一、人类端粒酶(hTERT)与bcl-2、p53、c-myc的关系(综述)（论文文献综述）
朱晓燃[1]（2021）在《清肝化瘀颗粒对原发性肝癌大鼠的治疗作用及主要成分对肝癌细胞增殖凋亡的影响》文中研究表明背景与目的清肝化瘀颗粒是基于姚树坤教授结合中医理论与多年临证经验总结的清肝化瘀方,经完善优化后的现代制剂技术制备而成的颗粒制剂（课题来源于“十二五”“重大新药创制”科技重大专项和北京市科委G20 工程创新研究）,以清热解毒、破瘀散结、健脾益气为治则治法,可针对大多数肝癌患者的证型。前期临床研究与基础实验证实,清肝化瘀方对缓解肝癌患者临床症状、改善生存质量、延长生存期以及提高免疫功能方面具有显着作用,并可以通过多靶点分子,多信号通路对肝癌的多种细胞生物学行为进行调节,深入开发研究价值。苦参是本研究清肝化瘀颗粒的君药之一,其提取物苦参碱单体明确,药理作用广泛,也是清肝化瘀颗粒的主要组分。因此本研究的目的是观察清肝化瘀颗粒对原发性肝癌（Primary liver carcinoma）大鼠的治疗作用,评价其药效学,通过体内凋亡实验和体外细胞实验,初步探究其靶点及作用机制,为临床推广提供理论依据。方法:SPF级雄性6周龄大鼠192只,适应性饲养5天后,造模组（n=180）采用改良后的造模方法,使用二乙基亚硝胺（Diethylnitrosamine,DEN）诱导肝癌,空白组（n=12）给予等体积生理盐水,取材观察肝脏成癌率>80%时开始干预。将造模组大鼠162只（除去死亡3只和观察不同时间成癌率15只）随机分为模型组、清肝化瘀颗粒低剂量组、清肝化瘀颗粒高剂量组、清肝化瘀颗粒高剂量组、肝复乐组和氟尿嘧啶组,每组各27只。清肝化瘀颗粒低、中、高剂量组分别灌胃清肝化瘀颗粒0.47g/kg、0.93g/kg、1.86g/kg,肝复乐组灌胃肝复乐胶囊0.94g/kg,模型组以10ml/kg灌胃等体积生理盐水,氟尿嘧啶组给予氟尿嘧啶注射液20mg/kg腹腔注射,连续给药8周,于末次给药后每组随机选取6只解剖取材。观察指标包括:造模情况及各组大鼠肝脏大体情况、生存期、肝指数、脾指数及肝脏病理组织变化;丙氨酸氨基转移酶（Alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（Aspartate transaminase,AST）、总胆红素（Total bilirubin,TBIL）、γ-谷氨酰转肽酶（Glutamyl transpeptidase,GGT）、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）、α-L-岩藻糖苷酶（Alpha-L-fucosidase,AFU）等肝功能指标;肝癌特异性标志物甲胎蛋白（alpha-fetoprotein,AFP）;通过流式细胞仪检测外周血T淋巴细胞亚群;原位末端转移酶标记技术（Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling,TUNEL）法检测肝癌组织细胞凋亡情况,免疫组化法检测肝癌组织中Caspase-3的表达。选择清肝化瘀颗粒主要成分苦参碱进行体外细胞实验,用CCK8法（cell counting kit-8）检测苦参碱对人肝癌细胞HepG2细胞的增殖抑制作用,筛选出IC50;定量聚合酶链式反应（Quantitative Polymerase Chain Reaction,QPCR）检测苦参碱对 HepG2 细胞中 Bax、Bcl-2、P53、Beclinl的基因表达的影响。结果1 清肝化瘀颗粒对PLC大鼠的治疗作用1.1 清肝化瘀颗粒对PLC大鼠肝脏大体、肝脾指数及生存期的作用①肝脏表面癌结节数:与模型组比较,清肝化瘀颗粒中剂量组、高剂量组和氟尿嘧啶组肝脏表面癌结节数均显着降低。②肝、脾指数:与模型组比较,清肝化瘀颗粒低剂量组、中剂量组和高剂量组、肝复乐组及氟尿嘧啶组的大鼠肝指数均显着降低,且清肝化瘀颗粒低剂量组和氟尿嘧啶组的脾指数亦显着降低。③生存期:给药干预8周后,上述各组 PLC 大鼠的存活率分别为 47.62%、52.38%、71.43%、66.67%、52.38%和 85.71%,中位生存期分别为55d、59d、66d、71d、58d和73d。与模型组相比,清肝化瘀颗粒中、高剂量组和氟尿嘧啶组生存期显着延长;与肝复乐组比较,清肝化瘀颗粒高剂量组的生存期显着延长。1.2 清肝化瘀颗粒对PLC大鼠肿瘤标志物AFP的下调作用与模型组比较,清肝化瘀颗粒低剂量、中剂量、高剂量组、肝复乐组和氟尿嘧啶组大鼠的AFP水平均显着下降;随着清肝化瘀颗粒组给药剂量的增加,AFP水平呈递减趋势,且清肝化瘀颗粒高剂量组与低剂量组间差异显着。1.3 清肝化瘀颗粒缓解PLC大鼠肝损伤,改善其肝功能的作用与模型组比较,清肝化瘀颗粒高剂量组、氟尿嘧啶组可显着下调AST水平,清肝化瘀颗粒低剂量、中剂量、高剂量组和氟尿嘧啶组均可显着下调血清GGT、AFU、TBIL水平,清肝化瘀颗粒中剂量、高剂量组和氟尿嘧啶组亦可显着下调ALP水平。1.4 清肝化瘀颗粒对PLC大鼠外周血T淋巴细胞的调节作用与模型组比较,清肝化瘀颗粒低剂量、中剂量、高剂量组的CD4+细胞数显着上升,CD8+细胞数显着下降,CD4+/CD8+的比率显着升高。2清肝化瘀颗粒对PLC大鼠肝癌细胞凋亡的影响与模型组相比,清肝化瘀颗粒组的PLC大鼠发生肝癌凋亡的肝癌细胞数量和比例明显增加,Caspase-3在清肝化瘀颗粒剂量组、肝复乐组和氟尿嘧啶组显着表达,且清肝化瘀颗粒低剂量、中剂量、高剂量组间Caspase-3的表达差异显着。3苦参碱对人肝癌细胞HepG2细胞增殖抑制的影响①苦参碱对HepG2细胞活性的影响苦参碱干预24-72小时,HepG2细胞活性显着下降,且苦参碱对肝癌细胞的增殖抑制作用呈时间和浓度依赖性。给药24h、48h、72h后,IC50分别为2.116mg/mL、0.989mg/mL和 1.121mg/mL。②苦参碱以0.5mg/mL、1.0mg/mL、1.5mg/mL干预HepG2细胞48h,与对照组比较,HepG2细胞Beclin1的表达水平显着下降,且呈浓度依赖性,Bcl-2的表达水平呈不同程度的下降,1.5mg/mL苦参碱可显着下调Bcl-2的表达水平,Bax和P53的表达水平较对照组均有不同程度上升。结论:清热解毒、破瘀散结、健脾益气的清肝化瘀颗粒可有效达到对PLC大鼠的治疗作用,显着延长生存期,其机制可能与通过上调Caspase-3的表达诱导肝癌细胞凋亡起到抗肝癌作用有关。体外实验中清肝化瘀颗粒主要成分苦参碱可通过下调Bcl-2、Beclin1的表达,上调Bax、P53的表达,抑制肝癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,调控细胞自噬。
高博[2]（2021）在《基于单分子方法的i-motif动态结构研究》文中指出基因表达的调控对于细胞的生存能力至关重要。特定基因的过度表达或表达不足会导致灾难性的细胞事件,最终可能直接致使细胞死亡;或者在癌症中导致细胞永生。染色体DNA不仅包含生命的遗传信息,还包含着自身的加工信息。基于现有的研究,我们已经认识到,经典的B型DNA双螺旋结构作为遗传信息的传递者,具有稳定传代、指导蛋白质合成等基础功能;而其他不同种类的非经典DNA二级结构,比如:左手Z型DNA、发夹、三链体、四链体等,在体内有序地对基因组所发挥的功能进行着调控。在上述这些核酸高级结构中,通过Hoogsteen氢键配对形成的G-四链体（G-quadruplex,G4）在近年来受到了最为广泛的研究,而其互补序列也可以通过半质子化的胞嘧啶（cytosine）对构成四链的i-motif（intercalated/intercalation motif）结构。2018年,特异性的i Mab抗体已经在生理条件下于人的细胞核中证实了i-motif结构的存在。细胞生物学与生物信息学的结果表明,i-motif结构在体内的形成具有细胞周期依赖性,多存在于端粒及癌基因的启动子区。由于其在调节癌基因如Bcl2（B-cell lymphoma-2）,c-MYC（cellular-myelocytomatosis）和KRAS（Kirsten ratsarcoma）表达中的重要作用,i-motif结构已经逐渐成为抗癌治疗的新靶点。同时,i-motif结构的多变性和敏感的p H依赖性也使得其在纳米机械及药物递送系统中被广泛应用。但是相较于G4结构的深入研究,我们对于i-motif结构动态折叠机制及调节过程的了解还很局限。因此,在本课题中,我们主要使用单分子荧光共振能量转移（single-molecule fluorescence resonance energy transfer,sm FRET）技术,同时结合传统的生物化学实验方法,利用圆二色谱（circular dichroism,CD）、荧光共振能量转移熔化（FRET-melting）,DNA聚合酶阻滞实验等,在不同p H条件及一价阳离子浓度下研究了i-motif结构的折叠动力学;探讨了互补序列对i-motif结构的影响;在此基础上,我们还选择了特定的蛋白以确定它们对i-motif结构的调控作用。这部分的实验结果最终表明:（1）i-motif结构比互补的G4结构具有更高的动态性,形成了至少四种中间结构,这些结构在一定的条件下可以自发地进行变构和转换。即使在最适条件下,i-motif结构的稳定性也远低于G4结构。（2）在不同的缓冲溶液中,一价阳离子对i-motif结构的热稳定性具有截然相反的作用。具体来讲,在MES和Bis-Tris中,钾离子浓度的升高降低了i-motif结构的稳定性,然而,在PB（phosphate buffer）、SSC（saline sodium citrate buffer）、SCB（sodium cacodylate buffer）中,随着钾离子浓度的升高,i-motif结构的稳定性增强。（3）在酸性环境中,游离的G4链不会对i-motif结构造成影响,但是在中性及弱碱性条件下,会有一部分i-motif结构与互补G4序列自发配对。处于双链同一位置的G4结构由于空间位阻的影响,不论缓冲液的条件如何,都在一定程度上干扰了i-motif结构的形成。（4）低浓度的RPA（10 nM）即可高效率地打开i-motif结构,并将其稳定维持在单链状态。（5）一些解旋酶可以在酸性条件下,通过不依赖ATP及尾链的方式直接作用于i-motif结构,而这种模式不适用于G4及双链结构。（6）ATP对不同解旋酶与i-motif结构之间的相互作用具有不同的调控功能。我们的结果系统性地阐述了i-motif结构在外界不同缓冲环境下、互补G4链存在条件下的稳定性及状态,对于在体内外更加全面地了解i-motif结构具有重要的意义。更重要的是,我们首次在单分子水平上发现了i-motif结构和蛋白质之间独特的相互作用模式,拓展了我们对细胞调节机制的思路与见解。作为抗癌靶点和一种特殊的生物纳米材料,我们的结果对于i-motif结构的应用也具有一定的价值与启发。
林艳丽[3]（2020）在《hTERC基因检测联合TCT、高危型HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值研究》文中提出宫颈癌是最常见的女性生殖系统恶性肿瘤,高危型HPV持续感染是最常见病因[1]。2018年统计数据表明,全世界,宫颈癌的发病率与死亡率在女性恶性肿瘤中均位居第四名[2]。降低宫颈癌发病率与死亡率的关键是癌前病变的早期发现,目前,我国将细胞学与HPV联合筛查作为宫颈癌筛查策略,但近年来,宫颈癌的发病率及死亡率仍然居高不下,因此,需要更有效的检测方法改善这一状况,有研究发现,hTERC（human telomerase RNA component）基因扩增率随着宫颈病变级别增高而增加[3]。本研究通过检测hTERC基因在宫颈脱落细胞中的扩增情况,探究其在宫颈癌筛查中的应用价值,以期为宫颈癌筛查提供新的思路。目的:本研究通过检测宫颈脱落细胞中的hTERC基因扩增情况,统计分析hTERC基因扩增情况与宫颈病变的关系,探究其在宫颈癌筛查中的应用价值。材料与方法:于郑州大学第三附属医院病理科收集宫颈脱落细胞标本107例,应用荧光原位杂交（FISH）技术检测hTERC基因扩增情况。统计标本来源患者的TCT结果、高危型HPV E6/E7 mRNA检测结果及宫颈组织病理学结果,以病理结果为金标准。应用统计学软件分析三种检测方法对于宫颈病变诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数,分析TCT联合高危型HPVE6/E7 mRNA检测方案与hTERC基因检测联合TCT、高危型HPV E6/E7 mRNA检测方案对于宫颈病变诊断的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、约登指数。应用统计学软件制作hTERC基因检测、TCT、高危型HPV E6/E7 mRNA检测诊断宫颈高级别鳞状上皮内病变及以上病变的受试者工作特征（ROC）曲线。结果:1.hTERC基因扩增率随宫颈病变级别增高而增大（χ2=50.93,P=0.028）,hTERC基因检测对宫颈病变诊断的灵敏度为62.03%,特异度为92.86%,阳性预测值为96.08%,阴性预测值为46.43%,约登指数为0.55。2.TCT对宫颈病变诊断的灵敏度为78.48%,特异度为75.00%,阳性预测值为89.86%,阴性预测值为55.26%,约登指数为0.53。3.高危型HPVE6/E7mRNA检测对宫颈病变诊断的灵敏度为91.14%,特异度为60.71%,阳性预测值为86.75%,阴性预测值为70.83%,约登指数为0.52。4.平行试验:TCT联合高危型HPVE6/E7 mRNA检测对宫颈病变诊断的灵敏度为97.47%,特异度为50.00%,阳性预测值为84.62%,阴性预测值为87.50%,约登指数为0.45;hTERC基因检测联合TCT、高危型HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈病变诊断的灵敏度为98.70%,特异度为46.43%,阳性预测值为83.87%,阴性预测值为92.86%,约登指数为0.45。5.序列试验:TCT联合高危型HPV E6/E7 mRNA检测对宫颈病变诊断的灵敏度为72.15%,特异度为85.71%,阳性预测值为93.44%,阴性预测值为52.17%,约登指数为0.58;hTERC基因检测联合TCT、高危型HPVE6/E7 mRNA检测对宫颈病变诊断的灵敏度为46.84%,特异度为100.00%,阳性预测值为100.00%,阴性预测值为40.00%,约登指数为0.47。6.对于宫颈高级别鳞状上皮内病变及以上病变的诊断,hTERC基因检测、TCT、高危型HPVE6/E7 mRNA检测ROC曲线下面积（AUC）分别为0.919、0.655、0.606。两两比较:hTERC基因检测与TCT比较差异有统计学意义（Z=5.32,P<0.001）;hTERC基因检测与高危型HPVE6/E7 mRNA检测比较差异有统计学意义（Z=8.11,P<0.001）;TCT与高危型HPVE6/E7 mRNA检测比较差异无统计学意义（Z=0.99,P=0.32）。结论:1.hTERC基因扩增情况可作为预测宫颈病变程度的良好指标。2.hTERC基因检测可作为传统宫颈癌筛查方案（TCT联合HPV检测）的有效补充手段。
张一[4]（2019）在《WSB2促进黑色素瘤增殖及迁移的机制研究》文中进行了进一步梳理第一部分WSB2在黑色素瘤组织中阳性表达与患者临床病理特征、预后关系的研究[目的]前期研究工作中,通过mRNA芯片技术筛选得出WSB2是黑色素瘤中特异表达的癌基因。本研究通过生物信息学分析、免疫蛋白印迹及免疫组织化学的方法,研究WSB2在黑色素瘤组织中的阳性表达;整理及分析黑色素瘤患者的临床及病理资料,探讨WSB2阳性表达与患者临床病理特征的关系;对黑色素瘤患者进行电话随访,研究WSB2阳性表达与患者预后的关系。旨在获得WSB2在黑色素瘤组织中阳性表达,且其高表达与患者临床病理特征及预后相关的可靠证据,为WSB2成为黑色素瘤诊断及治疗中的分子靶标提供科学依据。[方法]首先,利用生物信息学分析的方法,在NCBI数据库中提取WSB2在人黑色素瘤中的研究结果进行分析,评估WSB2在黑色素瘤中的阳性表达;利用TCGA数据库内的数据研究WSB2 阳性表达与皮肤黑色素瘤患者生存的关系。接下来,收集昆明医科大学第三附属医院（云南省肿瘤医院）手术切除的黑色素瘤及色素痣新鲜组织,BCA法检测蛋白浓度,用免疫蛋白印迹的方法检测黑色素瘤及色素痣新鲜组织中WSB2蛋白表达的情况。收集整理2010年1月至2015年12月昆明医科大学第三附属医院（云南省肿瘤医院）病理科保存的49例恶性黑色素瘤及49例良性色素痣组织的存档蜡块进行回顾性研究。采用免疫组织化学的方法,评估WSB2在人黑素瘤及色素痣组织标本中的阳性表达,分析黑色素瘤患者WSB2阳性表达与临床病理学特征的关系;对患者进行电话随访,评估WSB2阳性表达与患者生存期的关系。统计方法采用单因素方差分析、t检验、卡方检验、Kaplan-Meier生存分析等。[结果]●生物信息学分析显示:利用NCBI数据库分析共70例组织标本纳入研究,其中45例黑色素瘤组织,18例色素痣组织、7例正常皮肤组织,WSB2在黑色素瘤组织中表达高于色素痣及正常皮肤（p<0.05）;●生物信息学分析显示:利用TCGA数据库分析WSB2高表达的皮肤黑色素瘤患者较WSB2低表达的患者总生存期缩短（p<0.05）;●收集昆明医科大学第三附属医院（云南省肿瘤医院）住院患者的黑色素瘤及色素痣新鲜组织各3例,采用免疫蛋白印迹法显示:黑色素瘤组织中WSB2蛋白高表达,灰度值高于色素痣组织（p<0.05）;●回顾性分析显示,2010年1月至2015年12月昆明医科大学第三附属医院（云南省肿瘤医院）共49例恶性黑色素瘤及49例色素痣患者纳入研究;●免疫组织化学结果显示:WSB2在黑色素瘤组织（n=49）阳性表达率高于色素痣（n=49）（69.39%vs.38.78%,p<0.05）;●WSB2高表达与患者临床病理学特征的关系:60岁及以上患者WSB2阳性率显着显着升高（86.36%vs.51.85%,p=0.015）;MM 中 WSB2 阳性率显着高于CM（91.67%vs.57.14%,p=0.037）;淋巴结阳性患者WSB2阳性率显着高于淋巴结阴性的患者（100%vs.61.67%,p<0.05）。●Kaplan-Meier生存分析显示:WSB2高表达的皮肤黑色素瘤患者较WSB2低表达的患者总生存期缩短（p<0.05）。[结 论]WSB2可能是预测黑色素瘤发生发展过程、恶性程度、患者预后及特殊病理类型的重要分子靶标,具有重要临床意义。第二部分 WSB2在黑色素瘤细胞A375、G361及小鼠体内的生物学功能研究[目的]第一部分研究中发现WSB2是在黑色素瘤组织中高表达的基因,其蛋白表达升高提示患者预后不良。为证实WSB2在黑色素瘤中恶性生物学行为导致患者出现这一系列临床病理特征,探讨WSB2在黑色素瘤细胞系A375、G361中对细胞增殖、迁移、凋亡以及细胞周期的影响。进一步采用小鼠移植瘤实验研究WSB2在体内环境下对黑色素瘤的影响。旨在获得WSB2促进肿瘤发生、发展等恶性进程的可靠证据,为WSB2成为黑色素瘤治疗的新靶标提供科学依据。[方法]首先,利用免疫蛋白印迹的方法,在A375、G361、A2058等人黑色素瘤细胞系中检测WSB2的蛋白表达情况。然后,利用WSB2-shRNA慢病毒干扰载体感染A375、G361细胞,以敲减A375、G361细胞中WSB2基因并使其编码蛋白表达降低。抑制WSB2表达后,采用MTS的方法检测细胞活力,评估WSB2对黑色素瘤细胞增殖的影响;抑制WSB2表达后,采用平板克隆形成实验,评估WSB2对黑色素瘤细胞克隆形成能力的影响;抑制WSB2表达后,采用流式细胞计数法,检测黑色素瘤细胞的各个细胞周期内的细胞数及比率;抑制WSB2表达后,采用流式细胞计数法,检测黑色素瘤细胞的凋亡率。最后,采用小鼠移植瘤实验,研究WSB2在体内环境下对黑色素瘤生长、迁移等的影响。统计方法采用单因素方差分析、t检验、卡方检验等。[结果]●在A375、G361、A2058等人黑色素瘤细胞系中均检测到WSB2蛋白表达;●WSB2-shRNA慢病毒干扰载体可以感染A375、G361细胞;●WSB2-shRNA慢病毒干扰载体可以使A375、G361细胞中WSB2蛋白表达降低;●在黑色素瘤细胞系A375及G361中敲减WSB2可抑制黑色素瘤细胞增殖;●在黑色素瘤细胞系A375及G361中敲减WSB2可抑制黑色素瘤细胞克隆形成;● 在黑色素瘤细胞系A375及G361中敲减WSB2可阻碍黑色素瘤细胞周期的进程,使细胞出现G1/S期阻滞;●在黑色素瘤细胞系A375及G361中敲减WSB2可促进黑色素瘤细胞早期凋亡及晚期凋亡;●在黑色素瘤细胞系A375及G361中敲减WSB2可抑制黑色素瘤细胞迁移;●敲减WSB2后的A375细胞移植到裸鼠体内,其肿瘤生长受抑。[结 论]WSB2低表达可抑制黑色素瘤细胞增殖、迁移,促进凋亡,使肿瘤细胞停滞于G1期,并且可抑制黑色素瘤在小鼠体内的生长。第三部分 WSB2激活Wnt/β-Catenin及MAPK信号通路促进黑色素瘤细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡的机制研究[目 的]前面研究中发现WSB2可能具有促进黑色素瘤细胞增殖、迁移,抑制凋亡的作用,并可促进细胞周期进程,使细胞由G1期进入S期。拟采用免疫蛋白印迹等方法,初步探讨WSB2促进肿瘤细胞增殖、迁移,抑制凋亡可能的分子机制,旨在为WSB2成为黑色素瘤治疗的新靶标提供科学依据。[方 法]首先,抑制WSB2表达后,利用免疫蛋白印迹的方法检测Wnt/β-Catenin及MAPK信号通路上相关蛋白的表达;抑制WSB2表达后,利用免疫蛋白印迹的方法检测细胞周期相关蛋白表达;抑制WSB2表达后,利用免疫蛋白印迹的方法检测凋亡通路相关蛋白的表达。然后利用恢复实验,验证相关信号通路蛋白分子与WSB2的作用关系。统计方法采用单因素方差分析、t检验、卡方检验等。[结 果]●慢病毒敲减 A375 细胞中的 WSB2 后,cyclinB1、cyclinD1、p16、p27、p53 蛋白表达升高,CDK2、CDK4、CDK6、cyclinD3、p-Rb 表达下降;●慢病毒敲减 A375 细胞中的 WSB2 后,c-Myc、β-catenin、caspase-3、Bcl-2、Bad、Cytotic C 蛋白表达下降,Bax、p53、Cleaved caspase-3、caspase-7表达升高;●慢病毒敲减 A375 细胞中的 WSB2 后 Ras、b-Raf、MEK1、MEK2、JNK、c-Jun、c-Myc、PI3K、STAT3蛋白表达下降,蛋白STAT1变化不明显;●敲减 WSB2 后的 G361 细胞（LV-shWSB2 G361）较对照组（LV-scramble G361）细胞活力明显下降,在加用β-catenin激动剂SKL2001后,敲减WSB2 后的 G361 细胞（LV-shWSB2 G361+SKL2001）细胞活力较前（LV-shWSB2 G361）恢复;●敲减 WSB2 后的 A375 细胞（LV-shWSB2 A375）较对照组（LV-scramble A375）细胞活力明显下降,在加用β-catenin激动剂SKL2001后,敲减WSB2 后的 G361 细胞（LV-shWSB2 G361+SKL2001）细胞活力较前（LV-shWSB2A375）恢复。[结论]Wnt/β-catenin信号通路及MAPK信号通路的异常激活可能是WSB2促进黑色素瘤增殖的潜在作用机制。WSB2抑制黑色素瘤细胞凋亡的机制可能为:WSB2表达下调,有效抑制c-Myc和Bcl2,Bax表达上调,导致在Bcl2/Bax 比率降低从而诱导细胞凋亡。WSB2有望成为黑色素瘤患者新的治疗靶点,但仍需更多实验证实。
蓝欢荣[5]（2019）在《木犀草素抑制乳腺癌细胞生长的功能研究》文中认为目的:木犀草素是一种黄酮类化合物,被证实具有抗肿瘤作用。然而,木犀草素的抗癌机制仍不明确。本研究旨在探讨木犀草素在乳腺癌中的作用,并揭示木犀草素抑制乳腺癌细胞生长和诱导细胞凋亡的可能机制。材料和方法:MTT法检测木犀草素对MDA-MB-231和Bcap37细胞增殖的影响,计算IC50。克隆形成和Transwell小室实验观察木犀草素对MDA-MB-231和Bcap37细胞增殖和迁移能力的影响。流式细胞仪检测木犀草素对MDA-MB-231和Bcap37细胞周期和凋亡的影响。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）和Western blot检测木犀草素对MDA-MB-231和Bcap37细胞凋亡和相关通路蛋白的影响。ELISA法测木犀草素对细胞端粒酶活性的影响。结果:MTT实验表明木犀草素对MDA-MB-231和Bcap37细胞的增殖均具有明显抑制作用,IC50分别为41.917μM和37.525μM。克隆形成和小室实验表明木犀草素体外能明显抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力,且呈浓度依赖性。进一步的细胞周期研究表明木犀草素能够浓度依赖性将MDA-MB-231和Bcap37细胞分别阻滞于S期或G2/M期。同时,木犀草素能诱导乳腺癌细胞产生凋亡。机制层面,我们发现木犀草素呈浓度依赖性抑制乳腺癌细胞的端粒酶活性。木犀草素处理可抑制IKBα及其下游靶基因c-Myc的磷酸化水平,从而抑制人端粒酶逆转录酶（hTERT）水平。结论:木犀草素具有明显抑制乳腺癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的能力,其作用机制可能是通过抑制IKBα/c-Myc的磷酸化而抑制hTERT的表达,进而抑制乳腺癌细胞的端粒酶活性,为木犀草素治疗乳腺癌提供了初步的实验依据。
郭燕[6]（2019）在《Brd4/c-myc/hTert分子轴调控在VPA促进As2O3诱导HL60细胞终末分化中的作用机制研究》文中研究指明背景:急性白血病（Acute leukemia,AL）是一种造血干细胞的恶性克隆性疾病,发病时骨髓中异常的原始细胞及幼稚细胞大量的增殖,蓄积于骨髓并抑制正常造血,广泛浸润肝、脾、淋巴结等髓外脏器。多数表现为贫血、出血、感染和浸润等征象。目前国内根据受累的细胞类型,AL通常可以分为急性髓系白血病（AML）和急性淋巴细胞白血病（ALL）两大类。据不完全统计,我国AML的发病率约为1.62/10万,而ALL则约为0.69/10万。一般成人以AML多见。急性白血病若不经治疗,平均生存期仅3个月左右,短者甚至在诊断数天后即发生死亡。自1986年开始,我国学者相继证实全反式维甲酸（ATRA）或三氧化二砷（As203）对PML/RARα阳性的急性早幼粒细胞白血病（APL）诱导分化治疗有效,且获得很好的临床治疗效果。而PML/RARα阴性的其他类型AML目前仍只能选择化疗或造血干细胞移植,但反复化疗只能使不足40%的患者长期生存,而造血干细胞移植虽改善部分患者预后,但因花费大、移植相关死亡率高,总体有效率仍不理想。因此,白血病的诱导分化治疗业已成为国内外研究的热点之一。诱导分化疗法的主要特点是选择性诱导白血病细胞分化成熟后自然凋亡/死亡,而对正常组织细胞没有明显毒副作用,从理论上讲,该种治疗模式将成为人类治疗白血病最为理想的方法之一。受到ATRA或As203成功治疗PML/RARα阳性的APL案例的鼓舞,新的分化诱导剂在开发研究方面也取得了较大进展。例如维生素衍生物、细胞因子、组蛋白去乙酰化酶抑制剂（HDAC inhibitor,HDACi）、DNA甲基化酶抑制剂、化疗药物、药用植物提取物和植物生长调节素等。然而,截止到目前为止,除ATRA和As203成功应用于临床治疗APL外,单独使用上述新型诱导分化剂均没有取得令人鼓舞的效果,更多的是倾向于不同诱导分化剂之间的联合应用,以期增强疗效、减少耐药、降低毒副作用等。其中,在新型诱导分化药物中,组蛋白去乙酰化酶抑制剂HDAC抑制因子是重要的一类诱导剂。其主要的理论依据是核心组蛋白的乙酰化与去乙酰化是基因转录表达过程中重要的调控方式,组蛋白末端的乙酰化状态在组蛋白乙酰化酶（HATs）和组蛋白去乙酰基酶（HDACs）的作用下保持着动态平衡,与染色质的结构调节和转录活性状态密切相关,与肿瘤的发生密切相关。因此,包括HDAC抑制因子在内的不同诱导分化剂的联合应用,将成为肿瘤细胞诱导分化治疗的新思路、新途径。根据以往的研究报道,上述诱导分化治疗的结果主要表现为分化或凋亡两种现象,其主要的分子机制在于降解或抑制特异性PML/RARα融合蛋白。我们在前期的体外实验中,发现了两个有趣的现象,一是小剂量As203（0.25-0.5umol/L以下）均可以诱导NB4（PML/RARα表达阳性）和HL60细胞（PML/RARα阴性）发生部分分化现象,而HDAC抑制因子VPA或TSA可以诱导这咱部分分化向终末分化转变。二是ATRA或高剂量As2O3均可以诱导NB4和HL60细胞分别发生终末分化或凋亡的发生。那么这种ATRA或As2O3同样可以诱导PML/RARα阴性HL60细胞发生明显细胞终末分化的事实,说明传统的“PML/RARα融合蛋白降解”学说并不能成为它们作用的唯一的分子机制,应该存在着其它诱导分化的机制途径。而我们建立的HDAC抑制因子VPA促进小剂量As2O3诱导HL60细胞由部分分化向终末分化的转变的预实验结果,为深入探讨其诱导分化的分子机制提供了很好的体外细胞模型。因此,下一步研究的重点在于如何重新选择分子机制研究的切入点。已知BRD（a double bromodomain-containing protein）是bromodomain BET家族的成员,主要包含两个溴基结构的蛋白,可以优势结合乙酰化的染色质从而启动基因转录。BET家族特异性阻滞剂JQ1介导的Brd4活性抑制,导致白血病细胞的增殖受到抑制,提高荷瘤小鼠的生存率。部分学者进一步发现,Brd4抑制剂JQ1抑或是Brd4的shRNA均可以显着抑制c-myc调控基因的表达。因此,我们推测Brd4可能在VPA促进小剂量As203诱导HL60细胞发生终末分化的过程中发挥作用。重点探讨Brd4是否通过调控c-myc而影响白血病细胞的增殖和分化现象,而c-myc蛋白是否进一步影响下游基因hTert的表达变化。Brd4/c-myc/hTert分子轴的研究结果,将为新型终末分化诱导剂筛选、关键分子靶向治疗提供新的依据,并进一步创新和丰富粒系分化新理论。目的:在建立HDAC抑制因子VPA促进小剂量As2O3诱导PML/RARα阴性HL60细胞由部分分化向终末分化的转变的预实验基础上,依据BRD4参与白血病细胞增殖分化过程的实验结果,重点探讨Brd4是否通过调控myc而影响白血病细胞的增殖和分化现象,而c-myc蛋白是否进一步影响下游基因hTert的表达变化。率先揭示Brd4/c-myc/hTert分子轴在白血病细胞发生分化过程中的作用,进一步创新和丰富粒系分化新理论,为白血病治疗提供新的干预靶点。方法:首先应用VPA、As2O3及两者联合诱导PML/RARα阴性HL-60细胞发生分化,或部分分化向终末分化模型的转变,然后采用CCK8实验测定不同药物及浓度对细胞增殖的影响,瑞氏-吉姆萨检测细胞分化流式细胞仪检测HL60细胞的周期和CD11b分化抗原。NBT实验和细胞表面分化抗原CD11b作为观察药物对细胞的分化的影响;RT-PCR方法检测目的基因的mRNA水平变化;Western blot检测目的蛋白的表达水平;ChIP实验检测Brd4对c-myc或c-myc对hTert靶基因启动子的结合变化。BALB/Nude荷瘤小鼠进行药物抗白血病作用的研究。结果:无论是0.5 μmol/L的As2O3、1mmol/L VPA或者0.5 μmol/L As2O3+1mmol/L VPA均能抑制HL-60细胞的增殖,并呈现时间依赖性。0.5 μmol/L As203+1mmol/L VPA诱导第2天时,G0/G1期增加,S期降低,与对照组比较,G2/M期变化不明显。Wright-Gimesa染色观察,CD11b分化抗原表达,以及NBT还原实验均证实诱导分化模型建立成功,并以两种药物联合诱导HL-60细胞分化的能力更强（P<0.05）。0.5μmol/LAs2O3+1mmol/L VPA协同诱导48h后,HL-60细胞中的Brd4和c-myc基因表达水平逐渐降低,正常对照组表达变化不大。0.5μmol/L As2O3+1mmol/L VPA协同诱导48h后,HL-60细胞中的Brd4蛋白表达水平逐渐降低,伴随c-myc蛋白表达降低。在siRNA作用后siBrd4表达降低,c-myc蛋白表达也降低。说明Brd4和c-myc之间存在正相关。收集siBrd4干扰与As2O3+VPA协同药物对CD11b表达的影响,siBrd4干扰或其与As2O3+VPA协同药物协同干扰后,细胞表面表达CD11b表达明显升高。为了证实Brd4对c-myc调控是否具有靶向性,当细胞处于对数期生长时,用0.5 μmol/LAs2O3、1mmol/L VPA或As2O3+VPA诱导白血病细胞。ChIP实验结果表明,Brd4可以结合c-myc 3启动子对靶细胞的分化发挥靶向调控作用,c-myc可以结合hTert的启动子对靶细胞分化发挥靶向调控作用。体内实验中,As2O3+VPA明显抑制体内荷瘤的生长,并与分化的发生和终末分化后凋亡有关。结论及意义:在首先采用VPA促进小剂量As2O3诱导PML/RARα阴性HL60细胞发生终末分化转变的基础上,率先揭示Brd4/c-myc/hTert分子轴在这种终末分化转变中的作用,提出非传统“PML/RARα融合蛋白降解”的分子机制。不仅创新和丰富粒系分化新理论,也为白血病治疗提供新的干预靶点。
陈刘[7]（2018）在《TERT与Par-4相互作用参与2型糖尿病胰岛β细胞凋亡的机制研究》文中研究说明背景和目的前期课题组运用酵母双杂交技术发现Par-4与hTERT有相互作用。Par-4有明确的促进肿瘤细胞凋亡的作用,且存在其特定的促进凋亡功能区域。那么hTERT与Par-4结合的区域是否为其特定的促进凋亡的区域呢?我们首先用分子生物膜层干涉技术检测Par-4和hTERT的直接结合区域。过表达TERT可以在胰岛β细胞中实现抗凋亡作用,但TERT抗凋亡的机制尚不清楚。Par-4与多种增龄性疾病相关,且Par-4可以通过线粒体途径诱导细胞凋亡。我们首先从细胞水平研究Par-4和TERT相互作用及其在胰岛β细胞凋亡中的作用机制。再进行体内实验,进一步探索TERT与Par-4相互作用参与2型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的机制。方法:1.根据hTERT的功能结构域,将hTERT分为4个片段,构建其四个缺失突变体。首先构建Par-4全长基因,待测出与hTERT有相互作用后,再根据Par-4的功能分区构建Par-4的3个缺失突变体。确定基因片段的位点后由德泰生物科技有限公司完成基因构建、合成和质检。hTERT四个缺失突变体、Par-4全长、Par-4三个缺失突变体蛋白在大肠杆菌系统中表达与纯化;成功后再进行蛋白的鉴定。使用分子生物膜层干涉技术检测蛋白与蛋白直接相互作用;Par-4全长蛋白分别与hTERT四个缺失突变体检测,仅hTERT-2能够与Par-4结合,再进行hTERT-2蛋白与Par-4的三个缺失突变体相互作用检测。2.NIT-1细胞首先分为C组（正常组）、H12组（高糖高脂DMEM培养基培养12小时）、H24组（高糖高脂DMEM培养基培养24小时）、H48组（高糖高脂DMEM培养基培养48小时）。然后再把细胞分为C组（正常空病毒对照组）、H组（高糖高脂组）、C-Par-4组（正常+Par-4抑制组）、H-Par-4组（高糖高脂+Par-4抑制组）;CS组（SH5抑制组）、HS组（高糖高脂+SH5抑制组）、CS-Par-4组（SH5抑制+Par-4抑制组）、HS-Par-4组（高糖高脂+SH5抑制+Par-4抑制组）。MTT检测各组细胞存活率;TUNEL染色检测各组细胞凋亡情况;ELISA检测胰岛素分泌情况;免疫细胞化学、Western blot检测Par-4、TERT、Akt、p-Akt蛋白表达情况;免疫共沉淀和免疫荧光检测Par-4与TERT的表达情况。3.实验动物分组为N组（对照组）、D组（2型糖尿病小鼠）、N-Par-4组（正常饮食的Par-4基因敲除小鼠）、D-Par-4组（Par-4基因敲除的糖尿病小鼠）;每只动物每天都会测量体重和尾静脉血糖值。在实验结束时,摘除胰腺并保存在-80℃。ELISA试剂盒测定小鼠血清的Par-4和胰岛素水平;Western blot和免疫组化检测Par-4、TERT、Akt、p-Akt蛋白表达;TUNEL染色测胰腺组织细胞凋亡率。结果:1.完成hTERT四个缺失突变体、Par-4全长及其三个缺失突变体的蛋白在大肠杆菌系统中表达与纯化以及鉴定。Par-4蛋白与hTERT-1（1-183aa）、hTERT-3（523-924aa）和hTERT-4（915-1132aa）蛋白无直接相互作用。Par-4与5个不同浓度的hTERT-2（170-546aa）蛋白均有直接相互作用。hTERT-2蛋白与Par-4（1-299aa）、Par-4（1-160aa）和Par-4（161-340aa）蛋白有直接相互作用。2.随着处理时间的延长,高糖高脂48小时组与细胞处理时间更短组以及对照组细胞相比Par-4表达和细胞凋亡率显着增加（p<0.05）。此外,高糖高脂48小时组与细胞处理时间更短组及对照组细胞相比TERT表达、存活率和胰岛素分泌显着下降（p<0.05）。正常细胞中抑制Par-4,不会造成TERT表达、细胞增殖能力、凋亡率和胰岛素分泌能力的变化（P>0.05）。高糖高脂干预可以增加胞浆Par-4水平和凋亡率,降低胞浆TERT水平、细胞生存率和胰岛素分泌能力。当在高糖高脂条件下抑制Par-4可以增加胞浆TERT水平、增加细胞存活率、增加胰岛素分泌（P<0.05）。免疫共沉淀和免疫荧光检测结果提示Par-4和TERT在胞浆相互作用,Par-4可以抑制TERT的表达。高糖高脂处理导致Par-4表达增加,抑制TERT表达和增加凋亡。相反,在高糖高脂环境下减少Par-4表达,可以增加TERT表达,抑制凋亡。正常细胞中抑制Akt活性,不会造成胰岛β细胞凋亡率的变化。高糖/高脂干预后可导致Par-4表达上升,Akt、p-Akt表达减少,细胞存活率下降,最终导致胰岛素分泌降低和NIT-1细胞凋亡增加,抑制Par-4可缓解以上过程。抑制p-Akt表达后,细胞凋亡增加。说明Par-4可以通过Akt/p-Akt信号途径诱导胰岛β细胞凋亡和胰岛素分泌功能的改变。3.N组和N-Par-4组凋亡率和胰岛素分泌无差异,说明在正常小鼠中敲除Par-4,不会影响凋亡率和胰岛素分泌。D组的凋亡率较N组明显升高,胰岛素分泌和HOMA-β指数显着降低。D组与D-Par-4组比较,D组凋亡率更高,胰岛素分泌量更少,HOMA-β更低,提示Par-4在糖尿病小鼠体内有促进胰岛β细胞凋亡的功能。免疫组化和Western blot显示2型糖尿病小鼠胰岛β细胞Par-4表达增多,TERT、Akt和p-Akt蛋白表达下降,导致凋亡率增加和胰岛素分泌减少。阻断Par-4表达可升高TERT、Akt和p-Akt蛋白表达,改善凋亡和胰岛素分泌功能不全。结论1.Par-4全长和三个缺失突变体均与hTERT-2（170-546aa）直接结合,我们推测Par-4至少有两个位点会与hTERT-2（170-546aa）直接结合。因此Par-4与hTERT的结合位点为NLS和除NLS2以外的SAC或LZ区域。2.Par-4的表达与高糖高脂处理和凋亡率呈正相关,与TERT表达、生存率和胰岛素分泌呈负相关;而且,这些影响与时间有关。因此,选择48h作为最佳处理时间。高糖高脂通过上调Par-4表达,下调TERT表达,诱导胰岛β细胞凋亡。Par-4与TERT相互作用,在高糖高脂培养的NIT-1细胞中观察到其在胞浆抑制TERT表达,可能触发Par-4向细胞核转位。糖尿病激活Par-4并通过抑制p-Akt表达诱导胰岛β细胞凋亡。3.Par-4在糖尿病小鼠体内有促进胰岛β细胞凋亡的功能。2型糖尿病小鼠胰岛β细胞Par-4表达和分泌增多,TERT、Akt和p-Akt蛋白表达下降,导致胰岛β细胞凋亡率增加和胰岛素分泌减少。阻断Par-4表达可升高TERT、Akt和p-Akt蛋白表达,改善胰岛β细胞凋亡和胰岛素分泌功能不全。
侯小赛[8]（2018）在《miR-1182通过靶向hTERT抑制卵巢癌的转移和增殖》文中提出目的:目前研究发现,micromaRNA（miRNA）与多种危害人类健康的恶性肿瘤发生发展密切相关,其参与调控肿瘤细胞的生物学特性,例如增殖、侵袭、转移、凋亡等阶段,通过对癌基因、抑癌基因以及相关蛋白表达的表观遗传学调控对肿瘤细胞发挥作用,这表明miRNA有望成为癌症治疗靶点。MicroRNA1182（miR-1182）是micromaRNA调控网络的重要组成部分,对许多疾病发挥重要调节作用,然而,其对卵巢癌发生发展和作用机制尚未研究。本研究旨在探讨miR-1182在卵巢癌发生、发展以及转移中的表达情况,及其潜在的变化规律和作用靶点,为临床诊断和治疗卵巢癌提供理伦依据。方法:本研究通过收集我院2015年03月至2018年03月之间卵巢癌患者行手术切除的卵巢上皮癌组织标本,共50例;同时收集癌旁正常卵巢组织标本50例。在第一部分通过荧光实时定量PCR（RT-PCR）法观察比较miR-1182在卵巢癌组织、细胞（SKOV3）和正常卵巢组织及细胞（IOSE80）中的表达情况和变化规律。在第二部分中,为了研究miR-1182的潜在靶点,我们利用TargetScan,miRDB和microRNA三种公开的算法对其进行了检测,以推测阐明miR-1182的可能靶点,并采用双荧光素酶报告系统证实了人端粒酶逆转录酶（human Telomerase Reverse Transcriptase,hTERT）是miR-1182的直接调控靶点,并被实施到下一步的实验中。在第三部分中我们在SKOV3细胞中分别设立三个组进行相似的实验（miR-NC组,miR-1182模拟组和模拟物+ hTERT组）,使用RT-PCR方法和Western blot蛋白印记实验检测miR-1128对靶基因hTRET表达情况的影响,进而明确miR-11H82与其靶基因之间的相关性。在第四部分中我们进一步采用MTT法检测卵巢癌细胞的增殖率,采用Transwell实验检测卵巢癌细胞的迁移和侵袭能力,从而明确miR-1182对卵巢癌的发生与发展,以及在侵袭和转移方面发挥的作用。结果:1、miR-1182在卵巢癌组织和细胞中表达下调我们通过RT-PCR的方法观察了miR-1182在卵巢癌组织和细胞（SKOV3细胞）及正常卵巢组织和细胞（IOSE80细胞）中miR-1182的表达情况,结果显示,与正常卵巢组织相比,卵巢癌组织中miR-1182的表达水平下调,差异有统计学意义（p<0.0001,见图1-1）,与正常卵巢细胞（IOSE80细胞）相比,卵巢癌细胞（SKOV3细胞）中miR-1182的表达水平也呈下降趋势,差异有统计学意义（p<0.001,见图1-2）,因此我们认为miR-1182在卵巢癌进展过程中具有一定的调节作用。2、卵巢癌中hTERT是miR-1182的直接靶标我们利用TargetScan,miRDB和microRNA三种公开的算法推测出人端粒酶逆转录酶（human Telomerase Reverse Transcriptase,hTERT）是miR-1182的潜在靶点,并建立含有hTERT3’UTR野生型和含有hTERT3’UTR突变型miR-1182种子序列的萤光素酶报告载体,利用模拟物增加miR-1182的表达从而导致野生型hTERT 3’UTR报告基因的荧光素酶活性降低,但对突变型却没有影响（P<0.001,见图2-2）,这表明可通过调节miR-1182来抑制hTERT的表达水平。3、miR-1182和hTERT的相关性我们在SKOV3细胞中分别设立三个组进行相似的实验（miR-NC组,miR-1182模拟组和模拟物+ hTERT组）,通过实时PCR分析和Western blot蛋白质印迹两种实验可以发现,SKOV3细胞中miR-1182的上调可以降低hTERT的表达水平（图3-1,图3-2）,其差异有统计学意义（P<0.05）,这些数据表明hTERT受到miR-1182的负调控。4、miR-1182抑制卵巢癌细胞的增殖、侵袭和迁移我们通过MTT法检测细胞增殖率,MTT结果显示,通过转染miR-1182模拟物上调miR-1182后,SKOV3细胞的细胞增殖率出现降低趋势,相比之下,下调miR-1182反而促进卵巢癌细胞的生长（见图4-1）。在Transwell实验中,我们发现SKOV3细胞的迁移和侵袭能力通过上调miR-1182起到抑制作用。（p<0.05,图4-2,图4-3）。结论:首先实验发现miR-1182在卵巢癌组织、细胞（SKOV3）中的异常表达情况,进而证实hTERT是miR-1182的潜在靶点,hTERT的表达可被miR-1182调节,hTERT受到miR-1182的负调控,从而抑制卵巢癌细胞的增殖和侵袭迁移能力,揭示miR-1182/hTERT轴可能成为诊断和治疗卵巢癌的潜在靶点,为临床提供理论依据。
张英博[9]（2015）在《蝙蝠葛碱调控Hedgehog信号通路对胰腺癌相关基因、蛋白影响的实验研究》文中研究说明目的:通过蝙蝠葛碱（Dau）抗胰腺癌作用的体内外实验研究,观察Dau对人胰腺癌细胞BxPC-3和裸鼠移植瘤的抑制作用、超微病理学改变及细胞周期与凋亡的影响;观察Dau调控Hedgehog信号通路中Shh、Ptch1、Smo、Gli1 mRNA和蛋白表达对胰腺癌抑制作用的影响,深入探讨蝙蝠葛碱抗胰腺癌的作用机制。方法:通过细胞生物学、超微病理学、免疫化学法、Western blot、实时定量PCR、流式细胞术等技术,从生物学特性、蛋白质和基因水平阐述Dau对胰腺癌的抑制作用以及与Hedgehog信号通路的相关性。胰腺癌BxPC-3细胞培养、传代,分为四组:模型组、Dau高、低剂量组及5-FU组;构建裸鼠移植瘤模型,随机分为五组:模型组、空白对照组、Dau高、低剂量组及5-FU组,药物干预后检测:（1）体外实验通过台盼蓝拒染法、MTT法检测Dau对人胰腺癌BxPC-3细胞生长曲线及增殖的影响;（2）体内实验检测Dau对人胰腺癌BxPC-3移植瘤抑制率及脾脏指数的影响;（3）通过透射电镜观察Dau对人胰腺癌BxPC-3细胞及移植瘤超微结构变化的影响;（4）利用流式细胞术检测Dau对人胰腺癌BxPC-3细胞和移植瘤细胞周期及凋亡变化的影响;（5）采用实时定量PCR、免疫细胞化学、Western blot技术检测Hedgehog信号通路中主要分子Shh、Ptch1、Smo、Gli1 mRNA和蛋白表达水平变化。结果:（1）体外实验中Dau能明显抑制BxPC-3细胞的增殖,抑制率Dau高、低剂量组、5-FU组分别为70.32%、42.68%、56.07%,与模型组比较差异显着有统计学意义（P<0.01）;Dau不同时间、剂量比较具有时间依赖性,统计学有意义（P<0.01）。（2）体内实验中Dau对胰腺癌BxPC-3移植瘤抑制率Dau高、低剂量组、5-FU组分别为50.44%、31.74%、33.64%。与模型组比较差异显着（P<0.01）;Dau高、低剂量组与空白组比较,对荷瘤裸鼠的脾脏指数无明显影响（P>0.05）;而5-FU组与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。（3）通过透射电镜观察Dau对胰腺癌BxPC-3细胞及移植瘤超微结构变化的影响,镜下可见细胞器发生不同程度的损伤改变,并伴有细胞凋亡出现。（4）在体内、外FCM实验检测中Dau高、低剂量、5-FU各组BxPC-3细胞及移植瘤细胞均出现不同程度阻滞,表现为G1期增长,S期缩短;并随Dau浓度升高细胞凋亡率上升;细胞周期检测中Dau高剂量组、5-FU组与模型组比较差异显着（P<0.01）,Dau低剂量组与模型组比较有差异性（P<0.05）;细胞凋亡检测中药物干预各组与模型组比较各组均有显着差异（P<0.01）。（5）采用免疫化学、Western blot、实时定量PCR技术检测体内、外Hedgehog信号通路中Shh、Ptch1、Smo、Gli1 mRNA和蛋白表达,Dau高、低剂量组、5-FU组表达均下凋,Dau高剂量组与模型组比较差异显着具有统计学意义（P<0.01）。结论:（1）Dau对人胰腺癌BxPC-3细胞具有显着的抑制作用,抑制细胞增殖,且具有时间依赖性。（2）Dau有效抑制胰腺癌BxPC-3裸鼠移植瘤生长,对脾脏无明显损伤作用。（3）Dau干预作用人胰腺癌BxPC-3细胞、移植瘤后,可阻滞细胞周期并诱导肿瘤细胞的凋亡。（4）Dau对体内、外胰腺癌细胞调控作用中均可下调Hedgehog信号通路中Shh、Ptch1、Smo、Gli1 mRNA和蛋白表达,因此我们可以推断Dau抗胰腺癌的作用机理之一就是通过对Hedgehog信号通路的抑制而实现的,Dau通过下调Hedgehog信号通路中相关基因、蛋白的表达而阻滞肿瘤细胞周期、诱导肿瘤细胞凋亡,进而抑制胰腺癌细胞的生长、增殖。
姜涛[10]（2012）在《三氧化二砷抑制腺样囊性癌ACC-2细胞生长、诱导其凋亡的基因表达谱及其分子机制研究》文中提出目的本研究拟：（1）研究观察三氧化二砷（arsenic trioxide, As2O3）对腺样囊性癌（adenoid cystic carcinoma, ACC）细胞株ACC-2细胞的生长抑制作用,探讨其诱导ACC-2细胞凋亡的作用机制。（2）检测As2O3药物作用前、后的ACC-2细胞的基因表达谱变化,筛选诱导ACC-2细胞凋亡的相关基因。（3）探讨凋亡相关基因bcl-2、c-myc在As2O3诱导ACC-2细胞凋亡中的作用,验证基因芯片的基因表达谱检测结果,探讨As2O3诱导腺样囊性癌.ACC-2细胞凋亡的分子机制,为临床合理应用As2O3药物提供理论依据。（4）探讨hTERT在As2O3诱导ACC-2细胞凋亡中的作用。（5）探讨线粒体膜电位（Δψm）、Caspase3在As2O3诱导ACC-2细胞凋亡中的作用。材料与方法（1）进行ACC-2细胞培养,将As2O3建立不同药物浓度梯度（0、1.0、2.0、4.0、8.0μmol/L）分别作用于ACC-2细胞,在倒置相差显微镜下动态观察培养板中不同浓度As2O3处理前后ACC-2细胞的形态变化,并照相记录;分别在药物作用后24h、48h、72h行MTT染色,酶标仪测得吸光度OD值,计算细胞生长抑制率；行Hoechst33342/PI双染免疫荧光染色,Annexin V-PI双染行流式细胞术分析细胞凋亡率,PI染色行流式细胞术检测DNA含量与细胞周期；用透射电子显微镜观察As2O3作用于ACC-2细胞前后的细胞超微结构变化。（2）应用基因芯片技术检测As2O3药物作用前、后的ACC-2细胞的基因表达谱变化,运用生物信息学分析差异基因的功能网络,获得显着表达差异的候选基因。（3）应用RT-PCR和Western Blot方法,检测As2O3作用前、后,ACC-2细胞的凋亡相关基因bcl-2、c-myc的mRNA水平和蛋白水平的表达。（4）应用RT-PCR方法,检测As2O3作用前、后,ACC-2细胞的hTERT的mRNA水平表达。（5）用Rh123染色,流式细胞仪检测8.0μmol/L As2O3作用前、后（24h）,ACC-2细胞的线粒体膜电位（△ψm）变化；用多功能酶标仪进行Caspase3活性检测。结果（1）As2O3可抑制腺样囊性癌ACC-2细胞生长,且抑制作用呈现时间-剂量依赖关系；免疫荧光染色观察到随As2O3药物浓度增高,作用时间延长,细胞核被染成强蓝色的凋亡细胞越来越多；透射电子显微镜下的超微结构观察结果,可见ACC-2细胞有部分呈现凋亡的形态,细胞体积缩小,细胞核浓聚缩小,核内出现透明区,核仁消失,核空泡化,染色质固缩,聚集于核膜下,染色质或凝集成团块状部分并附着在核膜下,或染色质边聚,形成新月状,细胞器减少,细胞浆浓缩,或裂解成质膜包绕的染色质碎片（凋亡小体）；流式细胞术结果显示,随As2O3药物作用浓度的增加,ACC-2细胞的凋亡率逐渐增高;除低浓度组（1.0μmol/L）外,其余药物浓度组（2.0、4.0、8.0μmol/L）与对照组相比,其差异有显着性（P<0.05）；药物作用组均可检测到亚G1期凋亡峰,但低浓度组（1.0、2.0μmol/L）的凋亡峰不明显,高浓度组（4.0、8.0μmol/L）的亚G1期凋亡峰明显；4.0、8.0μmol/L的As2O3作用48h后,ACC-2细胞G2-M期细胞数明显增多,与对照组相比,分别上升30.23%和33.43%。（2）As2O3作用于ACC-2细胞后,其基因表达谱发生了较大的变化,有1160个基因显着上调表达；1084个基因显着下调表达。（3）RT-PCR结果显示,在未经药物作用、作为对照组的正常培养的ACC-2细胞中,bcl-2、c-myc的mRNA呈现明显高表达；在As2O3作用于ACC-2细胞后24h与48h时,随As2O3药物浓度的增高（1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μmol/L）,bcl-2、c-myc的mRNA表达逐渐降低。Western Blot结果显示,在未经药物作用、作为对照组的正常培养的ACC-2细胞中,bcl-2、c-myc蛋白呈现明显高表达；在As2O3作用于ACC-2细胞后24h与48h时,随As2O3药物浓度的增高（1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μmol/L）, bcl-2、c-myc蛋白表达逐渐降低,与mRNA表达变化趋势相一致。（4）RT-PCR结果显示,在未经药物作用、作为对照组的正常培养的ACC-2细胞中,hTERT的mRNA呈现明显高表达；在As2O3作用于ACC-2细胞后24h与48h时,随As2O3药物浓度的增高（1.0μmol/L、2.0μmol/L、4.0μmol/L、8.0μimol/L）, hTERT的mRNA表达逐渐降低。（5）空白对照组ACC-2细胞内Rh123荧光强度最强,8.0μmol/L As2O3治疗组ACC-2细胞内Rh123荧光强度减弱,其差异有显着性（P<0.05）；随着As2O3药物浓度的增高（0μmol/L,1μmol/L,2μmol/L,4μmol/L,8μmol/L）, ACC-2细胞的Caspase3酶活力单位逐渐增加。结论（1）As2O3可抑制腺样囊性癌ACC-2细胞生长,主要是通过诱导ACC-2细胞凋亡来实现的；As2O3作用于ACC-2细胞后,细胞呈现出典型的凋亡形态学改变,可以检测到亚G1期凋亡峰,细胞于G2/M期阻滞,细胞凋亡率随As2O3药物浓度的增高而逐渐增高。（2）As2O3作用于ACC-2细胞后,其基因表达谱发生了较大的变化,与凋亡相关的基因变化明显。（3）As2O3通过下调ACC-2细胞的bcl-2、c-myc、hTERT的mRNA转录表达及bcl-2、c-myc的蛋白表达,来诱导ACC-2细胞凋亡。（4）As2O3作用于ACC-2细胞,可通过降低线粒体膜电位从而引起细胞凋亡。随着As2O3药物浓度的增高,ACC-2细胞的Caspase3酶活力单位逐渐增加,Caspase3被激活,细胞随即发生不可逆转的凋亡过程。（5）As2O3诱导腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡,至少通过早期下调bcl-2和c-myc的上游mRNA转录表达及下游蛋白表达,同时正相调节hTERT的mRNA转录表达下调,bcl-2蛋白表达抑制,线粒体膜电位下降甚至耗散,从而可造成线粒体外膜通透性增高,MPTP开放,促进Cyt C的释放,激活效应Caspase3,从而发生细胞凋亡,细胞阻滞于G2/M期。As2O3诱导ACC-2细胞凋亡,可能是通过癌基因、抑癌基因、蛋白酶类的多步骤、多因素参与的复杂过程,通过立体交叉网状的信号转导通路来实现的。
二、人类端粒酶(hTERT)与bcl-2、p53、c-myc的关系(综述)（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、人类端粒酶(hTERT)与bcl-2、p53、c-myc的关系(综述)（论文提纲范文）
（1）清肝化瘀颗粒对原发性肝癌大鼠的治疗作用及主要成分对肝癌细胞增殖凋亡的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一部分 文献综述 |
| 综述 肝癌的分子发病机制及中医药抑制肝癌的作用机制研究进展 |
| 1 肝癌的流行病学现状 |
| 2 肝癌的分子发病机制 |
| 3 中医药抗肝癌的作用机制 |
| 4 结语 |
| 参考文献 |
| 第二部分 实验研究 |
| 前言 |
| 实验一 清肝化瘀颗粒对PLC大鼠的治疗作用 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验二 清肝化瘀颗粒对PLC大鼠肝癌细胞凋亡的影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 实验三 清肝化瘀颗粒主要成分对肝癌细胞增殖凋亡的影响 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）基于单分子方法的i-motif动态结构研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 主要符号对照表 |
| 第一章 文献综述 |
| 1.1 i-motif结构 |
| 1.1.1 i-motif结构概述 |
| 1.1.2 i-motif结构的生物学功能 |
| 1.1.3 i-motif结构的研究进展及应用 |
| 1.2 G4 结构 |
| 1.2.1 G4 结构的特征 |
| 1.2.2 G4 结构的生物学功能 |
| 1.2.3 G4 结构的研究方法及研究进展 |
| 1.3 RPA和解旋酶 |
| 1.3.1 RPA的结构特征 |
| 1.3.2 RPA的生物学功能 |
| 1.3.3 解旋酶概述 |
| 1.3.4 解旋酶的分类及作用模型 |
| 1.4 单分子技术 |
| 1.4.1 单分子技术简介 |
| 1.4.2 smFRET技术的原理与应用 |
| 1.5 研究目的与意义 |
| 第二章 i-motif DNA的动态性及其中间结构 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料 |
| 2.2.2 实验方法 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 不同pH对具有高度动态性的i-motif结构的作用 |
| 2.3.2 i-motif DNA至少具有四个中间折叠状态 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 一价阳离子对i-motif DNA的双重作用 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 实验材料 |
| 3.2.2 实验方法 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 K~+在不同缓冲系统中对 i-motif DNA 的热稳定性表现出相反的影响 |
| 3.3.2 PB 缓冲液中高浓度的K~+促进 i-motif DNA 高级结构的形成 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 互补链与i-motif结构的相互作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.1.1 实验材料 |
| 4.1.2 实验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 处于双链同一位置的G4 链在酸性条件下干扰i-motif结构的折叠 |
| 4.2.2 游离的互补G4 链在中性条件下与i-motif结构自发配对形成双链 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 蛋白与i-motif结构的相互作用 |
| 5.1 引言 |
| 5.2 材料与方法 |
| 5.2.1 实验材料 |
| 5.2.2 实验方法 |
| 5.3 结果与分析 |
| 5.3.1 低浓度的RPA即可打开i-motif结构并将其维持在线性状态 |
| 5.3.2 解旋酶对i-motif结构的作用与调节 |
| 5.4 讨论 |
| 第六章 结论与创新点 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（3）hTERC基因检测联合TCT、高危型HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词 |
| 引言 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 4 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 宫颈癌筛查方法研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简历、在学期间发表论文 |
| 致谢 |
（4）WSB2促进黑色素瘤增殖及迁移的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 引言 |
| 参考文献 |
| 第一部分: WSB2在黑色素瘤组织中阳性表达与患者临床病理特征、预后关系的研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分: WSB2在黑色素瘤细胞系A375、 G361及小鼠体内的生物学功能研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 第三部分: WSB2激活Wnt/β-Catenin及MAPK信号通路促进黑色素瘤细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡的机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 全文总结 |
| 综述 原发性粘膜黑色素瘤的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间获得的学术成果 |
| 致谢 |
（5）木犀草素抑制乳腺癌细胞生长的功能研究（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 1 前言 |
| 2 材料与方法 |
| 2.1 细胞株 |
| 2.2 主要药品及试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 木犀草素体外对乳腺癌细胞增殖的影响 |
| 3.2 木犀草素体外对乳腺癌细胞克隆形成的影响 |
| 3.3 木犀草素体外对乳腺癌细胞迁移的影响 |
| 3.4 木犀草素体外对乳腺癌细胞周期的影响 |
| 3.5 木犀草素体外对乳腺癌细胞凋亡的影响 |
| 3.6 木犀草素体外对hTERT水平和端粒酶活性的影响 |
| 3.7 木犀草素体外对乳腺癌细胞NF-kB/cMyc通路的影响 |
| 4 讨论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 作者简历及在读期间发表论文情况 |
（6）Brd4/c-myc/hTert分子轴调控在VPA促进As2O3诱导HL60细胞终末分化中的作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语/符号说明 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 急性白血病的诱导分化治疗 |
| 1.2 溴化结构蛋白4(Brd4) |
| 1.3 原癌基因c-myc |
| 1.4 人类端粒酶逆转录酶(hTert) |
| References |
| 第二章 HL-60白血病细胞分化模型的建立 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 试剂耗材 |
| 2.2.2 实验仪器 |
| 2.2.3 主要试剂和溶液配制 |
| 2.2.4 诱导分化模型的建立 |
| 2.2.5 观察HL-60细胞分化的形态 |
| 2.2.6 流式细胞术检测细胞分化 |
| 2.2.7 流式细胞术进行细胞周期检测 |
| 2.2.8 硝基四氮唑蓝还原能力测定 |
| 2.3 统计方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 As_2O_3或/和VPA对HL60细胞增殖的影响 |
| 2.4.2 As_2O_3+VPA对HL60细胞形态的影响 |
| 2.4.3 As_2O_3+VPA对HL60细胞CD11b分化抗原影响 |
| 2.4.4 As_2O_3或/和VPA对HL60细胞周期的影响 |
| 2.4.5 As_2O_3+VPA对HL60细胞NBT还原反应阳性细胞的影响 |
| 2.5 实验讨论 |
| 2.6 结论 |
| 附图表 |
| References |
| 第三章 Brd4/c-myc/hTert在VPA促进As_2O_3诱导HL60细胞分化中的作用与分子机制研究 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 材料与方法 |
| 3.2.1 试剂耗材 |
| 3.2.2 实验仪器 |
| 3.2.3 主要试剂和溶液配制 |
| 3.2.4 引物设计 |
| 3.2.5 半定量RT-PCR检测目的基因Brd4及c-myc mRNA的表达 |
| 3.2.6 Western blot检测目的蛋白的表达 |
| 3.2.7 RNAi干扰Brd4 |
| 3.2.8 SiRNA干扰后,流式检测细胞分化的表面标记CD11b: |
| 3.2.9 染色质免疫共沉淀(ChIP)分析 |
| 3.3 统计方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 As_2O_3+VPA对HL60 Brd4和c-myc基因表达的影响 |
| 3.4.2 As_2O_3+VPA对HL60 Brd4和c-myc蛋白表达的影响 |
| 3.4.3 siBrd4干扰HL60细胞的小分子RNA鉴定 |
| 3.4.4 siBrd4对HL60细胞c-myc蛋白表达的影响 |
| 3.4.5 siBrd4与As_2O_3+VPA对HL60细胞分化抗原CD11b表达的协同作用 |
| 3.4.6 ChIP实验检测Brd4与c-myc启动子结合的水平变化 |
| 3.4.7 As_2O_3+VPA诱导分化后c-myc结合hTert启动子水平的变化 |
| 3.5 实验讨论 |
| 3.6 结论 |
| 附图表 |
| References |
| 第四章 As_2O_3+VPA体内抗白血病肿瘤生长的作用 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 材料与方法 |
| 4.2.1 试剂耗材 |
| 4.2.2 实验仪器 |
| 4.2.3 实验动物 |
| 4.2.4 试剂的配制 |
| 4.2.5 As_2O_3+VPA在HL60成瘤小鼠体内的抗白血病作用 |
| 4.2.6 As_2O_3+VPA体内抗白血病作用分子机制的研究 |
| 4.3 统计方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 As_2O_3+VPA在HL60成瘤小鼠体内的抗白血病作用 |
| 4.4.2 As_2O_3+VPA体内抗白血病作用分子机制的研究 |
| 4.4.3 As_2O_3+VPA体内诱导白血病终末分化后凋亡作用 |
| 4.5 实验讨论 |
| 4.6 结论 |
| 附图表 |
| References |
| 第五章 原发性骨髓纤维化转化为真性红细胞增多症一例并文献复习 |
| 5.1 病例报告 |
| 5.2 讨论 |
| 附图表 |
| References |
| 致谢 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 攻读博士期间参与的课题 |
| 攻读博士期间获奖情况 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| 英文文章Ⅰ (已发表) |
| 英文文章Ⅱ (待发表) |
（7）TERT与Par-4相互作用参与2型糖尿病胰岛β细胞凋亡的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 TERT与 Par-4 的直接相互作用 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 第三章 TERT与 Par-4 相互作用参与高糖高脂诱导的胰岛β细胞凋亡的机制研究 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.3 实验结果 |
| 3.4 讨论 |
| 第四章 TERT与Par-4 相互作用参与2 型糖尿病小鼠胰岛β细胞凋亡的机制研究 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.3 实验结果 |
| 4.4 讨论 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述一 Par-4 促凋亡机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 2型糖尿病β细胞凋亡研究进展 |
| 参考文献 |
| 在读期间发表文章 |
| 致谢 |
（8）miR-1182通过靶向hTERT抑制卵巢癌的转移和增殖（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分: miR-1182在卵巢癌组织、细胞中的表达情况及其意义 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第二部分: miR-1182在卵巢癌组织、细胞中靶基因的研究 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 第三部分: 卵巢癌细胞中miR-1182和靶基因hTERT的相关性 |
| 1 前言 |
| 2 实验试剂 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 结论 |
| 第四部分: miR-1182抑制卵巢癌细胞的增殖和转移 |
| 1 前言 |
| 2 实验材料 |
| 3 实验方法 |
| 4 实验结果 |
| 5 讨论 |
| 6 小结 |
| 全文结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表的论文和其他相关成果 |
| 致谢 |
（9）蝙蝠葛碱调控Hedgehog信号通路对胰腺癌相关基因、蛋白影响的实验研究（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献综述 |
| 1. 胰腺癌的研究现状 |
| 1.1 胰腺癌流行病学特点 |
| 1.2 胰腺癌的危险因素 |
| 1.3 胰腺癌的发病机制 |
| 1.4 西医治疗胰腺癌 |
| 1.5 中医药治疗胰腺癌 |
| 2. 蝙蝠葛碱的研究现状 |
| 2.1 蝙蝠葛碱概况 |
| 2.2 蝙蝠葛碱对心脑血管的作用 |
| 2.3 蝙蝠葛碱抗肿瘤研究 |
| 3. Hedgehog信号通路在胰腺癌中的研究现状 |
| 3.1 Hh基因和Hh配体蛋白 |
| 3.2 膜受体 |
| 3.3 核转录因子Gli蛋白家族 |
| 3.4 下游靶基因 |
| 3.5 Hh-Gli信号通路的激活与胰腺癌 |
| 实验部分 |
| 第一部分 蝙蝠葛碱抗胰腺癌体外实验研究 |
| 实验一 蝙蝠葛碱抗胰腺癌BxPC-3细胞活性的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验二 蝙蝠葛碱调控胰腺癌BxPC-3细胞周期及凋亡的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验三 免疫细胞化学法检测Dau对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路主要分子的影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验四 Real-time PCR检测Dau对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路相关基因表达影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验五 Western blot法检测Dau对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路相关蛋白表达影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 第二部分 蝙蝠葛碱抗胰腺癌体内实验研究 |
| 实验一 蝙蝠抗胰腺癌BxPC-3移植瘤活性的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验二 蝙蝠葛碱调控胰腺癌BxPC-3移植瘤细胞周期及凋亡的研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验三 免疫组化法检测Dau对胰腺癌BxPC-3移植瘤Hedgehog信号通路相关因子影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验四 Real-time PCR检测Dau对胰腺癌BxPC-3移植瘤Hedgehog信号通路相关基因表达影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 实验五 Western blot法检测Dau对胰腺癌BxPC-3移植癌Hedgehog信号通路相关蛋白表达影响 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 讨论 |
| 1 蝙蝠葛碱临床应用及前景 |
| 2 瘤株与模型动物的选择 |
| 3 Dau对胰腺癌BxPC-3细胞及裸鼠移植瘤的抑制作用 |
| 4 流式细胞术检测Dau对胰腺癌BxPC-3细胞及裸鼠移植瘤细胞周期及凋亡影响 |
| 5 Dau对胰腺癌BxPC-3细胞及裸鼠移植瘤Hedgehog信号通路主要分子的影响 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 |
| 个人简历 |
| 创新点 |
（10）三氧化二砷抑制腺样囊性癌ACC-2细胞生长、诱导其凋亡的基因表达谱及其分子机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 三氧化二砷对腺样囊性癌ACC-2细胞生长抑制及诱导凋亡作用研究 |
| 1.1 材料与方法 |
| 1.2 结果 |
| 1.3 讨论 |
| 第二章 三氧化二砷诱导人腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡的基因表达谱研究 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.2 结果 |
| 2.3 讨论 |
| 第三章 三氧化二砷诱导腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡过程中凋亡相关基因bcl-2、c-myc的mRNA和蛋白表达的改变 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.2 结果 |
| 3.3 讨论 |
| 第四章 端粒酶hTERT-mRNA表达对三氧化二砷诱导人腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡的影响 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.2 结果 |
| 4.3 讨论 |
| 第五章 细胞线粒体跨膜电位(Δψm)和半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)在三氧化二砷(As_2O_3)诱导腺样囊性癌ACC-2细胞凋亡过程中的作用 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.2 结果 |
| 5.3 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 综述的参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 附录1 缩略词表 |
| 附录2 附图 |
| 致谢 |
四、人类端粒酶(hTERT)与bcl-2、p53、c-myc的关系(综述)（论文参考文献）
- [1]清肝化瘀颗粒对原发性肝癌大鼠的治疗作用及主要成分对肝癌细胞增殖凋亡的影响[D]. 朱晓燃. 北京中医药大学, 2021
- [2]基于单分子方法的i-motif动态结构研究[D]. 高博. 西北农林科技大学, 2021
- [3]hTERC基因检测联合TCT、高危型HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中的应用价值研究[D]. 林艳丽. 郑州大学, 2020(02)
- [4]WSB2促进黑色素瘤增殖及迁移的机制研究[D]. 张一. 昆明医科大学, 2019
- [5]木犀草素抑制乳腺癌细胞生长的功能研究[D]. 蓝欢荣. 浙江大学, 2019
- [6]Brd4/c-myc/hTert分子轴调控在VPA促进As2O3诱导HL60细胞终末分化中的作用机制研究[D]. 郭燕. 山东大学, 2019(09)
- [7]TERT与Par-4相互作用参与2型糖尿病胰岛β细胞凋亡的机制研究[D]. 陈刘. 中国人民解放军陆军军医大学, 2018(03)
- [8]miR-1182通过靶向hTERT抑制卵巢癌的转移和增殖[D]. 侯小赛. 武汉大学, 2018(01)
- [9]蝙蝠葛碱调控Hedgehog信号通路对胰腺癌相关基因、蛋白影响的实验研究[D]. 张英博. 黑龙江中医药大学, 2015(01)
- [10]三氧化二砷抑制腺样囊性癌ACC-2细胞生长、诱导其凋亡的基因表达谱及其分子机制研究[D]. 姜涛. 青岛大学, 2012(12)