一、血小板源生长因子和脂多糖对吸烟大鼠小气道平滑肌细胞凋亡的影响（论文文献综述）
秦一冰[1]（2021）在《补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究》文中研究说明目的:通过临床研究观察补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的有效性及安全性,利用网络药理学探索其治疗机制及主要通路,通过动物实验予以验证。材料与方法:1.补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究本研究采用前瞻性、随机、双盲、对照的研究方法,观察2019年6月—2020年08月就诊于辽宁中医药大学附属医院门诊及住院部的慢阻肺合并肺动脉高压（气虚血瘀证）的患者。纳入病例67人,随机分为治疗组和对照组,治疗组予补阳还五汤颗粒剂,对照组予形状、气味、外观与治疗组颗粒剂相同的补阳还五汤模拟颗粒剂,两组均根据患者实际病情联合氧疗、抗感染治疗、利尿剂、抗凝等治疗,疗程4周,第12周随访。设置肺功能和超声心动图作为筛选指标,肺功能、超声心动图、中医证候总积分、单项症状评分、慢阻肺CAT评分、6分钟步行试验、Borg量表、BODE指数评分、血气分析、NT-pro BNP、D-二聚体、纤维蛋白原为有效性观测指标,对补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的有效性进行评价,记录整个研究过程中出现的不良事件观察药物的安全性,对本研究患者的依从性和安全性进行评价。2.基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制通过TCMSP或BATMAN-TCM数据库获得补阳还五汤的活性成分及靶点,Gene Cards数据库获取慢阻肺和肺动脉高压的疾病靶点,提取交叉靶点作为慢阻肺合并肺动脉高压的疾病靶点,将药物靶点与疾病靶点进行映射,构建蛋白相互作用PPI网络,进行基因GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,筛选主要的通路。3.基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响3.1实验一补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究将大鼠随机分为空白组、模型组、中药组、西药组和中西医结合组,适应性喂养一周后将除空白组外的其余四组采用脂多糖、烟熏及低氧的方式造慢阻肺合并肺动脉高压大鼠模型,采用边造模边给药的方式进行实验。中药组予13.02g/（kg·d）补阳还五汤灌胃;西药组予12.6ug/（kg·d）贝前列素钠片灌胃;中西医结合组予13.02g/（kg·d）补阳还五汤+12.6ug/（kg·d）贝前列素钠片灌胃;三组均配置成2ml的药物溶液;正常组和模型组予等体积的生理盐水进行灌胃。造模、灌胃4w后,检测大鼠平均肺动脉压力（m PAP）、右心肥厚指数（RV/LV+S）、HE染色并观察肺血管管壁厚度/血管直径百分比（WT%）和血管壁面积/总血管面积百分比（WA%）,判断造模是否成功。制备组织标本后通过TUNEL法检测观察细胞凋亡情况,免疫组化法观察肺小动脉PI3K/Akt通路关键靶点的磷酸化表达。3.2实验二基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制取出大鼠肺动脉,进行PASMCs的分离及培养,α-SMA抗体免疫荧光法对PASMCs进行鉴定,CCK-8法检测细胞的增殖活性,流式细胞技术检测细胞的凋亡率,western-blot法检测PI3K/Akt通路关键靶点的磷酸化表达及影响细胞增殖的m TOR、p27kip1和PCNA以及影响细胞凋亡相关的Bcl-2、Bax、Cyt c、Caspase-3、caspase-9。结果:1.补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究1.1两组患者治疗前后肺功能结果比较两组患者治疗前肺功能（FEV1占预计值%、FEV1/FVC）差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组与对照组比较,差异无统计学意义（P>0.05）。1.2两组患者治疗前后超声心动图结果比较两组患者治疗前超声心动图各项结果无明显差异（P>0.05）,具有可比性;治疗后治疗组各项指标明显优于治疗前,且优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;对照组S、RVFAC与治疗前比较未见明显差异（P>0.05）,余各项指标明显优于治疗前,差异有统计学意义（P<0.05）。1.3两组患者治疗后中医证候疗效比较治疗后治疗组临床控制6例（20%）,显效12例（40%）,有效10例（33.33%）,无效2例（6.67%）;对照组临床控制2例（6.67%）,显效10例（33.33%）,有效12例（40%）,无效6例（20%）,治疗组治疗后中医证候疗效优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.4两组患者治疗前后中医证候总积分比较治疗前两组患者中医证候积分比较差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周时与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.5两组患者治疗前后单项症状积分比较治疗前两组患者在喘息、气短、咯痰、疲乏无力、胸闷或痛,痛有定处及面色暗淡等症状评分差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组患者各项评分均较治疗前明显改善,且同一时期治疗组各项评分优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;第12周时两组各症状评分与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.6两组患者治疗前后CAT评估量表比较两组患者治疗前CAT评分差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组患者各项评分均较治疗前明显改善,且同一时期治疗组各项评分优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;第12周时两组各症状评分与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.7两组患者治疗前后6分钟步行距离比较两组患者治疗前6分钟步行距离差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后两组均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.8两组患者治疗前后Borg量表比较两组患者治疗前Borg量表比较差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且同一时期治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;治疗组第12周与第4周比较差异无统计学意义（P>0.05）。1.9两组患者治疗前后BODE指数比较两组患者治疗前BODE指数差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.10两组患者治疗前后血气分析比较两组患者治疗前血气分析（Pa O2、Pa CO2）差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.11两组患者治疗前后NT-pro BNP比较两组患者治疗前NT-pro BNP差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.12两组患者治疗前后D-二聚体比较两组患者治疗前D-二聚体差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.13两组患者治疗前后FIB比较两组患者治疗前FIB差异无统计学意义（P>0.05）,具有可比性;治疗后均较治疗前有所改善,且治疗组明显优于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。1.14安全性指标对两组患者治疗前后血尿常规、肝肾功能以及心电图等进行监测,部分患者心电图出现右室大表现,个别指标呈现异常而无临床意义,未见明显异常。2.基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制研究应用网络药理学技术共获得96个有效化合物,对应的作用靶点共1140个,根据预设条件获得203个疾病靶点。GO富集分析得到具有显着意义的BP1416个、CC26个和MF68个。KEGG通路分析得到104个具有显着意义的通路。quercetin槲皮素、luteolin木犀草素、beta-caroteneβ胡萝卜素、kaempferol山奈酚和baicalein黄芩素等为主要成分,ALB、IL6、VEGFA、Akt1、IL1B等为主要靶点,AGE-RAGE、Relaxin、PI3K-Akt等为主要通路,分析后得出PI3K-Akt通路在本病中发挥着重要的作用。3.基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响3.1实验一补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究3.1.1气管注射LPS、烟熏联合低氧持续4w后模型组大鼠m PAP、右心肥厚指数、HE染色及肺小动脉血管重建指标WT%和WA%与正常组对比明显异常,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,成功造出COPD-PH的动物模型。3.1.2中药组、西药组和中西医结合组COPD-PH大鼠的一般生活状态明显优于对照组,m PAP、右心肥厚指数、HE染色及肺小动脉血管重建指标WT%和WA%水平较模型组明显改善,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）,中药组与西药组无明显差异（P>0.05）,中西医结合组优于中药组与西药组,差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01）。3.1.3肺小动脉TUNEL结果与空白对照组比较,模型组细胞凋亡数量显着减少,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡数量明显升高,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡数量增加,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组细胞凋亡数无明显差异,差异无统计学意义（P>0.05）,中西医结合组细胞凋亡数增多,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组细胞凋亡数显着增多,差异有统计学意义（P<0.01）。3.1.4免疫组化法检测肺小动脉PI3K/Akt通路相关指标与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组p-PI3K和p-Akt表达无明显差异（P>0.05）,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2实验二基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤化裁方对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制3.2.1免疫荧光法鉴定PASMCs结果细胞均呈α-SMA阳性绿色荧光,可见明显肌丝,呈与细胞平行的丝状梭形排列,大鼠肺动脉成功提取出PASMCs。3.2.2western-blot法检测各组PASMCs的p-PI3K、p-Akt的蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组p-PI3K和p-Akt表达无明显差异（P>0.05）,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组p-PI3K、p-Akt表达结果下调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.3CCK-8细胞增殖检测结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组细胞增殖活性明显增强,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,西药组细胞增殖活性无明显差异,中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）;与西药组比较,中西医结合组细胞增殖活性显着降低,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.4western-blot法检测各组PASMCs的p-m TOR、PCNA、p27kip1蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组、中药组、西药组及中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着上调,p27kip1的表达显着下调,差异有统计学意义（P<0.01）;与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）;与中药组比较,中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）,西药组p-m TOR、PCNA、p27kip1的表达与中药组无显着差异（P>0.05）;与西药组比较,中西医结合组p-m TOR、PCNA的表达显着下调,p27kip1的表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.5流式细胞术检测细胞凋亡率结果与空白对照组比较,模型组细胞凋亡率降低,差异有差异有统计学意义（P<0.05）;中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与中药组比较,西药组细胞凋亡率无明显变化,差异无统计学意义（P>0.05）,中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。与西药组比较,中西医结合组细胞凋亡率增加,差异有统计学意义（P<0.01）。3.2.6western-blot法检测各组PASMCs的Bcl-2、Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3蛋白表达结果与空白对照组比较,模型组Bcl-2表达显着上调,中药组、西药组及中西医结合组Bcl-2表达显着下调,模型组Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着下调,中药组、西药组及中西医结合组Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与模型组比较,中药组、西药组及中西医结合组Bcl-2表达显着下调;Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与中药组比较,西药组Bcl-2、Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3表达与中药组无明显差异（P>0.05）,中西医结合组Bcl-2显着下调,Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。与西药组比较,中西医结合组Bcl-2显着下调,Bax、Cyt C、caspase-9及caspase-3显着上调,差异有统计学意义（P<0.01）。结论:1.补阳还五汤能够改善气虚血瘀型COPD-PH患者喘促、气短等临床症状,改善低氧状态,改善心肺功能,增加运动耐力,同时改善生活质量,其机制可能与缓解缺氧、高碳酸血症和呼吸性酸中毒等导致的肺血管收缩痉挛,降低血液粘稠度、预防原位血栓形成等密切相关,临床安全性高。2.补阳还五汤中的槲皮素、木犀草素、山奈酚等有效成分,可以作用于ALB、IL6、VEGFA等靶点,通过调控AGE-RAGE、PI3K-Akt、TNF等信号通路,参与细胞凋亡、细胞增殖、炎症反应等多种生物过程达到治疗COPD-PH的作用。3.补阳还五汤能够调控PI3K/Akt信号通路起到抑制PASMCs增殖,促进PASMCs凋亡,抑制血管重构的作用,从而降低COPD-PH肺动脉压力的作用。
王明哲[2]（2021）在《固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究》文中进行了进一步梳理背景:慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）是一种以持续呼吸道症状和气流受限为特征的疾病,通常是由于明显暴露于有毒颗粒或气体引起的气道和/或肺泡异常所致,其发病机制目前尚未完全阐明,临床疗效欠佳。目前对于COPD的治疗主要以对症治疗为主,治疗效果不理想且需要终身控制疾病的发展。中医以整体观念、辨证施治为纲,可以通过“扶正”、“固卫”起到未病先防,已病防变的作用,从而更好的预防和控制COPD的发生与发展。“固本止咳中药”源于国医大师、中医内科呼吸病专家晁恩祥教授多年诊治COPD的临床经验。晁恩祥教授十分重视人体正气在疾病发病和病情进展中的地位和作用,强调“正气存内,邪不可干”,提出“扶正固卫”理论,因而以经典方剂“玉屏风散”为基础,加减化裁创制固本止咳中药。前期临床研究表明,固本止咳中药在改善患者肺功能等方面有较好效果,并可通过调控T细胞亚群发挥调节人体免疫功能的作用。大量的前期动物实验表明,固本止咳中药可改善COPD模型小鼠肺功能情况、呼吸道病理损伤及炎性因子的过度表达、并降低肺组织αβT细胞/γδT细胞比例、增加肺组织中KGF,KGFR蛋白和基因表达含量等。因此,进一步开展固本止咳中药治疗COPD模型小鼠的疗效及作用机制研究具有一定的意义。目的:损伤修复是在各类细胞生长因子共同作用下的协调有序过程,分为炎症反应、细胞增殖、基质沉积及组织重塑四个时期。呼吸道损伤修复是COPD的主要发病机制之一,贯穿了慢阻肺疾病的全程。本研究从呼吸道的黏膜炎症损伤修复、呼吸道结构损伤修复及异常的呼吸道损伤修复这三个方面入手,研究固本止咳中药对于COPD呼吸道损伤修复的调控作用,从而更好的阐释中医“扶正固卫”、“肺主皮毛”的理论。方法:本研究将100只健康ICR小鼠按体重随机分为空白组（n=30）、模型COPD组（n=35）和固本止咳中药组（n=35）。除正常对照组以外,其余各组均被制成COPD模型。本研究采用被动吸烟加鼻腔滴入LPS的方法进行COPD小鼠造模。治疗组于第61天开始予固本止咳中药灌胃,空白对照组和模型对照组使用蒸馏水以同样方法灌胃,共28天。第一部分:体重监测和肺功能检测明确COPD模型小鼠的模型制备情况和固本止咳中药的药效。在固本止咳中药对COPD模型小鼠的呼吸道黏膜炎性损伤修复的调控作用研究方面,本研究首先通过抗体芯片法对小鼠呼吸道40种炎性因子进行系统检测,并采用免疫组化法对抗体芯片结果中COPD组明显变化和固本止咳中药组发挥明显调控作用的炎性因子进行验证。在固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道结构损伤修复的调控以及对异常的损伤修复的作用研究方面,本研究通过病理学评判、免疫组化法和透射电镜进行检测,以判断香烟烟雾暴露+LPS滴鼻对小鼠呼吸道结构、肺泡结构、细胞外基质和Ⅱ型上皮细胞的结构损伤情况以及固本止咳中药对COPD模型对相应结构损伤修复及异常的损伤修复的调控情况。第二部分:基于质谱技术,对固本止咳中药的成分分析研究,从固本止咳中药的化学成分入手,探讨其发挥损伤修复作用机制的原理。此外,本研究对各组小鼠肺组织进行label-free蛋白组学检测,明确固本止咳中药治疗COPD模型小鼠的靶点及通路。阐释其对于COPD模型小鼠呼吸道损伤修复多成分-多靶点-多通路整体调控的机制。第三部分:基于western-blot和RT-qPCR技术,对第一部分和第二部分结果富集出现的JAK-STAT信号通路进行验证研究,对通路中JAK1,p-JAK1,STAT3,p-STAT3和SOCS3的蛋白表达水平以及JAK1 mRNA,JAK2mRNA,JAK3mRNA,STAT1 mRNA,STAT3 mRNA,SOCS3mRNA的表达水平进行测定。结果:1)体重监测:固本止咳中药可改善COPD模型小鼠体重增长缓慢的情况。2)肺功能检测:COPD 组较空白组 FEV 0.05,FEV0.1,FEV0.2,PEF,Crs,Cst均明显下降（P<0.01）;Rrs,Ers,Rn均明显升高（P<0.01）;G,H均无统计学差异（P>0.05）。固本止咳中药组较COPD组FEV0.05,FEV0.1,FEV0.2,Crs均明显升高（P<0.05）;Rrs,Ers,Rn均明显下降（P<0.05）;PEF,G,H,Cst均无统计学差异（P>0.05）。3)病理形态学:HE染色结果表明,COPD组小鼠病理形态符合COPD的特征,固本止咳中药可改善COPD模型小鼠50-100μm直径气道、呼吸性细支气管和肺泡的病理形态。透射电镜结果表明,COPD组小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞板层小体出现空泡化,线粒体肿胀,嵴断裂或消失。固本止咳中药组小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞部分板层小体出现空泡化,线粒体肿胀,但程度与COPD组相比明显减轻。4)抗体芯片检测:在40个炎性因子中,COPD组与空白组相比,共有8个显着升高的炎性因子,分别为 IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,IL-1β,IL-3,IL-17 和 IL-12p70（P<0.05）;固本止咳中药组与COPD组相比,共有7个显着降低的因子,分别为IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,IL-1β,IL-3 和 TCA-3（P<0.05）。5)免疫组化检测:与空白组相比,COPD组IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,α-SMA,MMP-9,TIMP-1,MMP-9/TIMP-1,HIF-1α 在肺组织中的表达均明显升高（P<0.05）。与 COPD 组相比,固本止咳中药组 IL-6,GM-CSF,TNF-α,IFN-γ,α-SMA,MMP-9,TIMP-1,MMP-9/TIMP-1,HIF-1α在肺组织中的表达均明显下降（P<0.05）。空白组和COPD组,固本止咳中药组与COPD组之间Collegen 1均无统计学差异（P>0.05）。6)中药成分分析:共鉴定出固本止咳中药的41个成分,其中的多种成分被证明可通过抗炎、抗氧化、抑制气道重塑等参与呼吸道损伤修复的调控。7)label-free蛋白组学检测:在COPD组和空白组之间共发现287个差异蛋白,固本止咳中药组和COPD组之间共发现184个差异蛋白。通过对差异蛋白的GO富集分析、KEGG富集分析和REACTOME富集分析发现:固本止咳中药可通过中性粒细胞脱颗粒、补体通路、细胞外基质、JAK-STAT信号通路等多个途径以及多个参与COPD进展的生物标志物,从整体上参与COPD呼吸道损伤修复的调控。8)JAK-STAT信号通路的实验:本研究通过RT-PCR法对各组小鼠肺组织JAK1,JAK2,JAK3,STAT1,STAT3和SOCS3进行了测定,结果表明:与空白组相比,COPD模型小鼠肺组织中 JAK1 mRNA,JAK2 mRNA,JAK3 mRNA,STAT3 mRNA 和 SOCS3 mRNA表达均明显升高（P<0.05）,STAT1 mRNA两组间无统计学差异（P>0.05）。与COPD组相比,固本止咳中药组小鼠肺组织中JAK1 mRNA,STAT3 mRNA表达明显下降（P<0.05）,且 SOCS3 mRNA 表达明显升高（P<0.05）,JAK2mRNA,JAK3 mRNA,STAT1 mRNA与COPD组相比均无统计学差异（P>0.05）。本研究采用western-blot法对各组小鼠肺组织JAK1,p-JAK1,STAT3,p-STAT3,SOCS3进行测定。与空白组相比,COPD 模型小鼠肺组织中 p-JAK1,p-STAT3,p-JAK1/JAK1,p-STAT3/STAT3 明显升高（P<0.05）;JAK1,STAT3,SOCS3与空白组相比均无统计学差异（P>0.05）。与COPD组相比,固本止咳中药组小鼠肺组织中p-JAK1,p-STAT3,p-STAT3/STAT3明显降低（P<0.05）,SOCS3 明显升高（P<0.05）;JAK1,STAT3,P-JAK1/JAK1 与 COPD组相比均无统计学差异（P>0.05）。结论:1)固本止咳中药可通过减少COPD模型小鼠肺组织炎性因子的过度表达,发挥调控呼吸道黏膜炎症损伤修复的作用;并通过改善COPD模型小鼠呼吸道结构、肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构以及细胞外基质的损伤,发挥调控呼吸道结构损伤修复和减少异常的呼吸道损伤修复的作用。体现了中医扶正固卫,肺主皮毛的理论。2)固本止咳中药在COPD损伤修复机制的整体调控中具有多成分-多靶点-多通路的特点,体现了中医整体观念的特点。3)固本止咳中药可通过下调JAK1和STAT3的磷酸化水平,上调SOCS3的表达从而抑制JAK-STAT信号通路。是固本止咳中药基于扶正固卫、肺主皮毛理论调控呼吸道损伤修复在机制上的具体体现。
吴叶[3]（2021）在《清源化痰颗粒对COPD小鼠Th17/Treg信号通路调节机制及肠道菌群影响》文中研究表明目的:慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）是常见的呼吸系统疾病,临床表现有咳嗽、咳痰、气喘,特征是进行性发展的气流受限。COPD属于中医“肺胀”范畴。临床中清源化痰颗粒在治疗慢阻肺发作期痰热蕴肺、肺脾气虚证方面疗效颇佳,但是目前机制尚不明确。近年研究证实Th17/Treg细胞免疫失衡和慢性阻塞性肺疾病关系密切,本研究探讨清源化痰颗粒对COPD小鼠Th17/Treg平衡及下游信号通路的影响,以及对小鼠肠道微生态的影响。方法:实验一:探究清源化痰颗粒对COPD小鼠肺组织影响及肺泡灌洗液中中性粒细胞的影响。予脂多糖气管注射及烟熏法复制COPD小鼠模型,设置正常组、模型组、西药组、清源化痰颗粒低剂量组、清源化痰颗粒高剂量组。记录小鼠体重、活动状态、毛发光泽度等变化,肺组织制作病理切片,观察各组小鼠支气管、细支气管腔内渗出物、炎细胞浸润情况、局部血管充血及肺泡破裂、融合情况。实验二:探究清源化痰颗粒是否干预了 Th17/Treg平衡及相关信号通路。检测各组小鼠肺组织Th17、Treg特异性转录因子RORyt和Foxp3及其分泌的IL-17和下游炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α的含量,判断各组小鼠的炎症水平。实验三:探究各组小鼠肠道微生态变化。各组小鼠粪便提取DNA,PCR扩增靶序列,基因文库构建,上机测序,生物信息分析。进行OTU统计及群落多样性分析,并对菌群物种门、属分类统计,进行组间差异性分析。结果:中药组、西药组较模型组小鼠肺泡灌洗液中性粒细胞数降低,肺组织病理见中性粒细胞浸润减少,支气管腔渗出减少,血管充血缓解,肺泡破裂、融合减轻。模型组小鼠肺组织中RORyt表达升高,Foxp3表达下降,IL-17及其下游的IL-6、IL-8、TNF-α致炎因子含量升高,西药及中药高剂量组RORyt、IL-17、IL-6、IL-8、TNF-α均有下降,组间无差异,中药低剂量组下降趋势不显着;中药高剂量组Foxp3升高显着,西药及中药低剂量组升高不显着。COPD小鼠存在肠道菌群紊乱,乳酸菌及双歧杆菌等肠道益生菌在模型组小鼠肠道内显着减少,在西药组及中药高剂量组中占比显着升高,在中药低剂量组中,占比未见显着升高。结论:清源化痰颗粒可以干预COPD小鼠Th17/Treg平衡,通过增加Treg分化,减少Th17分化,进而减少IL-17及其下游的IL-6、IL-8、TNF-α致炎细胞因子含量来减轻COPD小鼠肺部炎症,并且清源化痰颗粒对紊乱的肠道菌群有调整作用。
薛佳茜[4]（2021）在《基于“肺与大肠相表里”研究清源化痰颗粒对慢阻肺急性加重期炎症反应及肠道菌群的影响》文中研究说明目的:慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD）对人体健康的影响是巨大而深刻的,慢阻肺的急性加重（Acute Exacerbation of Chronic Obstructive Pulmonary Disease,AECOPD）又是加速病情进展的主要原因。目前,临床上用于治疗AECOPD的药物以抗感染、抗炎和支气管扩张药为主,但是仍有其相对局限性,临床上需要有更多的可供选择的药物用于AECOPD的治疗,因此在此领域,中医药是大有作为的。本研究以“肺与大肠相表里”经典理论为出发点,以清源化痰颗粒为研究对象,研究其对慢阻肺急性加重期炎症反应和肠道菌群的影响,为清源化痰颗粒的应用提供实验支持。同时在研究中传承中医学的理论精华,建立对中医药学的理论自信和文化自信。方法:（1）首先以网络药理学为手段,通过数据库检索清源化痰颗粒中的活性化合物和相应靶标,明确清源化痰颗粒和AECOPD相关的生物学过程和信号传导途径,提出清源化痰颗粒作用于AECOPD的机制假说;（2）其次,观察清源化痰颗粒对AECOPD小鼠肺部炎症反应的影响,明确其“治肺”的作用机制。选用SPF级C57BL/6雄性小鼠,通过熏烟加气管内滴注LPS的方法建立AECOPD疾病小鼠模型,8周后收收集标本进行检测,观察小鼠精神、饮食、体质量等一般情况,肺组织HE病理改变及肺平均内衬间隔,计算肺泡灌洗液内炎症细胞数量及中性粒细胞与淋巴细胞比值,并通过免疫荧光法检测肺组织内中性粒细胞的凋亡情况,Western blot及PCR检测相关炎症通路HMGB1-RAGE、凋亡蛋白C-casp3等的水平。（3）再次,研究清源化痰颗粒对肠道菌群与肠道内代谢产物的影响,说明其具有“调肠”的作用。利用16S rDNA及靶向代谢组学分析小鼠粪便中群落物种信息和短链脂肪酸水平,通过OTU聚类分析、样本间β多样性指数分析及多组比较方法,获取物种组成信息和组间组成差异;利用Masshunter定量软件对样本中短链脂肪酸进行识别,确定各短链脂肪酸的含量;最后将代谢产物和样本物种进行相关性分析,判断差异代谢物与菌群之间是否具有相关性,挖掘引起代谢差异的关键菌群。（4）最后,观察清源化痰颗粒干预后的肠道菌群对熏烟联合LPS滴注诱导的AECOPD小鼠炎症反应的影响,进一步明确清源化痰颗粒“从肠治肺”的作用机制。利用菌群耗竭联合AECOPD造模的方法建立小鼠双重干预模型,于第8周观察小鼠一般情况、肺组织HE病理改变、肺泡灌洗液内炎症细胞计数,并通过Western blot及PCR检测相关炎症通路HMGB1-RAGE、凋亡蛋白C-casp3等的表达情况。结果:（1）网络药理学结果表明,清源化痰颗粒的作用机制主要表现在对炎症反应的调节上,通过表型分析发现,清源化痰颗粒的作用靶标中CRP、IL-6、IL-1β与频繁急性加重表型相关,MPO与中性粒细胞炎症相关,MMP-1、MMP-9与肺气肿程度相关;在通路上,主要涉及RAGE及其配体途径、PI3K-Akt信号通路,并对Apoptosis结局具有调节作用。结合文献研究,最终提出清源化痰颗粒可能通过介导“HMGB1-RAGE”信号通路,对中性粒细胞凋亡产生干预,进而影响AECOPD的疾病进程的科学假说。（2）清源化痰颗粒能显着改善AECOPD小鼠肺组织炎症情况,与模型组比较,西药组、中药中剂量组、中药高剂量组及大黄素组小鼠体质量均上升平稳,一般情况尚可;肺组织病理提示西药组、中药高剂量组肺组织中不同程度炎症细胞浸润,与模型组比较,炎症反应有所缓解。中药中剂量组、大黄素组可见轻度炎细胞浸润,病变最轻,肺平均内衬间隔较模型组明显降低（P<0.05）;各药物组肺泡灌洗液内中性粒细胞计数均低于模型组,淋巴细胞变化尚不明显,中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）降低,以中药中剂量组最为显着（P<0.05）。免疫荧光结果显示,正常组无明显的C-casp3、Ly6G荧光细胞形态显示。模型组可见明显的中性粒细胞,胞内及周围未见C-casp3显示,各给药组可见不同程度的Ly6G和C-casp3显示,说明给药组均存在不同程度的中性粒细胞凋亡情况。Western blot结果显示,AECOPD模型组小鼠肺组织C-casp3、C-casp3/Casp3较正常组明显降低（P<0.05）,Casp3、HMGB1、RAGE明显升高（P<0.05,P<0.01）。经不同药物处理后,C-casp3、C-casp3/Casp3表达均有增加,与模型组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）,其中中药中剂量组、大黄素组效果优于中药高剂量组和西药组（P<0.05,P<0.01）;Casp3表达方面,给与药物干预后,给药各组Casp3水平均明显下降,与模型组比较,中药中剂量组、中药高剂量组和大黄素组均有统计学意义（P<0.01）;同时给药组小鼠HMGB1、RAGE蛋白表达降低,与模型组比较,中药中剂量组、大黄素组差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）。PCR结果显示,与正常组相比,模型组小鼠肺组织中HMGB1mRNA、RAGE mRNA表达量均显着升高（P<0.01）,经各组药物治疗后,HMGB1mRNA、RAGE mRNA两种基因的表达水平均被下调,与模型组比较,差异均有统计学意义（P<0.01）;HMGB1mRNA表达水平方面,相对于西药组,中药中剂量组、大黄素组表达水平更低,差异有统计学意义（P<0.01,P<0.05）,而RAGE mRNA各给药组之间无显着差异（P>0.05）。（3）在对肠道菌群和代谢产物的影响方面,与正常组比较,模型组乙酸、丙酸、丁酸的含量均明显降低,以丁酸最为显着（P<0.01）。与模型组比较,西药组乙酸、丙酸含量略有升高;中药中剂量组、中药高剂量组、大黄素组乙酸含量呈下降趋势,丙酸、丁酸均明显上升,其中中药中剂量组丙酸、丁酸含量最高。综合分析后将丁酸作为主要差异代谢产物,与先前分析得到的组间主要差异菌群进行关联性分析。结果显示,Akkermansiaceae（阿克曼菌科）、Rikenellaceae（理研菌科）、Ruminococcaceae（瘤胃菌科）、Sutterellaceae与丁酸水平呈正相关,Enterococcaceae（肠球菌科）与丁酸水平呈负相关。Akkermansiaceae（阿克曼菌科）与丁酸的组间变化趋势基本一致。（4）粪便菌群移植能显着逆转AECOPD小鼠肺组织炎症情况,移植正常组、移植中药组、移植大黄素组小鼠一般情况尚可,体质量在予以菌群移植后平稳上升;肺组织病理提示肺泡结构破坏及炎症细胞浸润程度较模型组明显减轻,肺平均内衬间隔较模型组明显降低（P<0.05）;肺泡灌洗液内中性粒细胞计数较模型组减少,中性粒细胞与淋巴细胞比值（NLR）降低。Western blot结果显示,与模型组比较,移植正常组、移植中药组、移植大黄素组小鼠肺组织C-casp3、C-casp3/Casp3均升高,差异有统计学意义（P<0.01）,其中移植中药组效果略优于移植正常组和移植大黄素组,差异无统计学意义;Casp3在各移植组中均明显下降,与模型组比较,差异有统计学意义（P<0.05）。各移植组小鼠HMGB1、RAGE呈现下降趋势,与模型组比较,移植中药组、移植大黄素组差异有统计学意义（P<0.05）,移植组之间比较,无明显差异（P>0.05）。PCR结果显示,与正常组相比,模型组小鼠肺组织中HMGB1mRNA、RAGE mRNA表达量均显着升高（P<0.01,P<0.05）;与模型组比较,各移植组HMGB1mRNA、RAGE mRNA的表达水平均被下调（P<0.01,P<0.05）,以移植中药组下降明显,但组间比较无统计学意义（P>0.05）。结论:清源化痰颗粒能够影响HMGB1-RAGE通路,下调促炎因子HMGB1及其受体RAGE的蛋白和mRNA的表达,同时上调凋亡执行蛋白C-casp3的水平,诱导中性粒细胞为主的炎症细胞凋亡,减轻中性粒细胞介导的肺部炎症,具有“治肺”的作用;AECOPD模型小鼠伴有短链脂肪酸及肠道菌群的紊乱,而清源化痰颗粒能够升高模型小鼠丁酸水平,同时调节相关肠道菌群的结构和丰度,纠正肠道菌群和代谢产物的紊乱,说明清源化痰颗粒具有“调肠”的特点;清源化痰颗粒干预后的粪便菌群移植能够明显减轻AECOPD小鼠肺组织炎症反应,调节HMGB1-RAGE通路及凋亡蛋白C-casp3的表达,体现了清源化痰颗粒“从肠治肺”“肺肠同调”的中医特色。
陈晶晶[5]（2021）在《参七化痰方治疗AECOPD临床疗效观察及其含药血清对气道平滑肌细胞RhoA/ROCK信号通路的影响研究》文中研究说明1背景COPD是全球引起慢性疾病和死亡主要原因之一,近年来对COPD的研究一直是呼吸界的研究热点。据2021年《慢性阻塞性肺疾病全球倡议》,COPD乃世界第3位死亡原因,可预测发病率和死亡率将在未来几十年上升。目前,COPD发病机制尚不完全清楚,其病因是由于环境因素和遗传因素之间复杂交互作用。其中暴露于吸入污染物或香烟烟雾激活肺泡上皮和炎症细胞引起气道炎症是COPD发病主要机制。本研究分为理论研究、临床研究及体外研究三部分。运用传统医学理论与现代分子医学技术,针对慢阻肺这一重大疾病开展相关性研究。从理论研究出发,通过分类提炼关于慢阻肺的中医病因病机相关文献,梳理出慢阻肺中医学发生发展病机及治则治法,通过临床观察及体外研究,阐明益气活血化痰法治疗COPD的内在机制,为益气活血化痰法进一步运用于COPD的治疗提供客观依据。2目的在传统医学“整体观念辨证统一”思想指导下,探讨慢阻肺的中医学发生发展内在病机,通过理论研究,揭示慢阻肺“本虚标实”的病理本质及益气活血化痰法的治疗意义。临床研究观察益气活血化痰法治疗慢阻肺急性加重期气虚血瘀痰阻证的疗效评价及安全性,并分析TGF-β1与ROCK1等其他指标的相关性。体外研究以Rho A/ROCK与MAPK/ERK信号通路为切入点,观察在TGF-β1刺激下参七化痰方含药血清对气道平滑肌细胞的增殖、迁移、凋亡及F-肌动蛋白的形成和细胞骨架重组的影响,检测药物干预后上述通路相关分子水平的表达变化,观察益气活血化痰法中药参七化痰方对气道平滑肌细胞的作用,探讨其治疗慢阻肺气道重塑的分子机制,为中医药辅助治疗慢阻肺提供科学依据。3方法理论研究部分:通过搜集筛选关于慢阻肺的中医病因病机相关文献,提炼出慢阻肺中医学发生发展病机,揭示慢阻肺发病的本质及治法,并通过文献研究阐述Rho A/ROCK等信号通路与TGF-β1的结构功能及其与慢阻肺的相关性,为进一步参七化痰方治疗慢阻肺临床研究及体外实验提供理论基础。临床研究部分:按照随机对照设计原则,将符合纳入标准的60例AECOPD患者分为对照组和治疗组各30例,对照组予以控制性氧疗、抗生素、解痉平喘药及祛痰等基础治疗,治疗组加用参七化痰方治疗,两组均治疗14天。治疗前后对两组症状与体征评分进行记录来评估中医证候疗效;治疗前后监测患者呼吸困难指数（m MRC）、肺功能（FEV1%pred、FEV1/FVC）、血气分析（Pa CO2、Pa O2）、感染指标（WBC、NEUT%、hs-CRP）、凝血指标（FBG、DD水平）;此外,还对治疗前后患者的TGF-β1与ROCK1进行了检测,并且对治疗组患者治疗前的TGF-β1指标与其他相关指标进行相关性分析,为后续细胞实验的机制研究奠定基础。体外研究部分:本课题来源系由国家自然科学基金项目（编号:81473675）支持。采用参七化痰方的大鼠含药血清,进行气道平滑肌细胞体外实验。实验研究一从新生SD大鼠的肺中成功分离大鼠气道平滑肌细胞,从不同层面来筛选TG F-β1刺激下参七化痰方（SQHT）对气道平滑肌细胞最适作用浓度,为后续信号通路机制研究提供基础。实验研究二根据实验一筛选出的SQHT最适含药血清浓度进行接下来的实验,利用CCK8方法检测细胞的增殖能力;采用Transwell检测迁移能力;采用流式方法检测凋亡能力,并利用Western blot与RT-q PCR方法对Bax、Bcl-2水平进行验证;通过免疫荧光的方法追踪细胞F-肌动蛋白的变化。实验研究三采用Western blot与RT-q PCR方法对Rho A/ROCK与MAPK/ERK信号通路上的关键蛋白进行了检测,包括Rho A、ROCK1、ROCK2、p-ERK、ERK等指标的变化;实验研究四为了进一步证明SQHT在气道平滑肌细胞重塑及炎症中发挥重要作用,采用Western blot与RT-q PCR方法检测细胞因子Snail、Slug的变化,同时采用ELISA方法验证细胞上清中MMP9、TIMP-1蛋白的变化,为临床运用益气活血化痰法治疗慢阻肺提供科学依据。4结果4.1理论研究慢阻肺乃本虚标实之证,本虚乃正虚,肺脾肾气亏虚为主。标实乃痰瘀,以痰瘀互结为特点。总属正虚夹杂痰瘀而成,气虚血瘀痰阻乃肺胀病机之关键,益气活血化痰法是肺胀的根本治法。Rho A/ROCK为慢阻肺中最常见失调信号通路之一,MAPK/ERK信号通路位于其下游发挥作用,TGF-β1刺激与慢阻肺气道重塑及气道平滑肌密切相关。参七化痰方具有益气活血化痰功效,故可能介导上述两条信号通路干预TGF-β1的刺激来治疗慢阻肺。4.2临床研究4.2.1治疗前组间比较治疗前两组基线资料（性别、年龄、病程及病情严重程度）、症状体征评分、m MRC、FEV1%pred、FEV1/FVC、Pa CO2、Pa O2、WBC、NEUT%、hs-CRP、FBG、DD、TGF-β1以及ROCK1水平组间比较均无统计学意义（P>0.05）,证明临床资料具有可比性。4.2.2治疗后疗效比较4.2.2.1益气活血化痰法对中医证候疗效的影响治疗后组内比较:两组咳嗽、喘息、咯痰量、痰液状态、饮食情况、口唇紫绀、胸闷、乏力、肺部啰音等单项积分均具有显着统计学意义（P<0.01）。治疗后组间比较:与对照组相比,治疗组咳嗽、咯痰量、痰液状态、饮食情况、口唇紫绀、乏力、肺部啰音单项积分具有统计学意义（P<0.05）,而胸闷及喘息单项积分疗效无统计学意义（P>0.05）。在有效率方面,治疗组30例中显效16例,有效12例,无效2例,总有效率为93.33%;对照组30例中显效9例,有效17例,无效4例,总有效率为86.67%。经过治疗后,2组总有效率相近（P>0.05）,但2组显效率相比,组间差异具有统计意义（P<0.01）。4.2.2.2益气活血化痰法对呼吸困难指数的影响治疗后组内比较:两组m MRC评分有显着统计学意义（P<0.01）。治疗后组间比较:两组m MRC评分有统计学意义（P<0.05）。4.2.2.3益气活血化痰法对患者肺功能的影响治疗后组内比较:两组患者FEV1%pred,FEV1/FVC指标具有显着统计学意义（P<0.01）。治疗后组间比较:治疗组患者FEV1%pred,FEV1/FVC指标具有显着统计学意义（P<0.01）。4.2.2.4益气活血化痰法对WBC、Neut%、hs-CRP、TGF-β1、ROCK1的影响治疗后组内比较:两组患者WBC、Neut%、hs-CRP、TGF-β1、ROCK1指标有显着统计学意义（P<0.01）。治疗后组间比较:两组患者WBC、Neut%、hs-CRP、TGF-β1、ROCK1指标有显着统计学意义（P<0.01）。4.2.2.5益气活血化痰法对血气分析指标的影响治疗后组内比较:两组患者Pa O2、Pa CO2较治疗前有显着统计学意义（P<0.01）。治疗后组间比较:两组患者Pa O2、Pa CO2指标具有显着统计学意义（P<0.01）。4.2.2.6益气活血化痰法对凝血指标的影响治疗后组内比较:两组患者FBG、DD较治疗前有显着统计学意义（P<0.01）。治疗后组间比较:两组患者FBG、DD指标具有显着统计学意义（P<0.01）。4.2.3益气活血化痰法安全性评价两组患者治疗前后,肝肾功能无明显差异,且治疗组未出现明显不良反应。4.2.4 TGF-β1与各项指标之间的相关性分析治疗组AECOPD患者治疗前血清TGF-β1含量与WBC（r=0.466,P=0.009）、Neut%（r=0.450,P=0.012）、hs-CRP（r=0.388,P=0.034）、Pa CO2（r=0.432,P=0.017）和DD（r=0.394,P=0.031）呈正相关,与Pa O2（r=-0.467,P=0.009）、F EV1%pred（r=-0.379,P=0.039）及FEV1/FVC（r=-0.344,P=0.045）呈负相关,而与FBG无显着相关性（r=0.156,P=0.409）。结合前述结果,提示TGF-β1可能参与AECOPD炎症、凝血及呼吸功改变等过程。进一步研究还显示,AECOPD患者血清TGF-β1含量与COPD发病重要信号通路Rho A/ROCK中ROCK1（r=0.309,P=0.043）也呈正相关。4.3体外研究4.3.1实验研究一实验细胞爬片经DAPI细胞免疫化学染色后,根据荧光二抗的荧光颜色,通过荧光显微镜观察可见细胞核为蓝色,而α-平滑肌肌动蛋白阳性表达位置为绿光,主要表达区域为细胞胞浆,细胞特异性及活性良好,鉴定为ASMCs,可作为后续实验用细胞。通过给予不同浓度的SQHT含药血清进行干预TGF-β1刺激的ASMCs,结果显示在细胞增殖、迁移、细胞骨架重组等方面,与空白组相比,TGF-β1模型组具有统计学意义（P<0.01）;与模型组相比,除5%SQHT增殖能力无明显差异外（P>0.05）,5%、10%和20%SQHT各治疗组均具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）,量效关系在所设浓度梯度范围内呈现一定的剂量依赖关系;其中5%和10%SQHT治疗差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）;10%和20%SQHT含药血清治疗差异无统计学意义（P>0.05）。与空白组相比,模型组Rho A、ROCK1、ROCK2、Bax、Bcl-2均有显着差异（P<0.01）。与模型组相比,各治疗组Rho A、ROCK1、ROCK2、Bax、Bcl-2均有显着差异（P<0.01）。不同浓度治疗组组间比较,10%与20%治疗组对Rho A、ROCK1、ROCK2、Bax、Bcl-2等指标的影响均较5%治疗组显着（P<0.01）,且10%与20%治疗组对Rho A、ROCK1、ROCK2、Bax、Bcl-2等指标的影响无显着差异（P>0.05）。综上所述,鉴于考虑到细胞毒性的作用,因此我们选择10%SQHT含药血清作为后续实验的最适浓度。4.3.2实验研究二药物在抑制气道平滑细胞增殖、迁移、细胞骨架重组方面均具有调控作用。与空白组相比,模型组在增殖、迁移及骨架重组方面具有统计学意义（P<0.01）;与模型组相比,各治疗组在增殖、迁移及骨架重组方面具有统计学意义（P<0.01）;治疗组组间比较,在抑制增殖、迁移和抗凋亡方面,10%SQHT组与Fasudil组差异无统计学意义（P>0.05）;在骨架重组方面10%SQHT组优于Fasudil组（P<0.01）,且二者在抑制细胞增殖、迁移、细胞骨架重组及抗凋亡表达方面具有协同作用,且10%SQHT+Fasudil组最佳（P<0.05,P<0.01）。与空白组相比,模型组Bax、Bcl-2、Bax m RNA、Bcl-2 m RNA均有显着差异（P<0.01）;与模型组相比,除Fasudil组对Bax m RNA无显着影响外,三个治疗组Bax、Bcl-2、Bax m RNA、Bcl-2 m RNA均有显着差异（P<0.01）;治疗组组间比较,10%SQHT组Bax、Bcl-2、Bax m RNA、Bcl-2 m RNA均优于Fasudil组（P<0.01）;联合治疗组Bax、Bcl-2、Bax m RNA、Bcl-2 m RNA均优于10%SQHT与Fasudil组。4.3.3实验研究三药物对Rho A/ROCK与MAPK/ERK信号通路上的关键蛋白异常表达具有调控作用。与空白组相比,模型组Rho A、ROCK1、ROCK2、Rho A m RNA、ROCK1 m RNA、ROCK2m RNA、p-ERK、ERK、p-ERK/ERK均显着升高（P<0.01）。与模型组相比,各治疗组Rho A、ROCK1、ROCK2、Rho A m RNA、ROCK1 m RNA、ROCK2 m RNA、p-ERK、ERK、p-ERK/ERK均显着降低（P<0.01）。治疗组组间比较,10%SQHT治疗组在抑制Rho A、ROCK1、ROCK2、Rho A m RNA、ROCK1 m RNA、ROCK2 m RNA、p-ERK、ERK、p-ERK/ERK方面均优于Fasudil（P<0.05,P<0.01）;联合治疗组在抑制Rho A、ROCK2、Rho A m RNA、ROCK1 m RNA、p-ERK、ERK方面均优于另外2个治疗组（P<0.01）。联合治疗组在抑制ROCK1、ROCK2 m RNA、p-ERK/ERK方面与SQHT组无差异（P>0.05）,且优于Fasudil组（P<0.01）。4.3.4实验研究四药物对Snail?Slug?MMP-9?TIMP-1的关键因子异常表达具有调控作用。与空白组相比,模型组Snail、Snail m RNA、Slug、Slug m RNA、MMP-9、TIMP-1均显着升高（P<0.01）。与模型组相比,各治疗组Snail、Snail m RNA、Slug、Slug m RNA、MMP-9、TIMP-1均显着降低（P<0.01）。治疗组组间比较,10%SQHT治疗组在抑制Snail、Slug m RNA、MMP-9、TIMP-1方面均优于Fasudil（P<0.01）,在抑制Slug、Snail m RNA方面与Fasudil无显着差异（P>0.05）;联合治疗组在抑制Slug、Slug m RNA、MMP-9、TIMP-1方面均优于另外2个治疗组（P<0.01）。联合治疗组在抑制Snail、Snail m RNA方面与SQHT组无差异（P>0.05）,且优于Fasudil组（P<0.01）。5结论基于益气活血化痰法创制的参七化痰方可以改善慢阻肺急性加重期的中医证候疗效、呼吸困难指数、肺功能、感染指标、血气分析指标以及凝血指标等,且安全性良好,未见毒副作用。其内在作用机制可能与TGF-β1及Rho A/ROCK等信号通路途径相关,通过下调TGF-β1及Rho A/ROCK相关基因蛋白表达,进而负向调节MAPK/ERK信号通路的发展。
张明发,沈雅琴[6]（2020）在《甘草及甘草酸类成分抗病毒性肺炎的药理作用研究进展》文中认为甘草及甘草酸类成分有抗冠状病毒、流感病毒、呼吸道合胞病毒和人巨细胞病毒等呼吸道病毒的作用,其机制可能与抑制病毒的蛋白合成,导致病毒复制受阻;改善免疫调控,上调一氧化氮表达,抑制血小板聚集,抑制炎症反应,保护宿主有关。甘草及甘草酸类成分有止咳祛痰、平喘及肺保护和抗肺纤维化作用,其机制可能是通过上调过氧化物酶体增殖激活受体-γ（PPARγ）、血管紧张素转化酶2（ACE2）和IκB-α的表达,阻滞ERK/NF-κB信号通路,又能与高迁移率属蛋白B1（HMGB1）结合直接抑制HMGB1的化学趋化和促有丝分裂的活性,抑制炎性细胞因子表达、杯状细胞增生和黏蛋白过表达,以及上调水通道蛋白表达,减轻炎症反应;通过阻滞TLR-4/MyD88/NF-κB信号通路保护肺上皮细胞;通过阻滞IL-17/TGFβ1/Smad信号通路,抑制胶原合成和成纤维细胞增生,减轻肺纤维化形成;也可通过上调Smad7的表达,抑制气道重塑,改善肺功能。
范韵鑫[7]（2020）在《慢阻肺肺泡巨噬细胞来源外泌体对气道上皮细胞增殖能力的影响及机制研究》文中研究表明背景和目的慢性阻塞性肺疾病的发生发展通常与慢性炎症、氧化应激和蛋白酶抗蛋白酶失衡等机制有关。气道上皮细胞的化生、粘液细胞增生导致粘液分泌过度是主要的慢阻肺病理改变,其具体机制尚不十分明确。既往研究发现肺泡巨噬细胞在慢阻肺发病中扮演重要角色,但其对气道上皮细胞可产生何种影响研究较少。近来外泌体及其分泌的mi RNA在细胞间通讯发挥的作用日益得到研究人员的关注。作为外泌体重要来源之一的肺泡巨噬细胞是否对气道上皮细胞发挥作用及其机制目前尚未见报道。流行病学研究表明,慢阻肺患者每年肺癌发病率较正常人群高4-5倍,提示慢阻肺与肺癌的发生关系密切。这两种疾病都涉及气道上皮细胞生物学功能和结构的改变。本研究拟通过建立慢阻肺大鼠动物模型,提取肺泡巨噬细胞与气道上皮细胞（16HBE）共培养。采用CCK8法、Transwell侵袭实验、克隆形成实验及Western Blot、Elisa等方法检测气道上皮细胞增殖活力等恶性细胞特征及相关黏蛋白和炎症介质的表达水平;运用生物信息学方法明确目标mi RNA,分离和鉴定巨噬细胞外泌体,并探索外泌体mi RNA在细胞间通讯中对气道上皮细胞的影响,并探讨其分子机制,以期揭示外泌体在巨噬细胞与气道上皮细胞通讯间发挥的桥梁作用,亦可扩展对慢阻肺与肺癌相关联机制的认识,为今后进一步寻找可能的慢阻肺治疗干预靶点,阐明慢阻肺与肺癌发生相关性并减少慢阻肺合并肺癌发生提供理论依据。材料和方法一、慢阻肺来源肺泡巨噬细胞对气道上皮细胞的作用采用香烟烟雾和脂多糖诱导的方法建立慢阻肺大鼠动物模型,HE染色观察肺组织病理改变。从肺泡灌洗液中分离巨噬细胞,将肺泡巨噬细胞与气道上皮细胞16HBE共培养,通过CCK8法、克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测气道上皮细胞增殖活力和迁移能力;运用Western Blot和Elisa方法测定气道上皮细胞的黏蛋白以及促炎介质IL-6、TNF-α的表达水平。二、慢阻肺肺泡巨噬细胞来源的外泌体对气道上皮细胞功能的影响以试剂盒法从慢阻肺大鼠及健康对照组大鼠肺泡巨噬细胞中提取外泌体,通过电子显微镜观察外泌体形态,纳米粒径分析、Western Blot方法分析及鉴定外泌体。从GEO数据库中分析对比慢阻肺及正常人外周血差异显着的mi RNA,进而通过相应的mi RNA阵列分析检测巨噬细胞外泌体差异表达的mi RNA。在气道上皮细胞中过表达该mi RNA,通过CCK8、Transwell侵袭实验和Western Blot观察过表达mi RNA对气道上皮细胞生物学功能的影响。三、慢阻肺巨噬细胞外泌体对气道上皮细胞功能影响机制的探讨运用生物信息学方法对外泌体mi RNA进行靶基因预测,CCK8分析阻断该靶基因对气道上皮细胞增殖能力的影响。结果一、慢阻肺来源肺泡巨噬细胞对气道上皮细胞的作用1.气道上皮细胞与慢阻肺肺泡巨噬细胞共培养后,其增殖活力和迁移能力较与健康对照组肺泡巨噬细胞共培养者相比明显增强（P<0.05）。2.慢阻肺肺泡巨噬细胞促进气道上皮细胞黏蛋白MUC5AC,MUC5B及MUC2的产生,抑制CFTR的表达。3.与慢阻肺肺泡巨噬细胞共培养的气道上皮细胞分泌的肿瘤坏死因子（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）的分泌水平较对照组显着上升（P<0.001）。二、慢阻肺肺泡巨噬细胞来源的外泌体对气道上皮细胞功能的影响1.通过Western Blot检测外泌体表面特定标志蛋白,由SBI试剂盒可成功提取外泌体,其在电镜下结构清晰可辨,可见囊泡样结构,纳米粒径分析慢阻肺组巨噬细胞外泌体中位数粒径139.6nm,浓度2.8×107/ml,对照组巨噬细胞外泌体中位数粒径139.8nm,浓度2.1×107/ml,两组外泌体粒径大小和浓度无明显差异。2.通过GEO数据库分析和mi RNA阵列分析表明mi R-380为肺泡巨噬细胞外泌体中明显上调的mi RNA。外泌体mi R-380增强气道上皮细胞16HBE的增殖活力和和迁移能力（P<0.05）,促进气道上皮细胞16HBE黏蛋白MUC5AC、MUC5B和MUC2的表达,抑制CFTR的表达。三、慢阻肺巨噬细胞外泌体对气道上皮细胞功能影响机制的探讨1.运用生物信息学方法对外泌体mi R-380进行靶基因预测,mi R-380对应的靶基因为囊性纤维化跨膜传导调节因子CFTR。2在气道上皮细胞中构建CFTR-si RNA导致CFTR的低表达;阻断靶基因CFTR后,增强了气道上皮细胞16HBE的增殖活力和迁移能力（P<0.05）。结论慢阻肺肺泡巨噬细胞可增强气道上皮细胞的增殖和迁移能力,促进其黏蛋白及促炎介质白介素-6和肿瘤坏死因子-α的表达;慢阻肺肺泡巨噬细胞来源外泌体mi R-380含量明显上调,气道上皮细胞16HBE的增殖活力和和迁移能力的增强与黏蛋白的表达增加可能与外泌体向气道上皮细胞递送mi R-380,负调控CFTR基因导致CFTR蛋白下调有关。
马凤萍[8]（2020）在《基于Th17/Treg细胞失衡研究补肺汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠TGF-β1、IL-17、IL-6、IL-23的影响》文中研究说明目的:基于Th17/Treg细胞失衡研究补肺汤对慢性阻塞性肺疾病（COPD）大鼠的干预作用,通过检测其血清及支气管肺泡灌洗液中TGF-β1、IL-17、IL-6、IL-23含量变化,探讨补肺汤治疗COPD的可能作用机制,为临床应用补肺汤治疗COPD提供一定的依据。方法:取清洁级SD大鼠共30只,将其随机分成空白组、模型组和中药组,每组10只,利用烟熏70天结合2次气管内滴入脂多糖（LPS）方法复制COPD模型。造模成功后,在第71天开始用中药免煎颗粒补肺汤原方灌胃,连续用药15天后采集相关标本。在整个实验过程中动态观察大鼠的一般状态及体重变化。在末次灌胃后一天,检测大鼠肺功能;采集大鼠肺组织,采用HE染色观察大鼠肺组织病理变化;采集大鼠外周血及支气管肺泡灌洗液,通过ELISA检测TGF-β1、IL-17、IL-6、IL-23的表达。结果:1.各组大鼠一般状况:模型组、中药组体重较空白组偏低,且出现烦躁易激惹情况,在停止熏烟后更为明显,用药后中药组状况较前改善。2.各组大鼠肺组织病理变化:空白组大鼠肺组织情况大致正常,模型组大鼠肺组织可见明显的肺气肿征象,中药组大鼠亦可见肺气肿征象,但较模型组轻微。3.肺功能:与空白组比较,模型组大鼠气道阻力明显升高（P<0.05）,肺顺应性明显降低（P<0.05）;与模型组相比,中药组大鼠气道阻力明显降低（P<0.05）,肺顺应性升高（P<0.05）。4.与空白组比较,模型组大鼠血清TGF-β1表达明显降低（P<0.05）,IL-17、IL-6、IL-23表达均增加（P<0.05）。与空白组相比,模型组大鼠支气管肺泡灌洗液中TGF-β1表达降低（P<0.05）,IL-17、IL-6、IL-23表达均增加（P<0.05）;与模型组相比,中药组大鼠血清TGF-β1表达增加（P<0.05）,IL-17、IL-6、IL-23表达均降低（P<0.05）,中药组大鼠支气管肺泡灌洗液中TGF-β1表达增加（P<0.05）,IL-6表达降低（P<0.05）,IL-23及IL-17表达无明显差异（P>0.05）。结论:补肺汤可以改善COPD大鼠肺部肺气肿病理改变,改善COPD大鼠的肺功能,补肺汤或可通过影响Th17/Treg平衡以调节COPD大鼠的免疫失衡。
王玥琦[9]（2020）在《固本止咳中药方对慢阻肺模型小鼠呼吸道黏膜免疫细胞及因子的影响》文中研究表明背景:慢性阻塞性肺疾病是以不完全可逆的气流受限为特征的阻塞性肺病。急慢性炎症交替持续存在,造成气道重构和肺气肿,表现为劳力性呼吸困难等,为患者的日常生活和社会带来沉重负担。中医药治疗慢阻肺不仅可缓解症状,还能减少急性加重,延缓疾病进展,而其机制缺乏深入研究。黏膜免疫具有重要作用,但中医药对呼吸道黏膜免疫影响机制的研究数量少、处于起步阶段。固本止咳中药方是一个针对慢阻肺稳定期的病机特点,具有扶正祛邪之功效的经验方。前期临床研究表明其能够缓解患者的症状、提高肺功能、调节免疫功能。动物实验研究显示其能够减轻慢阻肺模型小鼠气道炎症,改善肺功能和病理损伤,机制有待进一步研究。目的:1.研究固本止咳中药方对呼吸道黏膜免疫中关键细胞γ δT细胞及其细胞因子KGF的影响,探究其对黏膜免疫功能的影响及扶正祛邪的机制。2.研究固本止咳中药方对循环中及黏膜局部炎症因子的影响,探讨其改善患者症状及疾病进展严重程度的机制。3.为黏膜免疫功能与“卫气”之间的联系、为中医药以扶正固本实现“治未病”以及为从调节黏膜免疫入手治疗慢阻肺提供实验依据。方法:按照固本止咳中药方制作干浸膏,配制成高剂量0.55g生药/ml、中剂量0.28g生药/ml、低剂量0.09g生药/ml。将125只SPF级ICR雌性小鼠随机分为5组:空白对照组、模型对照组、固本止咳中药方高、中、低剂量组,每组25只。采用持续香烟烟雾暴露12周（除第1、29、57天）加经鼻腔向呼吸道滴入LPS溶液（第1、29、57天,共3次）的方法建立慢阻肺小鼠模型,而后两对照组用蒸馏水、中药组用固本止咳中药方溶液灌胃,共4周。造模及药物干预过程中观察其一般生理活动,监测体重。灌胃结束后用小动物肺功能仪测量肺功能。肺组织切片HE染色后观察形态学改变及细胞浸润,评价小鼠造模效果;肺组织切片进行免疫组化染色,检测小鼠肺组织中α βTCR和γ δ TCR表达情况、KGF和KGFR分泌情况;参考小肠黏膜上皮细胞间淋巴细胞分离方法,总结出肺组织淋巴细胞分离方法,用流式细胞术分析其中的αβT细胞和γ δ T细胞群;肺组织匀浆后采用Western Blot方法检测其中的KGF和KGFR蛋白,应用ELISA方法检测KGF蛋白含量,并用RT-PCR法检测KGF的mRNA水平;收集小鼠的血清、支气管肺泡灌洗液和肠黏液,用ELISA方法检测其中的炎性因子IL-6和IL-13水平。结果:1.一般生命质量情况:空白对照组小鼠无死亡,皮毛光泽柔顺,呼吸和缓,频率适中,节律均匀,活动正常,体重逐渐增加;慢阻肺模型组小鼠死亡10只,毛发枯暗,部分有脱毛,熏烟时躁动蹿跳,后期多扎堆蜷缩,甚则全身颤抖,呼吸急促,胸腹部起伏明显,时有不规则点头运动,甚者张口呼吸,体重较空白组明显偏低（P<0.001）。高剂量、中剂量固本止咳中药方组分别死亡1只,低剂量固本止咳中药方组死亡4只,造模期间一般情况同慢阻肺模型组,给予中药灌胃后与模型组相比毛发较顺泽,躁动程度有所减轻,呼吸困难可见改善,频率减缓,高剂量、低剂量固本止咳中药方组体重明显高于模型组（P<0.001）。2.肺组织切片HE染色显示空白对照组小鼠气道和肺泡结构正常,纤毛整齐,肺泡形状、大小规整,气道黏膜上皮完整;模型对照组支气管黏膜皱襞形成、有片状脱落,使管腔变窄或闭塞;肺泡壁破坏,肺泡腔不规则扩大,部分融合成肺大泡,气道周围及肺间质可见炎症细胞浸润,符合慢阻肺病理学表现。经固本止咳中药方治疗的三组与模型对照组对比,可见形态学方面的改善,体现在支气管和肺泡结构较完整,管腔狭窄程度减轻,气道黏膜上皮相对完整,纤毛排列规则、脱落减少,肺泡大小比较均匀,肺大泡数量减少,气道管壁周围及肺间质内炎症细胞浸润程度减轻。3.肺功能测量:模型对照组呼吸系统粘性阻力、弹性阻力明显高于空白对照组（P<0.05）;呼吸系统动态顺应性明显低于空白对照组（P<0.05）。高、中、低剂量固本止咳中药方组呼吸系统粘性阻力明显低于模型对照组（P<0.05）;中剂量固本止咳中药方组弹性阻力明显低于模型对照组（P<0.05）、呼吸系统动态顺应性明显高于模型对照组（P<0.05）。肺组织阻尼模型对照组明显高于空白对照组（P<0.05）;高剂量、低剂量中药组明显低于模型对照组（P<0.05）。准静态顺应性高剂量固本止咳中药方组明显高于模型对照组,准静态弹性量高剂量固本止咳中药方组明显低于模型对照组（P<0.05）。4.肺组织免疫组化染色实验中,空白对照组可见α β T细胞、γ δT细胞均少量存在于肺组织中;模型对照组几乎未见γ δT细胞存在;高、中、低剂量固本止咳中药方组,可见较多γ δ T细胞存在于气管附近,较模型组有明显升高,小鼠肺组织α β T/γ δT细胞比例在模型组较空白对照组升高,固本止咳中药方组较模型组呈降低趋势。5.肺组织淋巴细胞流式分析:小鼠γδT细胞比例在模型组较空白对照组有降低的趋势,低剂量固本止咳中药方组较模型组有明显升高（P<0.05）。6.肺组织切片免疫组织化学染色,空白对照组肺组织中有少量KGF表达;模型对照组少于空白对照组;高、中、低剂量固本止咳中药方组KGF表达明显高于模型组,且稍高于空白对照组。7.Western blot检测结果显示,KGF、FGFR2蛋白表达量模型对照组较空白对照组明显降低（P<0.05）,中剂量固本止咳中药方组KGF表达较模型对照组明显升高（P<0.05）,高剂量固本止咳中药方组、低剂量固本止咳中药方组FGFR2表达较模型对照组明显升高（P<0.05）。8.ELISA检测结果显示,高剂量固本止咳中药方组KGF蛋白含量较模型对照组明显升高（P<0.05）。9.Real Time PCR检测结果显示,KGF蛋白的mRNA含量模型对照组明显低于空白对照组,中、低剂量中药组明显高于模型对照组（P<0.05）。10.小鼠血清中的IL-6含量慢阻肺模型对照组高于空白对照组（P<0.05）,高剂量中药组低于模型对照组（P<0.05）;血清中的IL-13含量各组间未见明显差异。BALF中的IL-6含量慢阻肺模型对照组高于空白对照组（P<0.05）;高剂量中药组与模型组对照组对比无统计学差异,中剂量中药组低于空白对照组、模型对照组以及高剂量中药组（P<0.05）,低剂量中药组低于空白对照组、模型对照组以及高剂量中药组（P<0.05）;BALF中的IL-13含量慢阻肺模型对照组高于空白对照组（P<0.05）,高剂量中药组以及中剂量中药组低于模型组对照组（P<0.05）。肠黏液中的IL-6含量各组间未见明显差异;肠黏液中的IL-13含量慢阻肺模型对照组高于空白对照组（P<0.05）,高、中、低剂量中药组低于模型组对照组（P<0.05）。结论:1.持续香烟烟雾暴露加经鼻腔向呼吸道内滴入LPS溶液的方法造成小鼠肺部形态学病理改变以及肺功能改变与慢阻肺的特征相吻合。2.固本止咳中药方由黄芪、淫羊藿、炒白术、百部、黄芩、赤芍、防风组成,其可以提高慢阻肺模型小鼠生命质量及体重。3.固本止咳中药方可以改善慢阻肺模型小鼠肺组织形态学病理变化。4.固本止咳中药方治疗可减轻慢阻肺模型小鼠呼吸道阻塞程度、提高肺组织顺应性。5.固本止咳中药方明显减低慢阻肺模型小鼠血清和BALF中的IL-6含量以及BALF和肠黏液中的IL-13含量,有效控制气道及全身炎症状态,改善气道及肺组织结构损伤。6.固本止咳中药方通过调节慢阻肺模型小鼠肺组织γ δT细胞比例,促进KGF及KGFR的分泌,加快肺组织损伤的修复,起到改善呼吸道黏膜完整性、增强黏膜免疫功能的作用。与固本止咳中药方通过扶正祛邪、补气助阳、健脾益肾、止咳化痰、活血化瘀,从而增强“卫气”的作用彼此呼应。据此推测,呼吸道黏膜免疫功能是“正气卫外”作用的物质基础之一,中医药通过调节黏膜免疫功能,实现“扶正祛邪”的作用,从而达到延缓疾病进展、减少急性发作的目的,为慢阻肺的治疗提供了新的思路。7.根据肠上皮细胞间淋巴细胞提取方法,在本研究中总结并完善的肺组织淋巴细胞提取分离的实验操作方法,也将为呼吸道黏膜免疫的研究提供实验基础。
王双乐[10]（2020）在《血府逐瘀汤对慢性阻塞性肺疾病TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响》文中进行了进一步梳理目的:慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease,COPD）是临床常见的肺系疾病,以慢性炎症侵犯气道、肺实质及肺血管为主要病理特征。TLR4/MyD88/NF-κB信号通路通过促进气道炎症因子释放、增加黏蛋白分泌,对COPD的发生发展尤为重要。COPD属于中医“肺胀”范畴,血府逐瘀汤在治疗COPD中取得良好疗效,抑制了气道炎症因子释放,但其作用机制目前尚不明确。目前血府逐瘀汤在气道炎症反应及其作用的相关通路的研究较少,本研究以实验小鼠及人体外周静脉血为研究对象,探讨血府逐瘀汤对慢性阻塞性肺疾病TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响及其可能的相关机制,为临床评估及治疗COPD提供更多的理论依据。方法:第一部分:探究血府逐瘀汤对COPD小鼠炎症因子释放及肺组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达的影响:香烟烟熏联合LPS滴鼻法进行COPD小鼠造模,持续造模120天,造模成功后,设置空白对照组、COPD模型组、阳性药物组、血府逐瘀汤低剂量组、血府逐瘀汤中剂量组、血府逐瘀汤高剂量组。给药30天后,观察各组小鼠造模及给药前后日常活动能力,饮食、呼吸频率、分泌物多少、毛色及体重变化。通过HE染色观察比较各组小鼠气管、支气管结构形态的改变、肺泡扩张、变形、融合,肺实质中性粒细胞浸润,血管变形、平滑肌增生等;ELISA检测小鼠肺泡灌洗液（BALF）及血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17水平;免疫组化检测小鼠肺组织TL-R4、MyD88、NF-κB蛋白水平。第二部分:探究血府逐瘀汤对人体外周静脉血单个核细胞（PBMCs）TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的调控:15例COPD患者及15例查体健康者外周静脉采集血液标本,密度梯度离心法分离PBMCs,确定PHA与血府逐瘀汤给药浓度,设置空白+PHA组、空白+PHA+中药组、COPD+PHA组、COPD+PHA+中药组四组。进行细胞培养,通过ELISA法检测 PBMCs 上清液中 TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17 炎症因子水平,RT-PCR、western blot分别检测PBMCs细胞中TLR4、MyD88、NF-κB的mRNA和蛋白表达。结果:第一部分:血府逐瘀汤可以改善COPD小鼠的一般情况,可以防止小鼠过快的呼吸频率,咳嗽减轻、分泌物减少。电镜下HE染色可见血府逐瘀汤各组小鼠小气道、肺泡、血管的病理改变及炎性细胞的聚集均有不同程度的减轻,血府逐瘀汤各剂量组小鼠肺泡灌洗液及血清中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-17的含量较模型组明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。免疫组化观察到血府逐瘀汤各组小鼠肺组织中TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达较模型组更低。第二部分:COPD+PHA+中药组人体外周静脉血PBMCs上清液中TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-17等炎症因子含量较COPD+PHA组明显降低,差异有统计学意义（P<0.05）,IL-6轻度下降,差异无统计学意义（P>0.05）。RT-PCR、western blot结果显示COPD+PHA+中药组人体外周静脉血PBMCs上清液中的TLR4、MyD88、NF-κB蛋白表达较COPD+PHA组明显下降,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:血府逐瘀汤可以减少COPD小鼠血清、肺泡灌洗液及人体外周血单个核细胞内的炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-8、IL-17的水平,其机制可能是通过调控TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,实现对慢性阻塞性肺疾病起到治疗作用。
二、血小板源生长因子和脂多糖对吸烟大鼠小气道平滑肌细胞凋亡的影响（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、血小板源生长因子和脂多糖对吸烟大鼠小气道平滑肌细胞凋亡的影响（论文提纲范文）
（1）补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的临床研究 |
| 资料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 基于网络药理学探讨补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 研究结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构的影响 |
| 实验一 补阳还五汤对慢阻肺合并肺动脉高压大鼠血管重构干预作用的研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 实验二 基于PI3K/Akt信号通路探讨补阳还五汤对PASMCs细胞增殖及凋亡的调控机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 综述 中医药治疗慢阻肺合并肺动脉高压研究进展 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（2）固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述一 扶正固卫、肺主皮毛理论与慢性阻塞性肺疾病呼吸道损伤修复 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 蛋白质组学在中医药中的应用研究 |
| 参考文献 |
| 第一部分 固本止咳中药对COPD模型小鼠的治疗作用和调控呼吸道损伤修复作用研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 基于组学的固本止咳中药调控COPD模型小鼠呼吸道损伤修复机制的整体研究 |
| 前言 |
| 实验一 基于质谱技术的固本止咳中药成分分析 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 实验二 基于蛋白组学的固本止咳中药调控COPD模型小鼠损伤修复机制研究 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 基于JAK-STAT信号通路的固本止咳中药调控COPD模型小鼠呼吸道损伤修复机制研究 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）清源化痰颗粒对COPD小鼠Th17/Treg信号通路调节机制及肠道菌群影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 理论研究 |
| 一、中医对慢性阻塞性肺疾病的认识 |
| 1.1 历代医家对肺胀病名的认识 |
| 1.2 历代医家对肺胀病因病机的认识 |
| 1.3 历代医家对肺胀辨证分型的认识 |
| 1.4 现代医家对慢性阻塞性肺疾病的认识 |
| 二、清源化痰颗粒的方药研究 |
| 2.1 清源化痰颗粒前期研究进展 |
| 2.2 清源化痰颗粒的方药研究 |
| 三、慢性阻塞性肺疾病发病机制研究进展 |
| 3.1 COPD相关炎症机制 |
| 3.2 COPD气道重构机制 |
| 3.3 COPD基因相关的遗传因素 |
| 3.4 免疫衰老和炎性衰老 |
| 四、Th17/Treg与COPD的发病关系 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 实验一 COPD小鼠造模及清源化痰颗粒的治疗作用 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂、药物 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与处理 |
| 2.2 标本采集 |
| 2.3 指标检测与方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 各组小鼠一般情况 |
| 4 小结 |
| 实验二 清源化痰颗粒对COPD小鼠Th17/Treg平衡及其细胞因子的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂、药物 |
| 1.3 仪器设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与处理 |
| 2.2 标本采集与处理 |
| 2.3 指标检测与方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 3.1 清源化痰颗粒对小鼠肺组织Th17细胞分化的影响 |
| 3.2 清源化痰颗粒对小鼠肺组织Treg细胞分化的影响 |
| 3.3 清源化痰颗粒对小鼠肺泡灌洗液、血清中炎症因子含量的影响 |
| 4 小结 |
| 实验三 清源化痰颗粒对COPD小鼠肠道微生态的影响 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验仪器与设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组与处理 |
| 2.2 标本采集与处理 |
| 2.3 指标检测与方法 |
| 2.4 统计分析 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 第三章 讨论 |
| 1.COPD炎症反应及免疫抑制理论 |
| 2.清源化痰颗粒对COPD小鼠Th17/Treg平衡的影响分析 |
| 3.清源化痰颗粒对COPD小鼠肠道菌群的影响 |
| 第四章 结论 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（4）基于“肺与大肠相表里”研究清源化痰颗粒对慢阻肺急性加重期炎症反应及肠道菌群的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 绪论 |
| 第一部分 理论研究 |
| 1. 中医学经典理论研究的价值 |
| 2. 中医学经典理论——肺与大肠相表里 |
| 2.1 阴阳属性 |
| 2.2 气机升降 |
| 2.3 经络络属 |
| 3. “肺与大肠相表里”理论与现代医学的关系 |
| 3.1 胚胎发育同源 |
| 3.2 粘膜免疫相关 |
| 3.3 微生物相互影响 |
| 3.4 神经内分泌联系 |
| 4. 慢阻肺病程中肺与大肠的关系 |
| 5. 前期研究基础 |
| 6. 清源化痰颗粒的组方立义 |
| 7. 本实验的研究意义 |
| 参考文献 |
| 第二部分 临床研究 |
| 1. COPD“从肠治肺”的国内外研究 |
| 1.1 国外研究 |
| 1.2 国内研究 |
| 2. 清源化痰颗粒对“从肠治肺”的继承与发展 |
| 2.1 主要证型 |
| 2.2 临床基础 |
| 3. 清源化痰颗粒整体研究思路 |
| 参考文献 |
| 第三部分 网络药理学研究 |
| 1. 材料与方法 |
| 1.1 清源化痰颗粒中活性化合物的鉴定 |
| 1.2 药物活性成分相关靶标预测 |
| 1.3 确定疾病相关靶标 |
| 1.4 确定“药物-疾病”共同靶点 |
| 1.5 蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络的构建 |
| 1.6 “复方-活性成分-作用靶点”网络的构建 |
| 1.7 G0和KEGG途径富集分析 |
| 2. 结果 |
| 2.1 清源化痰颗粒的有效成分和对应靶标 |
| 2.2 疾病相关靶标 |
| 2.3 药物-疾病靶标 |
| 2.4 PPI目标网络 |
| 2.5 “复方-活性成分-作用靶点”网络 |
| 2.6 富集结果分析 |
| 3. 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分 清源化痰颗粒对慢阻肺急性加重期肺部炎症反应的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 造模及给药 |
| 2.2 小鼠血清、组织及粪便样本的收集 |
| 2.3 观察各组小鼠一般情况 |
| 2.4 组织HE病理染色及肺气肿评价 |
| 2.5 肺泡灌洗液炎性细胞汁数 |
| 2.6 小鼠肺组织免疫荧光检测 |
| 2.7 Western blot检测相关蛋白表达 |
| 2.8 PCR检测肺组织中HMGB1 mRNA、RAGE mRNA的表达水平 |
| 2.9 数据统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 各组小鼠一般情况 |
| 3.2 清源化痰颗粒对小鼠肺组织炎症程度的影响 |
| 3.3 清源化痰颗粒对肺泡灌洗液中性粒细胞的影响 |
| 3.4 清源化痰颗粒对肺组织中性粒细胞凋亡的影响 |
| 3.5 清源化痰颗粒对Casp3、C-casp3、HMGB1、RAGE蛋白表达水平的影响 |
| 3.6 清源化痰颗粒对HMGBlmRNA、RAGEmRNA表达水平的影响 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第五部分 清源化痰颗粒对AECOPD小鼠肠道菌群及代谢产物的影响 |
| 1.实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 造模及给药 |
| 2.2 小鼠粪便样本的收集 |
| 2.3 16S rDNA小鼠粪便菌群测序 |
| 2.4 短链脂肪酸检测 |
| 2.5 数据分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 OUT分析 |
| 3.2 群落组成分析 |
| 3.3 p多样性分析 |
| 3.4物种差异分析 |
| 3.5 短链脂肪酸检测 |
| 3.6 物种与代谢产物相关性分析 |
| 4.讨论 |
| 参考文献 |
| 第六部分 菌群移植对AECOPD小鼠炎症状态的影响 |
| 1. 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 试剂与耗材 |
| 1.3 实验仪器 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 造模及给药 |
| 2.2 小鼠血清、组织及粪便样本的收集 |
| 2.3 实验指标 |
| 2.4 数据统计分析 |
| 3. 结果 |
| 3.1 菌群耗竭模型验证 |
| 3.2 各组小鼠一般情况 |
| 3.3 菌群移植对小鼠肺组织炎症程度的影响 |
| 3.4 清源化痰颗粒对肺泡灌洗液中性粒细胞的影响 |
| 3.5 菌群移植对小鼠Casp3、C-casp3、HMGB1、RAGE蛋白表达水平的影响 |
| 3.6 菌群移植对小鼠HMGB1mRNA、RAGE mRNA表达水平的影响 |
| 4. 讨论 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 附录 |
| 附录A COPD表型相关靶标 |
| 附录B |
| 附录C |
| 附录D 综述 基于“肺与大肠相表里”运用通腑法治疗慢阻肺研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（5）参七化痰方治疗AECOPD临床疗效观察及其含药血清对气道平滑肌细胞RhoA/ROCK信号通路的影响研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 缩略词表 |
| 前言 |
| 第一章 理论研究 |
| 理论研究一 慢性阻塞性肺疾病“虚、痰、瘀”病机及治则治法研究 |
| 1 正气亏虚为根本 |
| 1.1 病变初期,肺脏气虚 |
| 1.2 肺虚日久,子盗母气 |
| 1.3 肺脾及肾,肾失摄纳 |
| 2 痰瘀互结致标实 |
| 2.1 痰饮内伏为慢阻肺病情缠绵的关键 |
| 2.2 瘀血阻络为慢阻肺久治不愈的核心 |
| 3 外感六淫为诱因 |
| 4 小结 |
| 理论研究二 RhoA/ROCK信号通路及其与慢性阻塞性肺疾病相关性研究 |
| 1 Rho A/ROCK信号通路及其结构功能 |
| 1.1 Rho A/ROCK信号转导通路组成 |
| 1.2 Rho A/ROCK信号通路功能 |
| 2 Rho A/ROCK信号通路与COPD气道重塑 |
| 2.1 Rho A/ROCK信号通路与气道炎症 |
| 2.2 Rho A/ROCK信号通路与气道平滑肌细胞 |
| 3 Rho A/ROCK与 MAPK/ERK信号通路之间的联系 |
| 4 小结 |
| 理论研究三 TGF-β1及其与慢性阻塞性肺疾病相关性研究 |
| 1 TGF-β及其结构功能 |
| 2 TGF-β1 及其与COPD相关性研究 |
| 2.1 TGF-β1 |
| 2.2 TGF-β1与COPD气道炎症 |
| 2.3 TGF-β1 与气道平滑肌细胞 |
| 3 小结 |
| 第二章 临床研究 |
| 1 资料 |
| 1.1 病例来源 |
| 1.2 诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 排除标准 |
| 1.5 剔除标准 |
| 2 方法 |
| 2.1 分组方法 |
| 2.2 对照组治疗 |
| 2.3 治疗组治疗 |
| 2.4 观测指标及方法 |
| 2.5 统计学方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 两组基线资料比较 |
| 3.2 两组中医证候疗效比较 |
| 3.3 两组中医主要症状及体征积分比较 |
| 3.4 两组m MRC问卷比较 |
| 3.5 两组肺功能比较 |
| 3.6 两组血清WBC、Neut%、hs-CRP、TGF-β1、ROCK1 比较 |
| 3.7 两组血气分析比较 |
| 3.8 两组凝血指标比较 |
| 3.9 安全性评价 |
| 3.10 TGF-β1 与各指标之间相关性比较 |
| 4 讨论 |
| 4.1 益气活血化痰法的应用及内涵 |
| 4.2 益气活血化痰法治疗慢阻肺急性加重期的依据 |
| 4.3 益气活血化痰法影响相关指标的主要意义 |
| 5 小结 |
| 第三章 实验研究 |
| 实验研究一 参七化痰方含药血清对TGF-β1 刺激的气道平滑肌细胞影响的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 饲养环境 |
| 1.3 实验药品 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 ASMCs的分离、培养及鉴定 |
| 2.2 SQHT配方的制备 |
| 2.3 SQHT含药血清的制备 |
| 2.4 ASMCs的分组及处理 |
| 2.5 CCK-8 检测细胞增殖活力 |
| 2.6 Transwell法检测细胞迁移能力 |
| 2.7 细胞免疫荧光 |
| 2.8 流式细胞术检测细胞凋亡能力 |
| 2.9 Westernblot检测Rho A、ROCK1、ROCK2、Bax、Bcl-2蛋白的变化 |
| 2.10 实时荧光定量PCR |
| 2.11 统计分析 |
| 3.结果 |
| 3.1 ASMCs细胞的鉴定结果 |
| 3.2 不同浓度SQHT含药血清对TGF-β1 刺激下ASMCs增殖影响 |
| 3.3 不同浓度SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs迁移的影响 |
| 3.4 不同浓度SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs细胞骨架重组的影响 |
| 3.5 不同浓度SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs细胞凋亡的影响 |
| 3.6 不同浓度SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs细胞Bax、Bcl-2表达水平的影响 |
| 3.7 不同浓度SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs细胞Rho A、ROCK1、ROCK2 表达水平的影响 |
| 实验研究二 参七化痰方含药血清对TGF-β1 刺激的细胞增殖、迁移、细胞骨架重组及凋亡影响的机制 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 饲养环境 |
| 1.3 实验药品 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 ASMCs的分离、培养及鉴定 |
| 2.2 SQHT配方的制备 |
| 2.3 SQHT含药血清的制备 |
| 2.4 ASMCs的分组及处理 |
| 2.5 CCK-8 |
| 2.6 Transwell |
| 2.7 细胞免疫荧光 |
| 2.8 流式细胞术 |
| 2.9 Western blot |
| 2.10 实时荧光定量PCR |
| 2.11 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs细胞增殖的影响 |
| 3.2 SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs细胞迁移的影响 |
| 3.3 SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs细胞骨架重组的影响 |
| 3.4 SQHT对 TGF-β1 刺激下ASMCs细胞凋亡率的影响 |
| 3.5 SQHT与抑制剂法舒地尔对TGF-β1 刺激下ASMCs细胞Bax、Bcl-2 表达水平的影响 |
| 3.6 SQHT与抑制剂法舒地尔对TGF-β1 刺激下ASMCs细胞Bax m RNA、Bcl-2 m RNA表达水平的影响 |
| 实验研究三 基于Rho A/ROCK与MAPK/ERK信号通路研究参七化痰方含药血清对TGF-β1 刺激的气道平滑肌细胞影响的分子机制 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 饲养环境 |
| 1.3 实验药品 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 ASMCs的分离、培养及鉴定 |
| 2.2 SQHT配方的制备 |
| 2.3 SQHT含药血清的制备 |
| 2.4 ASMCs的分组及处理 |
| 2.5 Western blot |
| 2.6 实时荧光定量PCR |
| 2.7 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SQHT与抑制剂法舒地尔对TGF-β1 刺激下ASMCs细胞Rho A、ROCK1、ROCK2 表达水平的影响 |
| 3.2 SQHT与抑制剂法舒地尔对TGF-β1 刺激下ASMCs细胞Rho A m RNA, ROCK1 m RNA, ROCK2 m RNA表达水平的影响 |
| 3.3 SQHT与抑制剂法舒地尔对TGF-β1 刺激下ASMCs细胞ERK1/2、p-ERK1/2 表达水平的影响 |
| 实验研究四 参七化痰含药血清对TGF-β1 刺激的气道平滑肌细胞Snail、Slug、MMP-9、TIMP-1 水平的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 饲养环境 |
| 1.3 实验药品 |
| 1.4 实验试剂 |
| 1.5 实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 ASMCs的分离、培养及鉴定 |
| 2.2 SQHT配方的制备 |
| 2.3 SQHT含药血清的制备 |
| 2.4 ASMCs的分组及处理 |
| 2.5 Western blot检测Snail、Slug水平的变化 |
| 2.6 实时荧光定量PCR检测Snail、Slug水平的变化 |
| 2.7 酶联免疫吸附试验定量测定MMP-9、TIMP-1 水平的变化 |
| 2.8 统计分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 SQHT与抑制剂法舒地尔对TGF-β1 刺激下ASMCs细胞Snail、Slug蛋白表达水平的影响 |
| 3.2 SQHT与抑制剂法舒地尔对TGF-β1 刺激下ASMCs细胞Snail m RNA、Slug m RNA表达水平的影响 |
| 3.3 SQHT与抑制剂法舒地尔对TGF-β1 刺激下ASMCs细胞培养上清液MMP-9、TIMP-1 水平的影响 |
| 4 讨论 |
| 4.1 参七化痰方的配伍及其内涵 |
| 4.2 参七化痰方的拆方分析及现代药理 |
| 4.3 参七化痰方影响相关指标的主要意义 |
| 第四章 结论 |
| 创新点 |
| 不足与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 益气活血化痰法治疗 AECOPD 的临床疗效观察表 |
| 综述 中西医结合治疗慢性阻塞性肺疾病的切入点述评 |
| 综述参考文献 |
| 个人简介 |
| 致谢 |
| 攻读博士学位期间发表专着论文及参与课题情况 |
（6）甘草及甘草酸类成分抗病毒性肺炎的药理作用研究进展（论文提纲范文）
| 1 抗呼吸道病毒 |
| 1.1 抗冠状病毒 |
| 1.2 抗流感病毒 |
| 1.2.1 甘草提取物 |
| 1.2.2 甘草酸类 |
| 1.3 抗呼吸道合胞病毒 |
| 1.4 抗猪繁殖与呼吸综合征病毒和人巨细胞病毒 |
| 1.4.1甘草水煎剂 |
| 1.4.2 甘草酸二铵及甘草酸 |
| 2 止咳祛痰 |
| 2.1 甘草水提物 |
| 2.2 甘草酸二铵及甘草酸 |
| 3 平喘 |
| 3.1 甘草水煎剂及提取物 |
| 3.2 甘草酸类成分 |
| 3.3 临床应用 |
| 4 肺保护作用和抗肺纤维化 |
| 4.1 抗急性肺损伤 |
| 4.1.1 甘草水煎剂 |
| 4.1.2 甘草黄酮类成分 |
| 4.1.3 甘草酸类成分 |
| 4.1.4 临床应用 |
| 4.2 抗慢性肺损伤和肺纤维化 |
| 4.2.1 抗肺纤维化 |
| 4.2.2 防治慢性阻塞性肺疾病 |
| 4.2.3 临床应用 |
| 5 结语 |
（7）慢阻肺肺泡巨噬细胞来源外泌体对气道上皮细胞增殖能力的影响及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 慢阻肺来源肺泡巨噬细胞对气道上皮细胞的作用 |
| 一、实验材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、小结 |
| 第二部分 慢阻肺肺泡巨噬细胞来源的外泌体对气道上皮细胞功能的影响 |
| 一、实验材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、小结 |
| 第三部分 慢阻肺巨噬细胞外泌体对气道上皮细胞功能影响机制的探讨 |
| 一、实验材料和方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 外泌体在慢阻肺发病机制及诊治中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 |
| 致谢 |
（8）基于Th17/Treg细胞失衡研究补肺汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠TGF-β1、IL-17、IL-6、IL-23的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词 |
| 引言 |
| 第一部分 实验材料与方法 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验环境 |
| 1.3 实验饲料 |
| 1.4 实验药物 |
| 1.4.1 造模 |
| 1.4.2 实验药物 |
| 1.5 主要试剂 |
| 1.6 主要仪器及设备 |
| 2 实验方法 |
| 2.1 分组 |
| 2.2 造模 |
| 2.3 用药 |
| 2.4 取材 |
| 2.4.1 肺功能测量 |
| 2.4.2 大鼠血清标本取材及处理 |
| 2.4.3 大鼠支气管肺泡灌洗液获取 |
| 2.4.4 大鼠肺组织摘取及处理 |
| 2.5 观察及检测相关指标 |
| 2.5.1 大鼠一般情况 |
| 2.5.2 大鼠肺功能检测 |
| 2.5.3 大鼠肺组织HE染色观察病理情况 |
| 2.5.4 大鼠血清ELISA检测 |
| 2.5.4.1 试剂配制 |
| 2.5.4.2 操作步骤 |
| 2.5.4.3 数据处理 |
| 2.5.5 大鼠支气管肺泡灌洗液ELISA检测 |
| 2.7 数据统计 |
| 第二部分 实验结果 |
| 1 大鼠一般状况 |
| 2 大鼠肺组织形态观察 |
| 3 大鼠肺功能 |
| 4 大鼠血清TGF-β1、IL-17、IL-6、IL-23 检测结果 |
| 5 大鼠支气管肺泡灌洗液TGF-β1、IL-17、IL-6、IL-23 检测结果 |
| 第三部分 讨论 |
| 1 COPD的发病机制 |
| 2 Th17/Treg细胞失衡与COPD的关系 |
| 3 中医对COPD的认识 |
| 4 补肺汤的组方及现代药理学分析 |
| 5 补肺汤对COPD大鼠影响的探讨 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 慢性阻塞性肺疾病肺气肿的形成机制研究进展 |
| 参考文献 |
（9）固本止咳中药方对慢阻肺模型小鼠呼吸道黏膜免疫细胞及因子的影响（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 符号说明 |
| 综述 呼吸道黏膜免疫系统在慢阻肺中的作用及中医药的作用机制研究进展 |
| 一、慢阻肺的疾病概述 |
| 二、慢阻肺中的病理变化导致了疾病的后果 |
| 三、呼吸道黏膜免疫系统在慢阻肺中起到重要作用 |
| 1.黏膜免疫系统概述 |
| 2.黏膜免疫系统在全身以网络方式运作 |
| 3.黏膜定居的微生物群影响黏膜免疫系统的功能 |
| 4.上皮细胞在黏膜免疫作用中表现出多种生物学特性 |
| 5.黏膜免疫中的免疫球蛋白S-IgA通过多种作用保护黏膜 |
| 6.黏膜免疫系统的防御和保护作用对于呼吸道至关重要 |
| 7.黏膜免疫中的关键细胞——γδT细胞 |
| 四、慢阻肺中的炎症损伤 |
| 1.香烟烟雾对肺组织损伤的作用机制 |
| 2.慢阻肺患者存在系统性炎症 |
| 3.慢阻肺的免疫反应 |
| 五、角质细胞生长因子的作用及其在慢阻肺中的作用机制 |
| 六、中医药对黏膜免疫的作用机制研究进展 |
| 1.增强黏膜屏障功能 |
| 2.调节黏膜免疫细胞及其成分 |
| 3.对呼吸道黏膜免疫作用的研究 |
| 七、小结与展望 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 材料和方法 |
| 一、实验材料 |
| 1.实验小鼠 |
| 2.实验试剂 |
| 3.仪器 |
| 二、方法 |
| 1.技术路线图 |
| 2.实验动物分组 |
| 3.固本止咳中药方药物的制备 |
| 4.慢阻肺小鼠模型建立及给药方法 |
| 5.小鼠肺功能检测 |
| 6.小鼠支气管肺泡灌洗液、血清、肠黏液标本收集 |
| 7.小鼠肺组织形态学标本采集及处理 |
| 8.小鼠肺组织γδT淋巴细胞分离及流式细胞仪检测 |
| 9.小鼠肺组织切片T淋巴细胞受体免疫组化染色 |
| 10.小鼠血清、BALF、肠黏液中炎症因子含量检测 |
| 11.小鼠肺组织中KGF及KGFR的检测 |
| 12.统计方法 |
| 结果 |
| 一、固本止咳中药方提高慢阻肺模型小鼠生命质量及体重 |
| 二、固本止咳中药方改善慢阻肺模型小鼠肺组织形态学病理变化 |
| 三、固本止咳中药方减轻小鼠呼吸道阻塞程度、提高肺组织顺应性 |
| 四、固本止咳中药方降低慢阻肺模型小鼠肺组织αβT/γδT细胞比例 |
| 五、固本止咳中药方增加慢阻肺模型小鼠肺组织KGF及KGFR含量 |
| 1.免疫组织化学染色实验结果表明固本止咳中药方增加小鼠肺组织KGF含量 |
| 2.Western blot检测结果表明固本止咳中药方可增加小鼠肺组织KGF、FGFR2蛋白表达 |
| 3.ELISA方法检测结果表明固本止咳中药方增加慢阻肺模型小鼠肺组织KGF蛋白表达 |
| 4.Real Time PCR检测结果表明固本止咳中药方增加慢阻肺模型小鼠肺组织KGF的mRNA含量 |
| 六、固本止咳中药方增加小鼠血清、肺泡灌洗液中的IL-6含量和肺泡灌洗液、小肠黏液中的IL-13含量 |
| 讨论 |
| 一、中医对慢阻肺的认识 |
| 二、固本止咳中药方的组方及成分药理分析 |
| 三、中医理论中“肺卫”之屏障防御作用与黏膜免疫功能具有相关性 |
| 1.现代医学免疫功能与中医理论之“正气”功能相同 |
| 2.正气中的肺卫之气具有护卫人体的屏障作用 |
| 3.卫气与黏膜免疫在位置结构、性质和作用机制上均有相似性 |
| 四、中医药增强卫气的机制为增强黏膜免疫机械屏障、调节黏膜免疫细胞及因子 |
| 五、黏膜免疫是呼吸系统免疫的首道防线,其中的γδ T细胞与慢阻肺有关 |
| 六、固本止咳中药方可通过下调慢性炎症介质细胞因子减轻慢阻肺炎症反应 |
| 七、固本止咳中药方可通过上调γδT细胞比例减轻慢阻肺的炎症反应、促进组织修复 |
| 八、固本止咳中药方可促进KGF分泌从而有助于慢阻肺中的组织修复 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（10）血府逐瘀汤对慢性阻塞性肺疾病TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 前言 |
| 第一章 理论研究 |
| 1. 中医对慢性阻塞性肺疾病的认识 |
| 1.1 病名 |
| 1.2 症候 |
| 1.3 病因 |
| 1.4 病机 |
| 1.5 辨证论治 |
| 1.6 现代医家的发展 |
| 1.7 血府逐瘀汤方药研究 |
| 2. 慢性阻塞性肺疾病的现代研究进展 |
| 2.1 定义及现状 |
| 2.2 病因 |
| 2.3 发病机制 |
| 2.4 诊断 |
| 2.5 治疗 |
| 3. TLR4/MyD88/NF-κB信号通路目前研究进展 |
| 第二章 实验研究 |
| 1. 动物实验 |
| 1.1 实验材料 |
| 1.2 实验方法 |
| 1.3 观察指标 |
| 1.4 统计学方法 |
| 1.5 动物实验技术路线图 |
| 1.6 实验结果 |
| 1.7 小结 |
| 3. 人体外周血实验 |
| 3.1 临床资料 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.3 实验与方法 |
| 3.4 统计学处理 |
| 3.5 人体外周血实验技术流线图 |
| 3.6 结果与分析 |
| 3.7 小结 |
| 第三章 讨论 |
| 1. COPD免疫抑制及炎症反应的理论讨论 |
| 2. 血府逐瘀汤对COPD小鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响分析 |
| 3. 血府逐瘀汤对人体外周静脉血TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响分析 |
| 第四章 结论 |
| 第五章 问题与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 |
| 致谢 |
四、血小板源生长因子和脂多糖对吸烟大鼠小气道平滑肌细胞凋亡的影响（论文参考文献）
- [1]补阳还五汤治疗慢阻肺合并肺动脉高压临床及机制研究[D]. 秦一冰. 辽宁中医药大学, 2021(02)
- [2]固本止咳中药对COPD模型小鼠呼吸道损伤修复的调控机制研究[D]. 王明哲. 北京中医药大学, 2021(01)
- [3]清源化痰颗粒对COPD小鼠Th17/Treg信号通路调节机制及肠道菌群影响[D]. 吴叶. 南京中医药大学, 2021(01)
- [4]基于“肺与大肠相表里”研究清源化痰颗粒对慢阻肺急性加重期炎症反应及肠道菌群的影响[D]. 薛佳茜. 南京中医药大学, 2021(01)
- [5]参七化痰方治疗AECOPD临床疗效观察及其含药血清对气道平滑肌细胞RhoA/ROCK信号通路的影响研究[D]. 陈晶晶. 安徽中医药大学, 2021(01)
- [6]甘草及甘草酸类成分抗病毒性肺炎的药理作用研究进展[J]. 张明发,沈雅琴. 药物评价研究, 2020(07)
- [7]慢阻肺肺泡巨噬细胞来源外泌体对气道上皮细胞增殖能力的影响及机制研究[D]. 范韵鑫. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [8]基于Th17/Treg细胞失衡研究补肺汤对慢性阻塞性肺疾病大鼠TGF-β1、IL-17、IL-6、IL-23的影响[D]. 马凤萍. 湖南中医药大学, 2020(03)
- [9]固本止咳中药方对慢阻肺模型小鼠呼吸道黏膜免疫细胞及因子的影响[D]. 王玥琦. 北京中医药大学, 2020(04)
- [10]血府逐瘀汤对慢性阻塞性肺疾病TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的影响[D]. 王双乐. 南京中医药大学, 2020(08)