一、子宫内膜胚泡黏附时着床点与着床旁组织的分离（论文文献综述）
张爽[1]（2021）在《小鼠子宫内膜胚胎着床相关环状RNA的筛选及作用研究》文中提出目的:胚胎着床是生殖的关键步骤,决定妊娠成功与否,研究其机制将有助于解决诸多问题,如不孕症诊断和治疗、提高辅助生殖成功率以及寻求新生殖调控手段等。环状RNA（circular RNA,circRNA）是一类新发现的呈共价闭合环状的内源性非编码RNA（non-coding RNA,ncRNA）。作为竞争性内源RNA（competing endogenous RNA,ce RNA）,circRNA可以通过互补碱基配对海绵吸附微小RNA（micro RNA,miRNA）,减弱miRNA对靶基因抑制,从而提高靶基因表达。研究表明circRNA在病理、生理过程中扮演着重要的角色,然而它们在胚胎着床中的具体的作用尚不清楚。本研究旨在揭示小鼠妊娠第5天（Day5,D5）胚胎着床点和着床旁的子宫内膜组织circRNA表达谱,筛选出差异表达circRNA,并通过探讨其功能及可能的调控机制,为探寻胚胎着床的机制提供新思路。方法:1.circRNA芯片分析与验证（1）采用Arraystar circRNA芯片分析小鼠妊娠D5胚胎着床点和着床旁子宫内膜组织circRNA的表达。（2）运用RT-qPCR对随机挑选的4个差异表达circRNA进行验证。2.差异表达circRNA的生物信息学分析（1）circRNA芯片分析数据结合课题组前期同一时间点子宫内膜组织RNA-Seq数据,获得差异表达的circRNA、miRNA和mRNA,运用生物信息学方法构建circRNA—miRNA—mRNA负调控网络。（2）差异表达circRNA的亲本基因进行GO（Gene Ontology）功能分析和KEGG（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes）通路分析。（3）circRNA—miRNA—mRNA负调控网络中的基因进行GO功能分析和KEGG通路分析。3.circFoxo3在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用研究（1）以circFoxo3为研究对象,构建小鼠早期妊娠模型、体内人工诱导蜕膜化模型以及子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化模型,利用RT-qPCR分析circFoxo3的表达规律。（2）circFoxo3在子宫内膜基质细胞蜕膜化中的作用:利用过表达质粒载体转染基质细胞上调circFoxo3表达,体外诱导蜕膜化后,应用RT-qPCR和F-actin染色检测细胞中蜕膜化标志分子Hoxa10表达以及细胞形态变化。（3）circFoxo3与下游miRNA—mRNA的预测与验证:采用Target Scan和miRanda数据库预测与circFoxo3具有结合位点的miRNA;采用micro T、Pictar、miRmap、Target Scan数据库预测与miR-138-5p具有结合位点的mRNA,与课题组前期同一时间点子宫内膜组织RNA-Seq数据分析获得的表达显着下调的mRNA取交集,筛选出与miR-138-5p可能具有调控关系的mRNA,利用双荧光素酶报告基因方法验证两者之间的靶向结合。（4）利用过表达质粒载体转染基质细胞上调circFoxo3表达,体外诱导蜕膜化后,利用RT-qPCR和western blot检测细胞中miR-138-5p、Klf11蛋白表达。（5）利用miR-138-5p mimic转染基质细胞上调miR-138-5p表达,体外诱导蜕膜化后,利用western blot检测细胞中Klf11蛋白表达。（6）Klf11在子宫内膜基质细胞蜕膜化中的作用:利用western blot检测子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化后Klf11蛋白的表达;利用过表达质粒载体转染基质细胞上调Klf11表达,体外诱导蜕膜化,应用RT-qPCR和F-actin染色检测细胞中蜕膜化标志分子Hoxa10的表达以及细胞形态变化。结果:1.circRNA芯片分析及验证（1）通过Array circRNA芯片检测,在小鼠妊娠D5胚胎着床点和着床旁子宫内膜组织中共发现176个差异表达的circRNA,其中在着床点组织表达显着上调的circRNA 101个,表达显着下调的circRNA 75个（FC≥1.5,P<0.05）。（2）对4个差异表达的circRNA进行RT-qPCR检测,结果显示circRNA＿008885和circRNA＿013924在着床点组织表达上调而circRNA＿21887和circRNA＿004122在着床点组织表达下调,RT-qPCR结果与芯片结果一致,证实了芯片结果的可靠性。2.差异表达circRNA的生物信息学分析（1）构建的circRNA—miRNA—mRNA负调控网络,包含了21个表达显着下调的circRNA（circRNA＿22444、circRNA＿19529、circRNA＿27282等）、14个表达显着上调的miRNA（miR-17-5p、miR-20a-5p、miR-361-5p等）和79表达显着下调的mRNA（actr8、lad1、sv2b等）。（2）对差异表达circRNA亲本基因进行GO分析和KEGG通路分析。GO功能分析包括生物学过程（Biological process,BP）、分子功能（Molecular fuction,MF）和细胞组成（Cellular component,CC）三个亚组分析,BP最显着富集GO条目包括磷酸化、组蛋白H4脱氧乙酸化、组蛋白H3脱氧等;MF包括蛋白质结合、核苷酸结合、ATP结合等;CC包括细胞质、细胞核、复制叉等。最显着富集的KEGG信号通路包括子宫内膜癌、甲状腺激素信号通路、致心律失常性右室心肌病等。（3）对构建的circRNA—miRNA—mRNA负调控网络中79个基因进行GO分析和KEGG通路分析。BP最显着富集GO条目包括蛋白激酶B活化、线粒体细胞色素C释放的正调节、高密度脂蛋白颗粒应答等;MF包括跨膜受体蛋白酪氨酸激酶活性、磷脂酰肌醇2激酶结合、磷脂转运活性等;CC包括细胞膜整体成分、细胞膜、细胞内膜结合细胞器等。最显着富集的KEGG信号通路包括Rap1信号通路、醛固酮调节的钠再吸收、PI3K-Akt信号通路等。3.circFoxo3在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用研究（1）在小鼠早期妊娠模型中,circFoxo3在妊娠D5、D6、D7子宫内膜着床点的表达显着低于着床旁;在小鼠体内人工诱导蜕膜化模型中,蜕膜诱导侧circFoxo3表达显着低于对照侧;在子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化模型中,诱导蜕膜化后基质细胞中circFoxo3表达显着降低。（2）circFoxo3表达上调抑制子宫内膜基质细胞蜕膜化:利用过表达质粒载体转染上调基质细胞circFoxo3表达,体外诱导蜕膜化后,RT-qPCR检测显示蜕膜化标志分子Hoxa10表达显着降低,F-actin染色观察细胞形态发现细胞蜕膜化受损。（3）circFoxo3与下游miRNA—mRNA的预测与验证:生物信息学预测circFoxo3与miR-138-5p存在结合位点。miR-138-5p与Klf11存在结合位点,双荧光素酶报告基因方法证实两者之间具有靶向结合。（4）利用过表达载体转染基质细胞上调circFoxo3表达,RT-qPCR和western blot结果显示蜕膜化后细胞中miR-138-5p的表达显着降低,而Klf11蛋白表达显着升高。（5）利用miR-138-5p mimic转染基质细胞上调miR-138-5p表达,western blot结果显示蜕膜化后细胞中Klf11蛋白表达显着降低。（6）Klf11表达上调抑制子宫内膜基质细胞蜕膜化:基质细胞体外诱导蜕膜化后,Western blot检测发现细胞中Klf11蛋白表达显着降低。利用过表达质粒载体转染上调基质细胞Klf11表达,体外诱导蜕膜化后,RT-qPCR检测显示细胞中蜕膜化标志分子Hoxa10表达显着降低,F-actin染色观察细胞形态发现细胞蜕膜化受损。结论:小鼠妊娠D5胚胎着床点与着床旁子宫内膜组织呈现差异的circRNA表达谱;circFoxo3参与子宫内膜基质细胞蜕膜化,其机制有待于进一步探讨。
谭淇蔓,徐翰婷,李南燕,刘学庆,何俊琳,丁裕斌,王应雄,高茹菲,陈雪梅[2]（2020）在《生长抑制特异性蛋白1（Gas1）在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用》文中认为该文旨在探讨生长抑制特异性蛋白1（growth arrest specific 1,Gas1）在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律以及其在子宫内膜蜕膜化中的作用。通过免疫组化、Western blot和RT-qPCR检测Gas1在正常妊娠小鼠、假孕小鼠子宫内膜中的表达变化;分别构建体内小鼠子宫人工诱导蜕膜化模型和体外小鼠原代子宫内膜基质细胞人工诱导蜕膜化模型,通过Western blot和RT-qPCR检测Gas1在两种模型中的表达;在分离的小鼠原代子宫内膜基质细胞中过表达Gas1,通过Western blot、RT-qPCR和流式细胞术等方法检测其对蜕膜化、增殖和凋亡的影响;通过Western blot检测Gas1在人正常早孕蜕膜组织和自然流产蜕膜组织中的表达。结果表明,Gas1在小鼠孕D5、D6、D7的着床点表达显着低于着床旁;在体内和体外人工诱导蜕膜化模型中,Gas1在诱导组的表达明显低于非诱导组;而Gas1的上调则可通过影响细胞增殖和凋亡抑制蜕膜化。此外,Gas1在自然流产患者子宫内膜组织中的表达明显高于正常早孕组。该研究初步表明了Gas1可能通过介导细胞增殖和凋亡,影响小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化,从而在调控胚胎着床过程中起重要作用。
覃佳文[3]（2018）在《Smad7在小鼠早期妊娠子宫中的表达及调节》文中研究指明胚胎着床是哺乳动物妊娠成功建立的关键步骤。随着胚胎在子宫腔上皮的粘附,子宫基质细胞开始由类固醇激素介导的蜕膜化过程,具体表现为子宫基质细胞的增殖与分化。转化生长因子?（TGFβ）信号通路在很多发育过程中起作用。Smad7作为TGFβ信号通路中的抑制分子,在肿瘤发生及炎症反应过程中均起重要作用。到目前为止,Smad7在小鼠早期妊娠子宫中的表达与调控尚未见报道。本研究利用各种小鼠模型,检测了在小鼠早期妊娠、假孕、延迟激活着床及人工诱导蜕膜化等条件下Smad7 mRNA的时空表达。Smad7在正常妊娠小鼠子宫中随时间的不同表达位置有所不同,在第1天时于腔上皮中有明显的表达,随后在腔上皮下基质中表达并逐渐减弱,在第4天时信号微弱,但在第5天着床胚胎周围的基质细胞中表达强烈,随后向次级蜕膜区推移,于第8天时蜕膜区与胚胎中都有强烈的信号。与延迟着床相比,胚胎着床激活后Smad7信号在着床胚胎周围的基质细胞中表达强烈,与正常妊娠第5天小鼠子宫中表达位置相近;与对照组相比,人工诱导蜕膜化的基质细胞中有明显的信号显现。雌激素与孕酮对Smad7的表达有微弱的刺激效果。雌激素可以刺激Smad7在子宫的上皮细胞与基质细胞中微弱表达,而孕酮刺激Smad7主要在腔上皮细胞中表达。在小鼠基质细胞中,HB-EGF可以促进Smad7表达量的增加。总之,我们的结果表明,Smad7可能在胚胎着床与蜕膜化过程中起一定作用。
叶亮[4]（2018）在《分化抑制因子3（Id3）及其相关调控因子在胚胎植入中的作用研究》文中进行了进一步梳理胚胎植入是指从卵子受精到胚泡着床的一系列细胞或分子生物学事件,是一个极其复杂的生理过程,主要包括游离胚泡定位、黏附和侵入以及胎盘形成,是一个连续的动力生物学现象,其中任何一个过程的缺陷都会导致不良的妊娠结局。子宫内膜蜕膜化是指子宫内膜基质细胞在胚胎发生黏附反应后、受到蜕膜化诱导因子的刺激,增生并分化形成的一种特殊组织,它对于妊娠的建立和维持具有至关重要作用。已有研究表明约20%的妊娠失败与基质细胞蜕膜化异常有关。子宫内膜基质细胞蜕膜化过程中,母体子宫内膜受到一系列基因及信号通路的调控,从而基质细胞发生广泛的增殖与分化,以适应胚胎的生长。而分化抑制因子3（Id3）作为细胞转录因子,在生物体内广泛表达,具有抑制分化、促进增殖的作用。课题组前期转录组测序结果显示,Id3在人工诱导蜕膜化组织中的表达较对照组显着降低,这提示Id3基因表达的降低可能与子宫内膜蜕膜化的进展有密切联系。先已知对多种细胞分化起关键调控作用的锌指蛋白转录因子1（Prdm1）与Id3相互作用参与多种生物学过程,但是Id3在小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用以及在胚胎植入过程中与Prdm1的相互作用均不清楚。因此本研究初步探究了Id3和Prdm1基因在早期妊娠和人工诱导蜕膜化模型小鼠的子宫内膜中的表达模式,探索了Id3在小鼠子宫内膜基质细胞蜕膜化过程中的作用,以及借助体外人工诱导蜕膜化模型验证Prdm1-Id3信号对子宫内膜基质细胞蜕膜化的调控作用,以初步阐明其对胚胎植入的影响,所取得研究结果如下:1.Id3在小鼠早期妊娠模型中的表达模式应用免疫组织化学、原位杂交、Western blot以及RT-qPCR检测Id3在早孕小鼠模型中的表达,结果显示Id3高表达于子宫内膜容受期形成阶段（孕第四天）,在胚胎着床后基质细胞发生分化的蜕膜化子宫中表达较低,即在D5和D6着床旁的表达明显高于着床点。检测Id3在假孕小鼠模型中的表达规律,其表达与小鼠正常妊娠早孕期的表达模式相似,提示Id3在早孕期小鼠子宫内膜的时空性表达并不依靠胚胎信号。在小鼠人工诱导蜕膜化模型中,Id3的表达在人工诱导蜕膜化后有所降低,进一步提示Id3的表达下调与蜕膜化发生相关。结果表明Id3可能参与子宫内膜细胞蜕膜化进程。2.Id3对子宫内膜基质细胞蜕膜化的调控作用分离小鼠子宫内膜基质细胞,进行体外人工诱导蜕膜化以及过表达Id3基因,发现体外人工诱导蜕膜化可抑制Id3的表达,且过表达Id3可以显着抑制体外子宫内膜基质细胞蜕膜化的过程。3.Prdm1在小鼠早期妊娠模型的表达模式应用免疫组织化学、Western blot以及RT-qPCR检测Prdm1在早孕小鼠模型中的表达,Prdm1在D1主要表达于腺上皮和腔上皮,D4表达于基质细胞,在D5着床点主要表达于子宫内膜初级蜕膜区（PDZ）,在D6着床点和D8的表达逐渐转向次级蜕膜区（SDZ）。且Prdm1的表达在D5、D6表达高于其它天,且在着床点的表达高于着床旁。在小鼠人工诱导蜕膜化模型中,Prdm1的表达在人工诱导蜕膜化升高,提示Prdm1的表达上调与蜕膜化发生相关。结果表明Prdm1可能参与子宫基质细胞诱导蜕膜化过程。4.Prdm1对子宫内膜基质细胞蜕膜化的调控作用分离小鼠子宫内膜基质细胞,进行体外人工诱导蜕膜化以及si RNA干扰Prdm1基因,发现Prdm1在体外人工诱导蜕膜化后表达升高,且干扰Prdm1可以显着降低基质细胞的增殖和分化来影响蜕膜化进程。此外,抑制Prdm1的表达可以促进Id3表达上调进而抑制蜕膜化的进程。我们的研究初步发现Id3可以抑制蜕膜化的过程;抑制Prdm1的表达可促进Id3的表达上调进而抑制蜕膜化的进程。综上所述,Id3可能参与调节子宫内膜基质细胞蜕膜化过程。
刘春艳[5]（2017）在《M2型丙酮酸激酶在早孕小鼠子宫内膜的表达》文中研究表明目的成功的胚胎植入是正常妊娠的先决条件。胚泡植入子宫内膜的过程涉及多种激素、细胞因子、粘附分子、免疫系统等的协同作用,与代谢途径也密切相关。糖代谢是三大物质代谢中重要组成部分,组织细胞在有氧条件下进行糖酵解的现象称为瓦氏效应（Warburg effect）。M2型丙酮酸激酶（pyruvate kinase M2,Pkm2）是糖酵解过程中一个标志性的代谢酶,在糖酵解过程中发挥重要作用。已有研究表明在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化过程中存在有氧糖酵解这一特殊现象,课题组前期基因芯片筛查结果初步显示Pkm2在早孕D5小鼠子宫内膜的表达呈现着床点高于着床旁的趋势。但是,Pkm2在早孕小鼠子宫内膜的表达规律、与子宫内膜蜕膜化的关系并不清楚。因此,本研究初步探讨Pkm2在早孕小鼠子宫内膜的表达规律,为后续进一步探讨其在早孕小鼠子宫内膜中的作用提供依据。方法（1）建立正常妊娠小鼠模型,分别收集孕D1、D4、D5、D6、D7小鼠子宫内膜组织,采用Real-time PCR、免疫印迹法和免疫组织化学方法,检测Pkm2在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律。（2）建立假孕小鼠模型,分别收集假孕PD1、PD4、PD5、PD6、PD7天小鼠子宫内膜组织,采用Real-time PCR、免疫印迹法和免疫组织化学方法,检测Pkm2在假孕小鼠子宫内膜中的表达规律。（3）建立体内人工诱导蜕膜化模型,分别收集诱导侧和未诱导侧小鼠子宫,采用Real-time PCR、免疫印迹法和免疫组织化学方法,检测Pkm2在诱导侧和未诱导侧子宫内膜的表达。（4）建立体外人工诱导蜕膜化模型,分离原代小鼠子宫内膜基质细胞,采用雌、孕激素对分离的原代小鼠子宫内膜基质细胞诱导蜕膜化。采用免疫荧光检测细胞Vimentin蛋白表达的方法鉴定分离的子宫内膜基质细胞纯度,采用Real-time PCR、免疫印迹法方法检测Pkm2在子宫内膜基质细胞诱导蜕膜化后及未诱导蜕膜化子宫内膜基质细胞的表达。结果（1）在早孕小鼠子宫内膜组织中,Pkm2 m RNA及蛋白的表达在孕D6达到高峰,孕D6和孕D7的表达明显高于孕D1;孕D5、D6、D7天着床点子宫内膜Pkm2 m RNA和蛋白的表达均显着高于着床旁子宫内膜;在孕D1、D4 Pkm2蛋白主要表达于子宫内膜的腔上皮和腺上皮,部分基质细胞也有表达;孕D5、D6、D7着床旁子宫内膜,Pkm2蛋白在子宫内膜基质细胞、腺上皮和腔上皮均有表达,且随着妊娠天数的增加表达有逐渐增强的趋势;孕D5、D6、D7着床点子宫内膜,Pkm2蛋白主要表达于胚胎和蜕膜区,腔上皮未见明显表达。（2）在假孕小鼠子宫内膜组织中,Pkm2 m RNA从假孕PD6开始有明显增强,PD6与PD7的表达相当,且表达量明显高于PD1;Pkm2蛋白的表达每组间无显着差异;PD1 Pkm2蛋白主要表达于子宫内膜腔上皮和腺上皮,基质细胞表达较少,PD5、PD6、PD7 Pkm2蛋白主要在子宫内膜的腺上皮表达,腔上皮及基质细胞表达减少。（3）在体内人工诱导蜕膜化模型中,Pkm2 m RNA及蛋白的表达在诱导侧子宫内膜的表达明显高于未诱导侧;Pkm2蛋白在诱导侧子宫内膜广泛表达,在未诱导侧子宫内膜主要表达于腔上皮和腺上皮,少量表达于基质细胞。（4）分离培养小鼠子宫内膜基质细胞,并用E2+P4诱导其发生蜕膜化,Pkm2 m RNA及蛋白在子宫内膜基质细胞诱导蜕膜化后的表达明显高于未诱导蜕膜化的子宫内膜基质细胞的表达。结论（1）Pkm2在早孕小鼠子宫内膜呈规律表达。（2）Pkm2可能参与早孕小鼠子宫内膜蜕膜化。
黄龙贤[6]（2016）在《Mmu-miR-100基因在早孕小鼠胚胎着床中子宫内膜的表达规律》文中提出胚胎着床是一个非常复杂的生物过程,是多种因素协同作用的结果。胚胎着床的一个重要特征即是子宫内膜发生蜕膜化改变,该过程受到多种因子的调控。其中,MicroRNA差异性的表达在胚胎着床的精细调控起着重要作用。课题组前期通过芯片筛查发现mmu-miR-100在胚胎植入第5天着床点和着床旁存在明显的差异。本文以mmu-miR-100为研究对象,探讨其在早孕小鼠子宫内膜中的表达规律及在胚胎着床中的作用,为不育症的诊断和治疗提供新的思路。方法1.本实验采用荧光定量PCR方法验证芯片结果,用原位杂交方法定位妊娠早期d1,d4,d5及d6小鼠子宫内膜mmu-miR-100的表达水平。2.取早孕小鼠子宫内膜基质细胞进行原代培养,分别用mmu-miR-100模拟物和抑制剂对基质细胞进行转染。3.流式细胞术检测mmu-miR-100对小鼠子宫内膜基质细周期和细胞凋亡的影响。4.运用基因预测数据库检索mmu-miR-100调控的靶基因。实验结果1.定量PCR结果发现mmu-miR-100的含量在妊娠第5天和第6天胚胎着床旁组织的含量高于着床点（P<0.05）,与我们前期实验组的芯片结果保持一致。2.原位杂交的结果显示mmu-miR-100在妊娠第5天主要表达在基质细胞,腔上皮、腺上皮较少表达。第6天基质细胞广泛表达,且主要表达在次级蜕膜化区。3.体外培养基质细胞,转染模拟物后,流式细胞术检测结果表明细胞凋亡率明显增加;而细胞增殖无变化。4.结合生物信息学分析和前期的实验结果,mmu-miR-100作用的靶基因有IGF2,PLK1,mTOR,FKBP51,FRAP1等。结论1.mmu-miR-100在早孕小鼠胚胎着床d5,d6着床点和着床旁组织存在着明显的差异表达,且着床点主要表达于子宫内膜蜕膜区。2.mmu-miR-100通过影响胚胎着床过程中子宫内膜基质细胞的凋亡,调控基质细胞蜕膜化。
沈炼桔[7]（2013）在《雌孕激素对miRNAs调控的初探以及mmu-miR-200a过表达对胚胎着床的影响》文中研究指明第一部分雌孕激素对miRNAs调控的初探目的：妊娠的成功依赖于一个健康的子宫，能接受胚泡的植入并支持胎儿的发育。子宫是一个内分泌器官，它能对卵巢所分泌的雌孕激素作出响应，雌孕激素通过与其相应的受体ER和PR结合从而激活下游的靶基因。雌孕激素信号已被证实对于胚泡植入至关重要。MicroRNAs（miRNAs）可以调控基因的表达，并有研究证实miRNAs参与了胚泡植入的过程，但是对于谁来调控miRNAs的表达还知之甚少。由于许多参与植入的关键基因受到雌孕激素的调控，那么雌孕激素是否可以通过调控miRNAs表达进而影响胚泡植入的过程，这是本研究的目的。方法：收取小鼠妊娠第1天（D1）和第6天（D6）子宫内膜组织以模拟雌孕激素调节模型（妊娠D1是E2的高峰期，P4水平低；妊娠D6是P4的高峰期，E2水平低）。提取总RNA后进行microRNA测序，所得到的结果进行生物信息学分析。结果：miRNAs测序发现，妊娠D6与D1相比，有6个miRNA表达上调2倍以上，73个miRNA表达下调2倍以上。通过生物信息学分析，筛选出差异表达miRNAs的靶基因及其所参与的信号通路，这些miRNAs所调控的靶基因多参与代谢、MAPK、紧密连接等信号通路。结论：本研究结果初步反映了在小鼠子宫内膜组织中，miRNAs的表达受到雌孕激素的调控。通过生物信息学分析发现，在妊娠D1和D6中存在差异表达的miRNAs，其调控的靶基因所参与的信号通路均在植入过程中发挥重要作用，提示miRNAs在胚胎着床过程中起一定的调控作用。第二部分mmu-miR-200a过表达对胚胎着床的影响目的：胚泡成功植入需要子宫进入接受态以及激活的囊胚，大量的基因、细胞因子以及其他分子都参与了这一过程。众所周知，MicroRNAs（miRNAs）可以调控基因的表达，而且有研究表明miRNAs参与了调控胚泡植入的过程，但调控此过程的具体miRNA还研究尚少，这值得我们去探索。通过前期研究结果发现，mmu-miR-200a在妊娠D6，即孕激素高峰时表达下调，而且在植入前后具有表达差异，也有研究证实miR-200a在多种子宫内膜疾病（如子宫内膜癌和子宫内膜异位）的表达差异明显。因此，本研究旨在探索mmu-miR-200a在胚泡植入过程中所起的作用及其靶基因，为深入了解胚泡植入的分子机制提供基础，并有可能为治疗女性不孕不育以及开发避孕药提供新的思路。方法：Real Time-PCR检测mmu-miR-200a在妊娠D4、D5和D6子宫内膜以及D5着床点和着床点旁的表达水平，原位杂交检测mmu-miR-200a在妊娠D4、D5以及D6子宫中的表达模式。通过生物信息学分析、基质细胞原代培养及转染和荧光强度分析确认其靶基因为PTEN，免疫组化确定PTEN在小鼠植入过程子宫中的表达定位，宫角注射mmu-miR-200a过表达慢病毒观察植入情况。最后，利用流式细胞术检测转染mmu-miR-200a的对照、模拟物、抑制物后，基质细胞的凋亡状况。结果:应用Real Time-PCR发现在妊娠D5子宫内膜着床点及其旁组织表达差异明显，且在着床点的表达明显低于着床点旁。mmu-miR-200a的mRNA表达水平在妊娠D4、D5、D6子宫内膜中依次下降，且主要表达在基质细胞中，腔上皮及腺上皮细胞表达较少。mmu-miR-200a的靶基因PTEN的表达定位与其相同，但表达水平模式正好相反。宫角注射mmu-miR-200a过表达慢病毒发现胚胎着床率明显下降。流式细胞术检测到转染mmu-miR-200a抑制物后，基质细胞凋亡明显增加，此时PTEN蛋白表达上调；转染mmu-miR-200a模拟物后，基质细胞凋亡明显减少，PTEN蛋白表达下调。结论：研究发现mmu-miR-200a过表达会导致小鼠胚泡植入率的下降。根据mmu-miR-200a与其靶基因PTEN的表达模式以及转染mmu-miR-200a模拟物和抑制物后基质细胞凋亡率以及PTEN的蛋白表达水平，我们相信mmu-miR-200a是通过PTEN调控基质细胞的适度增殖以确保植入正常进行。
彭良玉,杨菁,徐望明,李星,余楠,莫有敏,江兴[8]（2013）在《超促排卵对galectin-1在小鼠子宫内膜围着床期表达的影响》文中提出目的观察超促排卵药物（PMSG+HCG）对小鼠子宫内膜组织围着床期半乳糖凝集素（galec-tin）-1表达的变化,探讨galectin-1在超促排卵下对胚泡着床过程中所起的作用。方法将60只雌性小鼠随机分为两组,对照组:生理盐水组;实验组:促排卵组。采用免疫组织化学（IHC）SABC法检测小鼠围着床期子宫内膜galectin-1蛋白的表达;用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）法检测小鼠围着床期子宫内膜galectin-1mRNA的表达。结果 IHC结果显示,galectin-1分布于小鼠子宫内膜上的腔上皮、腺上皮及基质细胞中;超促排卵组小鼠子宫内膜上galectin-1表达水平显着低于对照组,另一方面,两组结果均显示越接近着床期,子宫内膜上galectin-1表达水平越高（P<0.05）。结论 galectin-1参与到胚泡着床这一重要生命活动过程,超促排卵抑制galectin-1在小鼠子宫内膜上的表达。
邵如月,刘学庆,丁裕斌,陈雪梅,高茹菲,王应雄,何俊琳[9]（2012）在《IK细胞因子在小鼠早孕期子宫内膜的表达规律及其在胚胎着床中的作用》文中研究表明通过Real-time PCR、Western blot及免疫组织化学方法分析了IK细胞因子（IK cytokine）在早孕小鼠（妊娠D1D7）子宫内膜中的表达规律及宫角注射IK细胞因子反义寡聚脱氧核苷酸后对胚胎着床的影响。结果显示,IK细胞因子mRNA表达在D1D4逐渐升高,于D4达到高峰（P<0.05）;Western blot和免疫组织化学结果与Real-time PCR结果基本一致,其蛋白表达在D1D5逐渐升高,于D5达到高峰（P<0.05）;IK细胞因子在D5胚胎着床点的表达显着高于着床旁组织;假孕小鼠子宫内膜IK细胞因子蛋白表达明显低于正常妊娠,且整个假孕过程中没有表达高峰;宫角注射IK细胞因子反义寡聚脱氧核苷酸后24 h和48 h（即D4和D5）子宫内膜IK细胞因子表达明显受到抑制,MHCⅡ抗原表达增强,且胚胎着床数量明显减少（P<0.05）,提示IK细胞因子在胚胎着床中发挥着重要作用。
徐倩[10]（2010）在《骨形态发生蛋白-7（BMP-7）在小鼠蜕膜细胞的表达及功能研究》文中研究说明目的:胚胎着床是胎生哺乳动物及人类生殖生理的重要环节,是母体子宫与胚胎同步发育、在特定时期即“着床窗”开放期间精确调节、快速完成的生理现象。妊娠需要子宫组织发生广泛的重建,子宫内膜细胞生长和分化,即发生蜕膜化。子宫内膜的蜕膜化过程对于成功的着床和妊娠的维持是必需的。蜕膜化过程涉及黏附分子、蛋白水解酶、生长因子、细胞因子、血管活性因子以及多种基因的相互作用和调节。已有研究表明BMPs家族在小鼠胚胎发育过程中都有表达,为进一步研究其家族中BMP-7在小鼠子宫中的表达规律和作用,本实验采用细胞原代培养、荧光定量PCR、免疫组织化学、免疫细胞化学、Western blotting等方法从mRNA和蛋白水平检测BMP-7在妊娠小鼠子宫中的表达,探索其在子宫内膜蜕膜化过程中的作用。方法: 1.RT-PCR和免疫组织化学技术分别观察BMP-7的mRNA和蛋白在妊娠第5-8日小鼠子宫中的表达情况;2.原代培养小鼠子宫基质细胞,用孕酮、雌二醇和cAMP诱导蜕膜化,并在诱导蜕膜化的同时分别加入1.0ng/ml、10ng/ml、100ng/ml BMP-7重组腺病毒,于24h、48h、72h、96h检测催乳素的表达;3.去卵巢小鼠随机分3组,分别皮下注射芝麻油（0.1ml/只）、孕酮（2.0mg/只）、RU486（2.0mg/只）+孕酮（2.0mg/只）,于注射后0h、6h、12h、24h处死小鼠收集子宫,提取子宫RNA和总蛋白,荧光定量PCR、Western blotting检测BMP-7的表达情况。结果:1.妊娠第5-8日,BMP-7 mRNA在小鼠子宫着床位点的表达高于着床旁组织（P<0.01）,且在着床点的表达随着妊娠天数的增加逐渐增强（P<0.05）。妊娠第5日、第6日,BMP-7蛋白分别表达于植入胚胎周围的基质细胞和初级蜕膜带;第7日、第8日,主要表达于次级蜕膜带以及植入位点系膜侧基质细胞。2.在小鼠子宫基质细胞的蜕膜化过程中,BMP-7重组腺病毒组催乳素的mRNA和蛋白表达均显着增加（P<0.01）,其中10ng/ml组增加最明显（P<0.01）。3.去卵巢小鼠模型研究显示:孕酮上调了小鼠子宫组织BMP-7的表达（P<0.01）,孕酮受体拮抗剂RU486能有效阻断孕酮对BMP-7的上调作用（P<0.05）结论:BMP-7基因在小鼠子宫内的表达受孕酮调控,具有促进小鼠子宫内膜蜕膜化的效应。
二、子宫内膜胚泡黏附时着床点与着床旁组织的分离（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、子宫内膜胚泡黏附时着床点与着床旁组织的分离（论文提纲范文）
（1）小鼠子宫内膜胚胎着床相关环状RNA的筛选及作用研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 环状RNA在生殖和围产领域的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士期间发表文章 |
（2）生长抑制特异性蛋白1（Gas1）在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用（论文提纲范文）
| 1 材料和方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.1.1 动物 |
| 1.1.2 试剂 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 动物模型建立和组织收取 |
| 1.2.2 免疫组织化学 |
| 1.2.3 Western blot |
| 1.2.4 RT-qPCR |
| 1.2.5 小鼠原代子宫内膜基质细胞分离和人工诱导蜕膜化 |
| 1.2.6 免疫荧光 |
| 1.2.7 质粒转染 |
| 1.2.8 流式细胞术 |
| 1.2.9 统计分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 Gas1在早孕小鼠子宫内膜的表达 |
| 2.2 Gas1在假孕小鼠子宫内膜的表达 |
| 2.3 Gas1在人工诱导小鼠子宫内膜蜕膜化模型中的表达 |
| 2.4 Gas1在体外诱导蜕膜化的小鼠子宫内膜基质细胞中的表达 |
| 2.5 过表达Gas1抑制小鼠子宫内膜基质细胞的蜕膜化 |
| 2.6 Gas1在人子宫内膜的表达 |
| 3 讨论 |
（3）Smad7在小鼠早期妊娠子宫中的表达及调节（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 1 前言 |
| 1.1 生殖与着床 |
| 1.2 类固醇激素对妊娠的影响 |
| 1.3 胚胎孵化与细胞因子 |
| 1.4 白血病抑制因子在胚胎着床的作用 |
| 1.5 蜕膜化 |
| 1.6 TGF-β与Smad家族 |
| 1.6.1 TGF-β |
| 1.6.2 TGFβ经典通路与Smad家族 |
| 1.7 Smad7 |
| 1.7.1 Smad7与肿瘤发生 |
| 1.7.2 Smad7与肾脏炎症 |
| 1.7.3 Smad7与生殖发育 |
| 1.8 本研究的目的和意义 |
| 2 材料方法 |
| 2.1 实验动物 |
| 2.2 实验材料收集 |
| 2.3 动物模型建立 |
| 2.3.1 早期妊娠 |
| 2.3.2 假孕 |
| 2.3.3 人工诱导蜕膜化 |
| 2.3.4 延迟着床与激活 |
| 2.3.5 类固醇激素处理模型 |
| 2.4 原位杂交探针制备 |
| 2.4.1 菌种与主要试剂 |
| 2.4.2 PCR引物设计 |
| 2.5 总RNA提取 |
| 2.6 RNA反转录成cDNA |
| 2.7 PCR扩增 |
| 2.8 PCR产物凝胶电泳 |
| 2.9 PCR产物回收 |
| 2.10 连接PCR产物与pGEM-T载体 |
| 2.11 重组质粒的转化与鉴定 |
| 2.12 阳性质粒的提取 |
| 2.13 目的片段扩增与回收提纯 |
| 2.14 地高辛标记cDNA探针 |
| 2.15 原位杂交 |
| 2.15.1 相关用品准备 |
| 2.15.2 冰冻切片 |
| 2.15.3 原位杂交步骤 |
| 2.16 子宫基质细胞分离培养 |
| 2.16.1 细胞培养准备工作 |
| 2.16.2 子宫基质细胞原代培养 |
| 2.17 细胞处理 |
| 2.17.1 体外蜕膜化处理 |
| 2.18 RealtimePCR |
| 2.19 数据分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 Smad7原位杂交探针的制备 |
| 3.2 Smad7在早期妊娠子宫中的表达 |
| 3.3 Smad7在假孕子宫中的表达 |
| 3.4 Smad7在延迟着床与激活子宫中的表达 |
| 3.5 Smad7在人工诱导蜕膜化模型中的表达 |
| 3.6 类固醇激素对Smad7表达的影响 |
| 3.7 基质细胞中Smad7表达的调节 |
| 3.7.1 体外诱导蜕膜化对Smad7表达的调节 |
| 3.7.2 HB-EGF处理小鼠基质细胞 |
| 4 讨论 |
| 4.1 Smad7在小鼠蜕膜化中的表达与调节 |
| 4.2 雌激素及孕酮对Smad7调节 |
| 4.3 HB-EGF对Smad7表达的调节 |
| 5 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
（4）分化抑制因子3（Id3）及其相关调控因子在胚胎植入中的作用研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
（5）M2型丙酮酸激酶在早孕小鼠子宫内膜的表达（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 材料和方法 |
| 1.1 实验动物模型的建立及材料收集 |
| 1.2 主要仪器和耗材 |
| 1.3 主要试剂 |
| 1.4 方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 Pkm2在早孕小鼠子宫内膜的表达情况 |
| 2.2 Pkm2在假孕小鼠子宫内膜的表达情况 |
| 2.3 Pkm2在体内人工诱导蜕膜化模型中小鼠子宫内膜的表达情况 |
| 2.4 Pkm2在子宫内膜基质细胞及蜕膜细胞中的表达 |
| 3 讨论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 |
（6）Mmu-miR-100基因在早孕小鼠胚胎着床中子宫内膜的表达规律（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 1 实验材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 全文小结与展望 |
| 全文小结 |
| 展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 硕士学位期间发表的论文 |
（7）雌孕激素对miRNAs调控的初探以及mmu-miR-200a过表达对胚胎着床的影响（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一部分 雌孕激素对 miRNAs 调控的初探 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 Mmu-miR-200a 过表达对胚胎着床的影响 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 全文总结与展望 |
| 参考文献 |
| 文献综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表学术论文情况 |
| 攻读博士学位期间参加科研项目情况 |
（8）超促排卵对galectin-1在小鼠子宫内膜围着床期表达的影响（论文提纲范文）
| 材料与方法 |
| 一、实验动物 |
| 二、动物模型建立 |
| 三、组织获取与贮存 |
| 四、小鼠围着床期子宫内膜galectin-1蛋白表达的测定 |
| 五、小鼠围着床期子宫内膜galectin-1 mRNA表达的测定 |
| 六、统计学分析 |
| 结 果 |
| 一、超促排卵对galcetin-1在子宫内膜上的蛋白表达的影响 |
| 二、超促排卵对galcetin-1在子宫内膜上的mRNA表达的影响 |
| 1. 子宫内膜上galectin-1经逆转录扩增的结果: |
| 2. 两组小鼠子宫内膜上galectin-1mRNA表达水平的结果 (表2) : |
| 讨 论 |
（9）IK细胞因子在小鼠早孕期子宫内膜的表达规律及其在胚胎着床中的作用（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 方法 |
| 1.2.1 正常妊娠小鼠子宫内膜IK细胞因子表达分析 |
| 1.2.2 IK细胞因子寡聚脱氧核苷酸子宫角注射 |
| 1.3 统计学分析 |
| 2 结果 |
| 2.1 正常妊娠小鼠子宫内膜组织IK细胞因子m RNA的表达 |
| 2.2 正常妊娠小鼠子宫内膜组织IK细胞因子West-ern blot分析 |
| 2.3 正常妊娠小鼠子宫内膜组织IK细胞因子免疫组织化学分析 |
| 2.4 正常妊娠小鼠子宫内膜胚胎着床点和着床旁组织IK细胞因子蛋白质的表达 |
| 2.5 假孕小鼠子宫内膜组织IK细胞因子的表达 |
| 2.6 IK细胞因子反义寡聚脱氧核苷酸对IK细胞因子表达的抑制作用 |
| 2.7 IK细胞因子反义寡聚脱氧核苷酸对小鼠胚胎着床的影响 |
| 2.8 IK cytokine A-ODNs对早孕小鼠子宫内膜主要组织相容性复合体II (MHCII) 抗原表达的影响 |
| 3 讨论 |
（10）骨形态发生蛋白-7（BMP-7）在小鼠蜕膜细胞的表达及功能研究（论文提纲范文）
| 英汉缩略语名词对照 |
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一部分 BMP-7 在妊娠小鼠子宫内膜的表达 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 BMP-7 在小鼠子宫蜕膜细胞中的表达及作用探讨 |
| 1 材料与方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分 BMP-7 基因表达的调控 |
| 1 材料和方法 |
| 2 结果 |
| 3 讨论 |
| 参考文献 |
| 总结与展望 |
| 文献综述 骨形态发生蛋白研究进展 |
| 致谢 |
| 攻读硕士期间发表文章及参加会议 |
四、子宫内膜胚泡黏附时着床点与着床旁组织的分离（论文参考文献）
- [1]小鼠子宫内膜胚胎着床相关环状RNA的筛选及作用研究[D]. 张爽. 重庆医科大学, 2021(01)
- [2]生长抑制特异性蛋白1（Gas1）在早孕小鼠子宫内膜蜕膜化中的作用[J]. 谭淇蔓,徐翰婷,李南燕,刘学庆,何俊琳,丁裕斌,王应雄,高茹菲,陈雪梅. 中国细胞生物学学报, 2020(12)
- [3]Smad7在小鼠早期妊娠子宫中的表达及调节[D]. 覃佳文. 华南农业大学, 2018(08)
- [4]分化抑制因子3（Id3）及其相关调控因子在胚胎植入中的作用研究[D]. 叶亮. 重庆医科大学, 2018(01)
- [5]M2型丙酮酸激酶在早孕小鼠子宫内膜的表达[D]. 刘春艳. 重庆医科大学, 2017(02)
- [6]Mmu-miR-100基因在早孕小鼠胚胎着床中子宫内膜的表达规律[D]. 黄龙贤. 重庆医科大学, 2016(01)
- [7]雌孕激素对miRNAs调控的初探以及mmu-miR-200a过表达对胚胎着床的影响[D]. 沈炼桔. 重庆医科大学, 2013(03)
- [8]超促排卵对galectin-1在小鼠子宫内膜围着床期表达的影响[J]. 彭良玉,杨菁,徐望明,李星,余楠,莫有敏,江兴. 中华临床医师杂志(电子版), 2013(02)
- [9]IK细胞因子在小鼠早孕期子宫内膜的表达规律及其在胚胎着床中的作用[J]. 邵如月,刘学庆,丁裕斌,陈雪梅,高茹菲,王应雄,何俊琳. 中国细胞生物学学报, 2012(05)
- [10]骨形态发生蛋白-7（BMP-7）在小鼠蜕膜细胞的表达及功能研究[D]. 徐倩. 重庆医科大学, 2010(05)