高度,较上次访视增加>100μm,玻璃体腔注射抗VEGF药物1次。记录治疗前、治疗后4、8、12周正常眼、治疗组双眼（患眼和对侧眼）的临床资料,包括最佳矫正视力、浅层视网膜血流密度（Superficial capillary plexus,SCP）、深层视网膜血流密度（Deep capillary plexus,DCP）、黄斑中心凹视网膜厚度（Central retinal thickness,CRT）,黄斑中心凹血管区（FAZ）面积及抗VEGF药物注射次数。结果:1.制备BRVO大鼠模型共30只（右眼）,未发生死亡,检眼镜下观察,模型成功率为100%。正常组眼底彩照示视网膜呈淡红色,视盘居中,动静脉血管管径均匀,呈放射状相间分布,隐约可见脉络膜血管。FFA示视网膜充盈时间正常,静脉较动脉管径粗,无毛细血管扩张及荧光渗漏。HE染色视网膜层次清晰,结构整齐,节细胞层、内核层、外核层细胞排列紧密。视网膜消化铺片示视网膜呈连续树枝状,管径粗细一致,可见动脉、静脉及毛细血管网,动脉染色较深,静脉染色较浅。血管壁外侧可见圆形或三角形,核较小,着色深的周细胞,血管内可见椭圆形,核较大,着色浅的内皮细胞,各血管分布规则,走形规整。模型组眼底彩照示1d视网膜散在火焰状出血,血栓形成,静脉血流中断,呈腊肠样改变,走形迂曲,阻塞区网膜水肿;3d阻塞静脉管径不均,走形迂曲,视网膜颞侧见黄白色渗出及火焰状出血;7d视网膜色淡白,静脉迂曲,管径不均。14d视网膜色淡红,血管呈放射状走形,管径均匀。21d视网膜色淡,静脉较细,血管走形尚可。FFA示1d视网膜静脉充盈迟缓,管径扩张,走形迂曲,阻塞部血管呈低荧光及节段样荧光充盈,部分出血遮蔽荧光,视网膜轻度渗漏。3d部分血管再通,管壁荧光着染,阻塞静脉供应区可见毛细血管扩张、NP区。7d、14d、21d视网膜充盈时间正常,阻塞静脉血管通畅,走形迂曲,管径不规则,可见侧支循环形成。HE染色模型组视网膜血管腔内可见红细胞聚集,网膜水肿,细胞排列疏松,外丛状层、内核层可见空腔样改变。视网膜消化铺片示视网膜血管染色浅分布疏松,阻塞静脉血管内皮细胞、周细胞缺失,管径不均,可见血管闭锁、无细胞毛细血管及无细胞的小静脉血管。2.（1）1d模型组大鼠与复方血栓通组、剔络化瘀方低、中、高剂量组两两比较均差异无统计学差异（P>0.05）;3d干预治疗后,剔络化瘀方低、中、高剂量组、复方血栓通组与模型组比较可以改善眼底特征和血管再通情况,差异具有统计学差异（P<0.05）,剔络化瘀方低剂量组和复方血栓通组干预后由典型特征转为中度典型特征;剔络化瘀方中剂量和高剂量组由典型特征转为不典型特征,组间比较不具有统计学差异（P>0.05）,7d药物干预组特征转为不典型,剔络化瘀方高剂量组与正常组比较无差异（P>0.05）;模型组1d与3d均具有典型眼底特征,两组间无统计学差异（P>0.05）,21d模型组大鼠视网膜在眼底表现、血管再通评价转为不典型。复方血栓通组、剔络化瘀方低剂量、中剂量组各时间点治疗前后存在统计学差异（P<0.05）;剔络化瘀方高剂量组7d与21d 比较不具有统计学差异（P>0.05）。（2）正常组视网膜层次清晰,神经节细胞富集,内核层、外核层细胞排列整齐。1d模型组和各药物干预组视网膜各层细胞排列疏松,部分缺失,呈空洞样改变,内核层可见红细胞;复方血栓通组和剔络化瘀方低、中、高剂量组在21d未发生萎缩变性。正常组视网膜动脉染色深,静脉浅,毛细血管网均匀分布,走形流畅,血管腔外侧为核小且深染的周细胞,管腔内为浅染的梭形内皮细胞。3、7、21d:模型组视网膜可见多处无细胞毛细血管,大量周细胞脱失,血管分布随时间延长逐渐疏松;复方血栓通组:无细胞毛细血管数较模型组大鼠少,血管管径均匀,21d毛细血管间隙变大;剔络化瘀方低剂量组:血管管径均匀,走形柔和,无细胞毛细血管数较模型组、复方血栓通组少;剔络化瘀方中剂量组:血管分布一致性好,无细胞毛细血管较复方血栓通组和剔络化瘀方低剂量组减少:剔络化瘀方高剂量组:视网膜血管管径较粗,无细胞毛细血管、凋亡细胞较少。（3）1d、3d组内比较具有显着统计学差异（P<0.01）。1d、3d模型组ICAM-1水平升高,1d高于3d,与正常组比较具有显着统计学差异（P<0.01）,7d模型组ICAM-1值小于3d模型组,差异具有统计学意义（P<0.05）,7d模型组ICAM值小于21d模型组,差异不具有统计学意义（P>0.05）。1d、3d复方血栓通组、剔络化瘀方低剂量、中剂量、高剂量ICAM值低于模拟型组,差异有明显统计学意义（P<0.01）,药物干预组间比较无差异（P>0.05）,高剂量组ICAM-1水平较其他组低。（4）3d模型组与正常组比较凝血酶原时间显着降低,差异具有统计学意义（P<0.01）;3d所有药物干预组较模型组凝血酶原时间提高,具有显着差异（P<0.01）,3d模型组APTT较正常组缩短,差异具有统计学意义（P<0.05）;复方血栓通组、剔络化瘀方低、高剂量组比模型组升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;3d纤维蛋白原模型组较正常组增高,差异具有统计学意义（P<0.05）;剔络化瘀方高剂量组与模型组比较纤维蛋白原含量低,差异具有统计学意义（P<0.05）,剔络化瘀方高剂量组较正常组纤维蛋白原含量低,差异不具有统计学意义（P>0.05）,提示剔络化瘀方高剂量组可以降低纤维蛋白原含量,改善血液循环。7、21d活化部分凝血活酶时间、纤维蛋白原2个凝血因子与正常组比较,不具有统计学差异（P>0.05）。（5）3d全血粘度1（1/s）、全血粘度50（1/s）、全血粘度200（1/s）、血浆粘度、红细胞聚集指数模型组较正常组升高,差异具有统计学意义（P<0.05）;与模型组比较,复方血栓通组、剔络化瘀方低、中、高剂量组可降低全血粘度1（1/s）、全血粘度50（1/s）、红细胞聚集指数、血浆粘度,差异具有统计学意义（P<0.05）;剔络化瘀方中剂量组降低全血粘度1（1/s）较复方血栓通组程度大,差异具有统计学意义（P<0.05）。与其他治疗组比较,剔络化瘀方中剂量组显着降低全血粘度50（1/s）,具有显着统计学差异（P<0.01）,较复方血栓通组降低程度大、效果好,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较复方血栓通组、剔络化瘀方中剂量、高剂量组可降低全血粘度200（1/s）,差异具有统计学意义（P<0.05）,剔络化瘀方低剂量组降低全血粘度200（1/s）与模型组相比程度小,不具有统计学差异（P>0.05）。7d全血粘度1（1/s）、全血粘度50（1/s）、全血粘度200（1/s）模型组较正常组显着升高,差异具有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较复方血栓通组、剔络化瘀方中剂量、高剂量可显着降低全血粘度1（1/s）,具有显着统计学意义（P<0.01）;剔络化瘀方低剂量降低全血粘度1（1/s）程度不及其余药物干预组,差异具有统计学意义（P<0.05）;剔络化瘀方中剂量组较低剂量组降低全血粘度1（1/s）,差异具有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较复方血栓通组、剔络化瘀方低剂量、中剂量、高剂量可降低全血粘度50（1/s）,差异具有统计学意义（P<0.05）。与模型组比较复方血栓通组、剔络化瘀方低剂量、高剂量组可降低全血粘度200（1/s）,差异具有统计学意义（P<0.05）,剔络化瘀方中剂量组显着降低全血粘度200（1/s）具有显着统计学差异（P<0.01）。7d血浆粘度、红细胞聚集指数各组内两两比较,不具有统计学差异（P>0.05）。21d各组全血粘度1（1/s）、全血粘度50（1/s）、全血粘度200（1/s）、血浆粘度、红细胞聚集指数比较,无统计学差异（P>0.05）。3.（1）治疗组与正常组比较:浅层视网膜血流密度、深层视网膜血流密度减少,LogMAR视力、黄斑中心凹视网膜厚度增加,差异具有显着统计学意义（P<0.01）;黄斑区无血管区面积扩大,差异具有统计学意义（P<0.05）。治疗组LogMAR视力与黄斑中心凹视网膜厚度、黄斑中心凹血管区（FAZ）呈正相关,差异具有显着统计学意义（P<0.01）;LogMAR视力与深层毛细血管层血流密度呈负相关,差异具有统计学意义（P<0.05）;LogMAR视力与浅层毛细血管层血流密度无相关,差异无统计学意义（P>0.05）。黄斑中心凹无血管区面积与深层毛细血管层血流密度呈负相关,差异具有显着统计学意义（P<0.01）;黄斑中心凹无血管区面积与浅层毛细血管层血流密度无相关,差异无统计学意义（P>0.05）。黄斑中心凹视网膜厚度与深层毛细血管层血流密度呈负相关,差异具有统计学意义（P<0.05）。黄斑中心凹视网膜厚度与浅层毛细血管层血流密度无相关,差异无统计学意义（P>0.05）。（2）治疗组患眼与对侧眼SCP分别为43.80±2.89%和49.63±3.42%,DCP分别为38.65±1.97%和48.28±2.92%,患眼SCP、DCP较低,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。（3）治疗组患眼与治疗前比较:访视4周SCP增加,差异具有统计学意义（P<0.05）,DCP虽有增加,但差异不具有统计学意义（P>0.05）;访视8周、12周SCP、DCP增加,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。与访视4周比较:访视8周SCP增加,但差异不具有统计学意义（P>0.05）;DCP增加,差异具有显着统计学意义（P<0.01）;访视12周SCP、DCP均增加,差异具有统计学意义（P<0.01）。与访视8周比较:访视12周SCP增加,差异具有统计学意义（P<0.05）,DCP增加较明显,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。访视4周、8周、12周FAZ面积分别为0.37±0.07,0.39±0.07,0.41±0.07,FAZ面积逐渐扩大,访视4周、访视8周、访视12周较治疗前比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。LogMAR BCVA 视力治疗后,分别为 0.49±0.23,0.39±0.15,0.29±0.11,由治疗前 0.58±0.23提高至0.29±0.11,访视8周、访视12周较治疗前比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。黄斑中心凹视网膜厚度CRT治疗后,分别为401.40±152.71,331.87±61.68,272.73±21.30,黄斑水肿减轻,访视4周较治疗前,差异不具有统计学意义（P>0.05）,访视8周、访视12周较治疗前比较,差异具有统计学意义（P<0.05）。（4）治疗组对侧眼与治疗前比较:访视4周SCP、DCP,差异不具有统计学意义（P>0.05）;访视8周SCP、DCP增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;访视12周SCP、DCP增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。与访视4周比较:访视8周SCP增加,差异具有显着统计学意义（P<0.01）;DCP增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;访视12周SCP、DCP增加,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。与访视8周比较:访视12周视网膜SCP增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;DCP增加,差异具有显着统计学意义（P<0.01）。（5）治疗组玻璃体腔注射抗VEGF药物平均次数0.5次,其中4人注射2次、6人注射1次、20人未注射。结论:1.采用尾静脉注射光敏剂孟加拉红溶液（50mg/ml）,光动力法532nm氪绿激光,能量70mw,光斑直径100 μ m,曝光时间0.4s,成功制备大鼠BRVO模型。模型成功率为100%,可较好模拟人体BRVO特点,为临床药物基础研究提供支持。2.剔络化瘀方改善BRVO大鼠眼底特征表现、加快血液流动,减轻网膜水肿,改善血流变状态,激活纤溶系统,促进血管再通,继而改善BRVO大鼠模型视网膜血液微循环。剔络化瘀方保护视网膜毛细血管结构,减少内皮细胞、周细胞脱失,降低无细胞毛细血管数量。剔络化瘀方低、中、高剂量组抑制ICAM-1的表达,以剔络化瘀方高剂量组抑制幅度大,效果好。3.口服剔络化瘀方可以提高BRVO黄斑水肿患者视力,降低黄斑中心凹厚度,增加视网膜血流密度,改善视网膜微循环,可明显减少或不联合抗VEGF药物使用,同时发现在未进行玻璃体腔注射的对侧眼8周、12周血流密度增加,更加证实中药剔络化瘀方在改善视网膜微循环方面存在作用。
熊梁皓[9]（2020）在《花椒新伤油剂治疗闭合性骨折早期软组织损伤的化瘀消肿疗效研究》文中研究表明目的:我院郑氏伤科外治方药主要有新伤药水:二黄新伤止痛软膏,虽能早期止痛,但消肿作用相对不足,不能满足目前临床实际需求。花椒新伤油剂为立足于临床需求,通过对我院郑氏伤科用药经验整理,结合中医古籍中对骨折外治资料的挖掘,经我院药剂科调整确定具有化瘀消肿功效的药方。本研究通过观察SD大鼠闭合性骨折早期软组织损伤高凝血状态双侧下肢皮温差值、软组织损伤症候学、组织病理学以及D-D、PT、APTT、FIB,探讨花椒新伤油剂对于闭合性骨折早期血液高凝状态所致组织瘀肿的治疗效果。为后期临床实际运用与药物剂型改良提供实验数据支持,进一步发挥郑氏伤科中药在骨伤科疾病治疗优势。方法:将72只8周龄SD大鼠,根据随机数字表法分为空白组:不造模且不使用药物;花椒新伤油剂组:造模且外敷花椒新伤油剂;扶他林组:造模且外敷扶他林软膏;生理盐水组:造模但不用药。四组组内随机分为1、4、7天三个组,每组各6只。第1、4、7天测量并记录大鼠双下肢皮温差值、软组织损伤症候学指数、组织病理学检查以及D-D、PT、APTT、FIB数值测定。数据使用SPSS17.0统计软件进行数据分析。结果:（1）皮温差值:造模后造模各组皮温逐渐降低。第1天各组皮温差值无统计学意义（P>0.05）。第4天造模各组测得皮温差值均较前下降。扶他林组及花椒新伤油剂组评分相比较,差异显着（P<0.01）。第7天造模各组皮温差值继续下降,生理盐水组皮温差值与扶他林组及花椒新伤油剂组相比较,有统计学意义（分别为P<0.01;P<0.01）。扶他林组及花椒新伤油剂组相比较,无统计学意义（P>0.05）。（2）软组织损伤症候指数评分:第1天各组间比较,无统计学意义。第4天造模各组评分均较前下降。扶他林组及花椒新伤油剂组与生理盐水组比较,差异显着（分别为P<0.01;P<0.01）。模型扶他林组及模型花椒新伤油剂组评分相比较,有统计学意义（为P<0.05）。第7天,造模各组评分较第4天继续下降,但扶他林组与花椒新伤油剂组对比,无统计学意义（P=0.692>0.05）。（3）组织病理学:造模各组软组织损伤症候指数随时间逐渐降低。第1天,生理盐水组、扶他林组及花椒新伤油剂组动物肌肉组织病变均较严重,组间无明显差异。第4天,生理盐水组肌肉组织病变相对最严重,扶他林组次之,花椒新伤油剂组相对最轻;第7天,生理盐水组动物肌肉组织病变均较严重,扶他林组和花椒新伤油剂组相对最轻。（4）D-D值:造模后造模各组D-D值较造模前升高,生理盐水组、扶他林组、花椒新伤油剂组与空白组比较,有统计学意义（分别为P<0.01;P<0.01;P<0.01）。第4天造模各组D-D值均较前升高。生理盐水组与扶他林组相比较,无显着差异（P>0.05）。生理盐水组与花椒新伤油剂组相比较,有显着差异（P<0.01）。扶他林组及花椒新伤油剂组相比较,有显着差异（P<0.05）。第7天,扶他林组及花椒新伤油剂组相比较,无显着差异（P>0.05）。（5）FIB值:第1天各组FIB值组间未见显着差异;生理盐水组、扶他林组、花椒新伤油剂组与空白组比较,均显着升高（分别为P<0.01;P<0.01;P<0.01）。第4天造模各组FIB值均较前升高。生理盐水组FIB值较扶他林组及花椒新伤油剂组高,差异显着（分别为P<0.01;P<0.01）。扶他林组及花椒新伤油剂组相比较,无显着差异（P<0.05）。第7天,扶他林组与花椒新伤油剂组相比较,无显着差异（P>0.05）。（6）PT值:第1天各组PT值各组间无显着差异;生理盐水组、扶他林组、花椒新伤油剂组与空白组比较,均显着降低（分别为P<0.01;P<0.01;P<0.01）。第4天造模各组PT值均较前继续下降。生理盐水组与扶他林组及花椒新伤油剂组PT值相比较,显着差异（分别为P<0.05;P<0.01）。扶他林组及花椒新伤油剂组PT值相比较,显着差异（为P<0.05）。第7天,扶他林组及花椒新伤油剂组PT值均较各自第4天PT值升高,生理盐水组PT值较第4天继续下降。扶他林组及花椒新伤油剂组PT值相比较,无显着差异（P>0.05）。（7）APTT值:第1天,模型生理盐水组与模型扶他林组、模型花椒新伤油剂组比较,显着差异（分别为P<0.05;P<0.01）。第4天造模各组APTT值均较前继续下降,生理盐水组与扶他林组及花椒新伤油剂组APTT值相比较,显着差异（分别为P<0.01;P<0.01）,模型扶他林组及模型花椒新伤油剂组APTT值相比较,显着差异（P<0.01）。第7天,扶他林组及花椒新伤油剂组APTT值较第4天升高,生理盐水组APTT值较第4天继续下降。扶他林组及花椒新伤油剂组APTT值相比较,无显着差异（P>0.05）。结论:本实验通过外敷花椒新伤油剂治疗闭合性骨折早期软组织损伤血瘀诸证,通过对SD大鼠皮温差值、组织损伤症候学、组织病理学观察以及D-D、FIB、APTT、PT等指标检测。得出以下结论:花椒新伤油剂与扶他林均可明显缓解闭合性骨折早期软组织损伤所出现疼痛、瘀肿诸证、促进组织损伤与循环修复。但在改善血液高凝状态及预防血栓方面,花椒新伤油剂稍优于扶他林软膏。
韩同磊[10]（2020）在《Lnc-PDHB-l:l调控巨噬细胞功能影响颈动脉粥样硬化斑块稳定性的机制研究》文中指出第一部分颈动脉粥样硬化斑块中差异性lncRNA验证及功能探索背景:颈动脉狭窄疾病在缺血性卒中的病因中高达30%,随着我国人民生活水平的提高和人口结构的老龄化,动脉粥样硬化性颈动脉狭窄已占所有颈动脉狭窄性疾病的90%。由于它起病较缓而不易被早期察觉,患者出现临床症状而没有及时处理往往会留下失语、偏瘫等较严重的后遗症甚至导致死亡。现国内外临床诊疗经验与实验研究发现,即使是相同颈动脉狭窄程度的斑块组织样本,斑块内脂质、血栓及炎症细胞浸润的情况迥然各异,斑块的稳定程度明显不同,这些患者的既往脑梗死情况与再发脑卒中的发生率与斑块的稳定程度密切相关。长链非编码RNA（lncRNA）是指长度大于200nt的不具有编码功能的RNA。虽然已证实lncRNA可以通过影响代谢调控,血管功能,免疫和炎症反应等过程导致动脉粥样硬化的发生和进展,但lncRNA与动脉粥样硬化斑块稳定性之间相互关系的研究却相对较少。目的:本中心前期开展了颈动脉斑块基因组学研究并筛选出稳定性和不稳定性颈动脉粥样硬化斑块中差异表达的lncRNAs及mRNAs。本部分旨在验证高通量测序芯片提示的lncRNAs在稳定性与不稳定性斑块中的差异;探究差异性Lnc-PDHB-1:1与协同物质在特定细胞中发挥功能作用的具体分子机制。方法:1、在通过医院伦理学审查和患者知情同意的前提下,规范化流程收集与处理人体颈动脉粥样硬化斑块标本。按照病理学标准将斑块标本区分为稳定性斑块组和不稳定性斑块组。通过qRT-PCR、PCR与凝胶电泳实验验证高通量测序芯片提示的前9个lncRNAs及共表达分析预测的协同mRNA在稳定性与不稳定性斑块中的差异。2、生物信息学检索lncRNA与协同mRNA的相关性证据。Western blot实验检测mRNA翻译蛋白在稳定性与不稳定性斑块中的含量差异。3、免疫组化定位协同分子与靶分子在稳定性与不稳定性斑块中的分布。结果:1、病理学标准鉴定后使用典型的稳定性与不稳定性斑块各11例。qRT-PCR、PCR与凝胶电泳实验验证高通量RNA芯片中1.5倍差异表达的前9位lncRNAs（lnc-XXbac-BPG116M5.15.4-2:1,lnc-SLC2A14-2:1,lnc-PDHB-1:1,lnc-STARD3NL-6:1,lnc-PTBP3-6:1,lnc-SRPX2-2:1,lnc-METTL6-5:1,lnc-PPM1J-1:1,lnc-POTEG-4:21）,其中Lnc-PDHB-1:1在不稳定性斑块中的表达依旧显着下调（P<0.05）,与前期基因芯片结果一致。共表达分析显示4个mRNAs（Dnase113,Ndufaf4,Spon1,Mllt11）与Lnc-PDHB-1:1存在相关性,其中Dnase113与Lnc-PDHB-1:1存在显着正相关性（P<0.05）。qRT-PCR验证Dnase113在不稳定性斑块中的表达量明显下调（P<0.05）,与前期基因芯片结果一致。2、基于现有的 LncRNA 以及 Gene 数据库（LNCipedia:https://lncipedia.org;UCSC:http://genome.ucsc.edu）,检索 Lnc-PDHB-1:1 的转录基因、Lnc-PDHB-1:1 与 Dnase113基因的碱基序列,确认Lnc-PDHB-1:1的转录基因长度为3161bp;Lnc-PDHB-1:1是一条包含两端元件,长度702bp的核酸序列;而Dnase113基因则是包含7个外显子,长度为18747bp的核酸序列。将Lnc-PDHB-1:1的转录本基因序列（316 1bp）与Dnase1 13的转录本基因序列进行比对（Pubmed,https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi）,通过碱基序列匹配发现,Lnc-PDHB-1:1转录基因与Dnase113基因中一段包含两个外显子的序列完全互补,明确两者之间确实存在显着相关性。Western blot实验结果显示,不稳定斑块中的Dnase113蛋白含量明显低于稳定性斑块组（P<0.05）。3、免疫组化定位颈动脉斑块标本中的Dnase113与柠檬酸化citH3（巨噬细胞胞外陷阱,METs的组成部分）,两组比较发现:不稳定性斑块中的Dnase113含量明显下调,METs含量显着高于稳定组（P<0.05）。结论:人颈动脉不稳定性斑块中的Lnc-PDHB-1:1显着下调,与其可能存在正向调控关系的协同物质Dnase113在mRNA、蛋白水平均显着下调,而Dnase113可以降解巨噬细胞胞外陷阱（METs）。由此推测Lnc-PDHB-1:1下调后可能导致了后续的Dnase113、METs含量变化,影响了颈动脉斑块的稳定性。第二部分Lnc-PDHB-1:1调控巨噬细胞的功能与机制研究目的:探究Lnc-PDHB-1:1与Dnase113之间的具体调控机制,明确干预Lnc-PDHB-1:1表达对巨噬细胞功能影响。方法:1、原位杂交RNA-Scope技术对Lnc-PDHB-1:1、协同分子Dnase113进行细胞内定位,预测它们之间可能存在的分子机制。2、RNA pull down实验特异性沉降Lnc-PDHB-1:1及与其结合的RNA与蛋白质,通过Western Blot和qRT-PCR验证结合协作关系。3、包装干预细胞内Lnc-PDHB-1:1上调和下调表达的慢病毒,通过慢病毒转染,将人巨噬细胞分为Lnc-PDHB-1:1上调组、Lnc-PDHB-1:1上调阴性对照组,Lnc-PDHB-1:1下调组、Lnc-PDHB-1:1下调阴性对照组和空白对照组,Western Blot和qRT-PCR检测干预Lnc-PDHB-1:1表达后,Dnase113的含量变化;免疫英光观察比较不同组别巨噬细胞内柠檬酸化citH3的含量差异。4、双荧光素酶报告实验验证Lnc-PDHB-1:1与Dnase113之间的具体调控机制。结果:1、原位杂交RNA-Scope技术定位显示:Lnc-PDHB-1:1、Dnase113的荧光信号均定位在细胞质中,且存在部分荧光信号重叠,可能存在结合作用关系。2、RNA pull down 实验结果显示:Lnc-PDHB-1:1 与 Dnase113 在 mRNA 或蛋白层面不存在直接结合作用关系。3、慢病毒干预巨噬细胞后:Lnc-PDHB-1:1过表达,Dnase113表达量也明显上调（P<0.05）;干扰Lnc-PDHB-1:1表达,Dnase113表达量明显下调（P<0.05）。巨噬细胞免疫荧光结果提示,上调Lnc-PDHB-1:1表达后,巨噬细胞内柠檬酸化citH3的含量明显减少（P<0.05）。4、双荧光素酶报告实验结果显示:Lnc-PDHB-1:1通过竞争性结合miR-6866-5P,降低了 miR-6866-5P对Dnase113翻译的抑制作用,从而上调了 Dnase113的表达。结论:本部分证明Lnc-PDHB-1:1竞争性结合miR-6866-5P,上调Dnase113的表达。巨噬细胞内Lnc-PDHB-1:1过表达使Dnase113的表达量上调,可能是通过影响柠檬酸化citH3的合成或降解已合成的柠檬酸化citH3来使METs含量减少的。第三部分 干预Lnc-PDHB-1:1改变颈动脉斑块稳定性的机制研究目的:探究干预Lnc-PDHB-1:1对改变小鼠颈动脉斑块稳定性的效果及机制方法:1、通过生物信息学检索,检测Lnc-PDHB-1:1在人鼠种属中的一致性,qRT-PCR检测Lnc-PDHB-1:1引物的PCR产物、Dnase113在小鼠类单核细胞中的表达量。2、利用C57BL/6J种系ApoE（-/-）的雄性小鼠构建颈动脉粥样硬化斑块模型。包装干预Lnc-PDHB-1:1上调和下调表达的AAV病毒,手术造模后于尾静脉注射转染病毒进行干预,分组设定为:Lnc-PDHB-1:1上调组,Lnc-PDHB-1:1上调阴性对照组,Lnc-PDHB-1:1下调组、Lnc-PDHB-1:1下调阴性对照组和空白对照组。造模结束后取小鼠颈动脉粥样硬化斑块标本,病理学HE染色鉴别稳定性,比较不同组别之间稳定性斑块与不稳定性斑块发生情况存在的差异。3、设计鼠Lnc-PDHB-1:1探针,原位杂交验证病毒转染效率。4、qRT-PCR验证干预Lnc-PDHB-1:1表达、检测Dnase113的含量变化;免疫组化标记小鼠颈动脉斑块内的Dnase113及柠檬酸化citH3,比较不同组别之间的含量差异。结果:1、通过同源序列匹配和Bioedit软件分析得到:鼠源Lnc-XR383076.3与人源Lnc-PDHB-1:1的碱基重合率高达57.7%,关键元件位置及序列基本吻合,转录位点的上下游基因基本重合,均与Dnase113毗邻。2、小鼠造模及病毒干预成功后各组间比较:Lnc-PDHB-1:1下调组小鼠颈动脉管腔狭窄严重甚至闭塞,不稳定性斑块的发生比例明显高于其它组（P<0.05）。3、原位杂交结果表明病毒转染成功。4、qRT-PCR验证:Lnc-PDHB-1:1过表达,小鼠颈动脉斑块中的Dnase113表达量明显上调（P<0.05）;干扰Lnc-PDHB-1:1表达,小鼠颈动脉斑块中的Dnase113表达量明显下调（P<0.05）。免疫组化标记显示小鼠不稳定颈动脉斑块内的柠檬酸化citH3含量明显增多,Dnase113含量显着减少（P<0.05）。结论:干扰巨噬细胞内Lnc-PDHB-1:1表达,上调Dnase113使METs含量减少可以降低不稳定性斑块的发生率。
二、静脉血栓形成动物模型的病理学研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、静脉血栓形成动物模型的病理学研究（论文提纲范文）
（1）血浆蛋白表达谱推断深静脉血栓形成时间的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 常用缩写词中英文对照表 |
| 前言 |
| 1.材料与方法 |
| 1.1 仪器和材料 |
| 1.2 DVT动物模型的建立及分组 |
| 1.3 蛋白芯片检测 |
| 1.4 HE染色法 |
| 1.5 数据预处理 |
| 1.6 统计学处理 |
| 2.结果 |
| 2.1 动物深静脉血栓模型 |
| 2.1.1 动物模型的建立 |
| 2.1.2 大鼠深静脉血栓HE染色 |
| 2.2 大鼠血浆蛋白图谱 |
| 2.2.1 血栓蛋白峰谱特征 |
| 2.2.2 芯片图谱蛋白峰数量差异 |
| 2.2.3 芯片图谱蛋白峰表达水平差异 |
| 2.3 不同血栓形成时间点蛋白峰数据统计分析 |
| 2.3.1 PCA分析 |
| 2.3.2 OPLS-DA分析 |
| 2.3.3 多种推断血栓形成时间的数学算法模型分析 |
| 2.4 血栓蛋白峰重要性排序和分子预测 |
| 3.讨论 |
| 3.1 深静脉血栓不同动物模型的比较分析 |
| 3.2 不同血栓形成时间点下血浆蛋白谱的变化 |
| 3.3 多种血栓形成时间预测的数学模型分析及其优势 |
| 3.4 潜在标志物的预测 |
| 4.结论 |
| 参考文献 |
| 综述 血栓形成过程中蛋白的表达变化 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）Ag490通过抑制JAK2/STAT3通路对同型半胱氨酸诱导的血栓闭塞性脉管炎治疗作用的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词 |
| 第一章 绪论 |
| 第二章 文献综述 |
| 前言 |
| 2.1 血栓闭塞性脉管炎的研究进展 |
| 2.1.1 流行病学研究 |
| 2.1.2 病因和发病机制 |
| 2.1.3 病理学研究和临床表现 |
| 2.1.4 诊断标准 |
| 2.1.5 治疗手段 |
| 2.2 同型半胱氨酸的代谢与转化 |
| 2.3 高同型半胱氨酸血症与相关动脉疾病 |
| 2.3.1 HHcy与缺血性脑卒中 |
| 2.3.2 HHcy与颈动脉粥样硬化 |
| 2.3.3 HHcy与冠状动脉粥样硬化性心脏病 |
| 2.3.4 HHcy与动脉瘤 |
| 2.3.5 HHcy与粥样硬化性肾动脉狭窄 |
| 2.3.6 HHcy与下肢动脉硬化闭塞症 |
| 2.3.7 HHcy与血栓闭塞性脉管炎 |
| 2.4 JAK/STAT通路的研究进展及JAK抑制剂的发现 |
| 第三章 血浆同型半胱氨酸水平与血栓闭塞性脉管炎风险关系的荟萃分析 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料与方法 |
| 3.2.1 检索策略 |
| 3.2.2 资料选择 |
| 3.2.3 数据提取和质量评估 |
| 3.2.4 统计分析 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.3.1 文献检索结果 |
| 3.3.2 纳入研究基本特征和质量评估 |
| 3.3.3 主要发现 |
| 3.3.4 亚组间的差异分析 |
| 3.3.5 发表偏倚评估 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 局限性 |
| 3.6 结论 |
| 第四章 Ag490 通过抑制JAK2/STAT3 通路对Hcy诱导的人脐静脉内皮损伤的治疗作用 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.2.1 实验细胞 |
| 4.2.2 实验试剂、药品与耗材 |
| 4.2.3 实验仪器 |
| 4.2.4 主要溶液及试剂配方 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 细胞的复苏、传代与冻存 |
| 4.3.2 CCK-8 法检测细胞增殖活性和细胞毒性 |
| 4.3.3 细胞实验的分组 |
| 4.3.4 细胞蛋白提取及Western Blot法检测目的蛋白表达 |
| 4.3.5 PCR 法及qPCR 法检测目的基因片段表达 |
| 4.3.6 统计学方法处理 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 CCK8 法检测细胞增殖活性和细胞毒性实验结果 |
| 4.4.2 细胞蛋白Western Blot实验结果 |
| 4.4.3 细胞总RNA的 RT-PCR实验结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.6 实验结论 |
| 第五章 Ag490 通过抑制JAK2/STAT3 通路对Hcy诱导大鼠TAO的治疗作用. |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料 |
| 5.2.1 实验动物 |
| 5.2.2 实验试剂、药品与耗材 |
| 5.2.3 实验仪器 |
| 5.2.4 主要溶液与试剂配方 |
| 5.3 实验方法 |
| 5.3.1 大鼠血栓性脉管炎动物模型的建立 |
| 5.3.2 大鼠实验分组方法 |
| 5.3.3 大鼠患肢体征变化 |
| 5.3.4 大鼠股动脉样本的采集 |
| 5.3.5 大鼠股动脉石蜡切片 |
| 5.3.6 大鼠股动脉切片苏木精-伊红(Hematoxylin-Eosin,HE)染色方法 |
| 5.3.7 大鼠股动脉蛋白样本的制备 |
| 5.3.8 大鼠股动脉RNA样本的制备 |
| 5.3.9 引物设计 |
| 5.3.10 其他实验方法及步骤同第四章 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 成功建立血栓闭塞性脉管炎疾病大鼠模型、患肢体征变化及分级 |
| 5.4.2 患肢股动脉 HE 染色 |
| 5.4.3 患肢股动脉Western Blot蛋白电泳结果 |
| 5.4.4 患肢股动脉mRNA的 RT-PCR实验结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.6 实验结论 |
| 第六章 结论 |
| 第七章 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）咖啡酸苯乙酯对早期腹主动脉瘤保护作用的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第1 部分 人体AAA组织的病理学研究 |
| 1 引言 |
| 2.材料与方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 人AAA组织HE及 VG染色 |
| 3.2 免疫组化检测组织SIRT1、CD40、NF-κBp65、MMP-2及MMP-9的表达 |
| 3.3 免疫组化检测组织CD31 及CD68 的表达 |
| 4.讨论 |
| 5 结论 |
| 第2 部分 咖啡酸苯乙酯对大鼠AAA形成早期保护作用的研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 主要材料与试剂 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 CAPE对大鼠AAA直径的影响 |
| 3.2 CAPE对大鼠AAA形成早期血管管壁病理结构的影响 |
| 3.3 CAPE对大鼠AAA形成早期平滑肌细胞的影响 |
| 3.4 CAPE对大鼠AAA形成早期组织ROS含量的影响 |
| 3.5 CAPE对大鼠AAA形成早期瘤壁组织CD31 表达的影响 |
| 3.6 CAPE对大鼠AAA形成早期瘤壁组织巨噬细胞浸润表达的影响 |
| 3.7 免疫组化检测CAPE对大鼠AAA形成早期瘤壁组织MMP-2 和MMP-9 表达的影响 |
| 3.8 Westernblot法检测CAPE对大鼠AAA形成早期瘤壁组织IL-6、SIRT1、NF-κBp65、单核细胞趋化蛋白1(Monocytechemoattractant protein-1,MCP-1)、MMP-2、MMP-9、CD40 蛋白的表达 |
| 4 讨论 |
| 4.1 CAPE对 AAA形成早期新生血管形成的影响。 |
| 4.2 CAPE对 AAA形成早期氧化应激的影响 |
| 4.3 CAPE对 AAA形成早期VSMC的影响 |
| 4.4 CAPE对 AAA形成早期管壁炎症反应的影响 |
| 4.5 CAPE对 AAA形成早期管壁浸润的巨噬细胞表型变化的影响 |
| 4.6 CAPE对 AAA形成早期CD40、SIRT1、NF-κB表达的影响 |
| 5 结论 |
| 第3 部分 CAPE抑制TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症反应的机制研究 |
| 1 引言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 原代HUVECs鉴定 |
| 3.2 不同浓度TNF-α刺激对HUVECs表达IL-6及MCP-1 的影响 |
| 3.3 不同剂量CAPE对 TNF-α刺激后HUVECs表达IL-6及MCP-1 的影响 |
| 3.4 CAPE对 TNF-α刺激后HUVECs表达SIRT1 的影响 |
| 3.5 CAPE对 TNF-α刺激后HUVECs表达CD40 的影响 |
| 3.6 CAPE对 TNF-α刺激HUVECs后 NF-κB通路的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 CAPE减轻TNF-α刺激HUVECs后细胞的炎症反应水平 |
| 4.2 CAPE对 TNF-α刺激HUVECs后 SIRT1及CD40 蛋白表达的影响 |
| 4.3 CAPE对 TNF-α刺激HUVECs后 SIRT1及CD40 的影响与NF-κB通路相关性 |
| 5 结论 |
| 全文结论 |
| 展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 综述 腹主动脉瘤的发病机制研究进展 |
| 参考文献 |
（4）急性动脉闭塞性肠系膜缺血MDCT影像学研究（论文提纲范文）
| 英文缩写词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 肠系膜上动脉解剖变异的MDCT表现及其胚胎学机制 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料和方法 |
| 2.3 结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 小结 |
| 第三章 急性肠系膜上动脉血栓闭塞性肠系膜缺血死亡风险因素的MDCT评价 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 小结 |
| 第四章 急性动脉血栓闭塞性肠系膜缺血MDCT血栓密度与透壁性肠坏死的相关性分析 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 小结 |
| 第五章 急性动脉闭塞性肠系膜缺血MDCT征象与组织病理学对照分析:动物实验研究 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料和方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 小结 |
| 全文小结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 急性动脉闭塞性肠系膜缺血:生理解剖、共病特征及MDCT的临床价值 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间成果 |
| 致谢 |
（5）壳多糖酶-3样蛋白1在终末期肾病失功的自体动静脉内瘘中的表达及机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 引言 |
| 第一部分 终末期肾病患者自体动静脉内瘘建立后的临床预后研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 研究结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 第二部分 壳多糖酶-3样蛋白1(CHI3L1)对自体动静脉内瘘早期失功的预测价值 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 第三部分 壳多糖酶-3样蛋白1(CHI3L1)在自体动静脉内瘘静脉新生内膜增生中的表达及机制研究 |
| 1. 前言 |
| 2. 材料与方法 |
| 3. 结果 |
| 4. 讨论 |
| 5. 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在职攻读学位期间发表的学术论文目录 |
| 外文论文1 |
| 外文论文2 |
| 外文论文3 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
（6）基于“外风引动内风”理论的风寒诱发斑块破裂及血栓形成动物模型（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 综述一 风之为病的历史沿革及“外风引动内风”的文献考证 |
| 1 “外风”侧重于强调“风”作为外邪之一的致病属性 |
| 2 “内风”反映了“风”从病因学概念向病机学概念的转变 |
| 3 心脉病证“外风引动内风”病机的文献考证和探讨 |
| 参考文献 |
| 综述二 气象因素诱发急性冠状动脉事件发生的研究进展 |
| 1 气象因素与急性冠状动脉事件发生的关系研究进展 |
| 2 急性冠脉综合征发生与动脉粥样硬化斑块破裂事件 |
| 3 动脉粥样硬化斑块破裂及血栓形成的动物模型研究 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 实验部分 |
| 第一节 “串联缩窄”小鼠易损斑块模型的建立 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第二节 短期风寒刺激诱导斑块破裂及血栓形成研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 第三节 小结和讨论 |
| 参考文献 |
| 全文结论 |
| 创新点 |
| 展望与不足 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（7）循环组蛋白与急重症时多器官功能障碍综合征发病机制相关性的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 循环组蛋白在急重症患者的特征及其临床意义 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果与分析 |
| 1.3 本章小结 |
| 第二章 胞外组蛋白对多种器官来源细胞的毒性作用 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.3 本章小结 |
| 第三章 循环组蛋白在急重症模型小鼠MODS发病机制中的作用 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.3 本章小结 |
| 第四章 急重症模型小鼠的循环组蛋白来源的初步探讨 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 本章小结 |
| 全文讨论 |
| 全文结论 |
| 本研究创新之处(详见学术成果之已发表论着2) |
| 文献综述 细菌 DNA、免疫细胞死亡与脓毒症 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
| 攻读学位期间学术成果 |
| 致谢 |
（8）剔络化瘀方改善视网膜分支静脉阻塞微循环作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 中英文缩略词对照 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述一 中医药治疗视网膜分支静脉阻塞研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 视网膜激光光凝法建立视网膜静脉阻塞动物模型的研究进展 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 视网膜分支静脉阻塞大鼠模型建立 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器及耗材 |
| 1.3 实验试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 视网膜静脉阻塞大鼠模型制备 |
| 2.2 观察BRVO大鼠视网膜情况 |
| 2.3 苏木素-伊红染色观察视网膜组织病理学变化 |
| 2.4 视网膜消化铺片观察视网膜血管形态 |
| 3 结果 |
| 3.1 BRVO大鼠视网膜情况 |
| 3.2 视网膜病理组织变化 |
| 3.3 视网膜血管情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 实验二 剔络化瘀方改善视网膜静脉阻塞大鼠模型微循环作用机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验仪器及试剂 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 实验动物分组 |
| 2.2 剔络化瘀方煎剂制备 |
| 2.3 视网膜静脉阻塞大鼠模型制作 |
| 2.4 给药剂量及方法 |
| 2.5 观察指标 |
| 2.6 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 剔络化瘀方对BRVO大鼠眼底的影响 |
| 3.2 剔络化瘀方对BRVO大鼠视网膜形态的影响 |
| 3.3 剔络化瘀方对BRVO大鼠血清ICAM-1的影响 |
| 3.4 剔络化瘀方对BRVO大鼠凝血功能影响 |
| 3.5 剔络化瘀方对BRVO大鼠血流变的影响 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三部分 临床研究 |
| 1 临床资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 2 研究方法 |
| 2.1 前瞻性研究 |
| 2.2 治疗方法 |
| 2.3 观察指标 |
| 2.4 统计方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 受试者情况 |
| 3.2 治疗组与正常组OCTA比较 |
| 3.3 治疗组患眼与对侧眼血流密度比较 |
| 3.4 治疗后情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 附录 典型病例 |
| 参考文献 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 附录 动物实验图片 |
| 个人简历 |
| 致谢 |
| 附录 中医药科技查新报告书 |
（9）花椒新伤油剂治疗闭合性骨折早期软组织损伤的化瘀消肿疗效研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 文献综述 |
| 2.1 闭合性骨折早期软组织损伤研究进展 |
| 2.2 闭合性骨折早期循环障碍发生机制 |
| 2.3 闭合性骨折软组织损伤高凝血状态的动物模型研究进展 |
| 2.4 祖国医学针对闭合性骨折软组织损伤早期瘀肿的病因病机分析 |
| 2.5 诊断闭合性骨折软组织损伤高凝血状态的研究进展 |
| 2.6 中西医治疗闭合性骨折软组织损伤高凝血状态的研究进展 |
| 3 材料与方法 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验药物 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.1.3 实验器材 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 实验分组 |
| 3.2.2 动物饲养 |
| 3.2.3 骨折造模打击器的制作 |
| 3.2.4 SD大鼠骨折模型制作 |
| 3.2.5 治疗方法 |
| 3.3 实验观察与指标检测 |
| 3.3.1 大鼠常规情况观察 |
| 3.3.2 大鼠皮温观察 |
| 3.3.3 组织损伤症候学观察 |
| 3.3.4 指标取材与检测 |
| 3.4 统计分析及数据处理 |
| 4 结果 |
| 4.1 实验造模、用药、取材情况 |
| 4.2 皮温差值 |
| 4.2.1 组内比较 |
| 4.2.2 组间比较 |
| 4.3 软组织损伤症候 |
| 4.3.1 组内比较 |
| 4.3.2 组间比较 |
| 4.4 组织病理学检查 |
| 4.5 D-D值观察结果 |
| 4.5.1 组内比较 |
| 4.5.2 组间比较 |
| 4.6 FIB值观察结果 |
| 4.6.1 组内比较 |
| 4.6.2 组间比较 |
| 4.7 PT值观察结果 |
| 4.7.1 组内比较 |
| 4.7.2 组间比较 |
| 4.8 APTT值观察结果 |
| 4.8.1 组内比较 |
| 4.8.2 组间比较 |
| 5 分析与讨论 |
| 5.1 花椒新伤油剂制方原理 |
| 5.2 花椒新伤油剂组方分析 |
| 5.3 花椒新伤油剂药物现代研究 |
| 5.4 实验周期的设计与时相点的选择 |
| 5.5 对照组药物设置意义及实验要药方法 |
| 5.6 皮温差值分析 |
| 5.7 软组织损伤症候指数评分分析 |
| 5.8 组织病理学结果分析 |
| 5.9 花椒新伤油剂对 D-D、FIB、PT、APTT 值的影响 |
| 6 结论 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（10）Lnc-PDHB-l:l调控巨噬细胞功能影响颈动脉粥样硬化斑块稳定性的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 颈动脉粥样硬化斑块中差异性lncRNA验证及功能探索 |
| 一、实验设计 |
| 二、实验材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、分析与讨论 |
| 六、结论与意义 |
| 第二部分 Lnc-PDHB-1:1调控巨噬细胞的功能与机制研究 |
| 一、实验设计 |
| 二、实验材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、讨论与分析 |
| 六、结论与意义 |
| 第三部分 干预Lnc-PDHB-1在小鼠颈动脉斑块稳定性的机制研究 |
| 一、实验设计 |
| 二、实验材料 |
| 三、实验方法 |
| 四、实验结果 |
| 五、分析与讨论 |
| 六、结论与意义 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 长链非编码RNA在动脉粥样硬化及斑块稳定性中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 动脉粥样硬化动物模型的研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表论文和参加科研工作情况 |
| 致谢 |
四、静脉血栓形成动物模型的病理学研究（论文参考文献）
- [1]血浆蛋白表达谱推断深静脉血栓形成时间的研究[D]. 田英杰. 山西医科大学, 2021
- [2]Ag490通过抑制JAK2/STAT3通路对同型半胱氨酸诱导的血栓闭塞性脉管炎治疗作用的研究[D]. 张含霁. 吉林大学, 2021(01)
- [3]咖啡酸苯乙酯对早期腹主动脉瘤保护作用的研究[D]. 占钻. 南昌大学, 2021(01)
- [4]急性动脉闭塞性肠系膜缺血MDCT影像学研究[D]. 唐伟. 中国人民解放军陆军军医大学, 2021(01)
- [5]壳多糖酶-3样蛋白1在终末期肾病失功的自体动静脉内瘘中的表达及机制研究[D]. 孔祥雷. 山东大学, 2020(04)
- [6]基于“外风引动内风”理论的风寒诱发斑块破裂及血栓形成动物模型[D]. 俞德帅. 北京中医药大学, 2020(04)
- [7]循环组蛋白与急重症时多器官功能障碍综合征发病机制相关性的研究[D]. 程振兴. 东南大学, 2020
- [8]剔络化瘀方改善视网膜分支静脉阻塞微循环作用及机制研究[D]. 邵霖霖. 中国中医科学院, 2020(01)
- [9]花椒新伤油剂治疗闭合性骨折早期软组织损伤的化瘀消肿疗效研究[D]. 熊梁皓. 成都体育学院, 2020(02)
- [10]Lnc-PDHB-l:l调控巨噬细胞功能影响颈动脉粥样硬化斑块稳定性的机制研究[D]. 韩同磊. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(03)