一、心肺复苏后大鼠脑神经元中NF-кB的表达（论文文献综述）
武健[1]（2021）在《右美托咪定对心肺复苏后大鼠脑损伤的作用及机制研究》文中进行了进一步梳理目的:构建大鼠心肺复苏模型,观察右美托咪定对心肺复苏后脑损伤的病理改变和炎症反应的影响,探讨右美托咪定对心肺复苏后脑损伤保护作用机制。方法:选取81只雄性、健康wistar大鼠,采用随机数字表法将所有大鼠随机分为3组（n=27）:包含S组（Sham假手术组）、M组（常规复苏模型组）和D组（复苏后右美托咪定治疗组）。麻醉选用3%的戊巴比妥钠溶液,采用腹腔注射的方法麻醉大鼠,经口实施气管插管,予以10分钟稳定生命体征。S组大鼠完成气管插管后,保持气管通畅不夹闭,M组和D组大鼠完成插管后,用止血钳夹闭气管导管,窒息诱发心脏骤停,在判断心跳停搏2分钟后,采用胸外按压法进行心肺复苏,建立大鼠窒息后心肺复苏模型。D组在心肺复苏成功后,给予右美托咪定4μg/kg的负荷量经尾静脉注射,其他组给予等容量生理盐水进行尾静脉注射。在复苏后第24h、48h、72h小时三个时间点,分别对各组大鼠进行复苏后脑损伤程度的神经功能评分,随后处死大鼠,对复苏后大鼠脑组织的病理改变进行如下研究:（1）脑干/湿重比测脑水肿程度。（2）HE染色和透射电子显微镜（TEM）观察分析各组大鼠脑细胞结构病理性损伤情况。（3）TUNEL检测观察大鼠神经细胞凋亡情况。（4）ELISA法测定用来检测IL-1、IL-6、IL-10、TNF-ɑ的水平。（5）蛋白质印迹法（Western Blot）对大鼠海马组织应激凋亡蛋白的表达状况进行测定。结果:（1）在复苏后24、48、72小时分别对神经功能损伤程度进行评分,可见M组和D组的评分均明显低于S组(AvsB,P<0.05),M组评分在各时间点均明显低于D组（P<0.05）;（2）M组脑含水量在复苏术后24、48和72小时均明显比S组高（P<0.05）,而D组与S组比较,无显着差异（P>0.05）;（3）HE染色和TEM观察结果表明:与S组比较,M组与D组大鼠脑组织均出现不同程度的病理性损伤,其中,D组中脑组织结构较M组有显着改善;（4）TUNEL染色显示:在神经细胞凋亡率方面,相较S组,M组与D组皆明显偏高（P<0.05）,且D组脑神经细胞凋亡率则明显少于M组（P<0.05）;（5）ELISA测定:在大鼠海马组织中促炎因子IL-1、IL-6、TNF-ɑ水平方面,M组较S组出现明显升高,与S组差异显着（P<0.05）;与M组相比,D组脑组织促炎因子水平均低,抗炎因子水平则明显升高,统计学差异明显（P<0.05）;（6）Western blotting分析:凋亡相关的信号分子TLR-4,NF-kb,Caspase-3和BAX的表达,M组明显高于S组（P<0.05）,而D组蛋白表达明显低于M组（P<0.05）。结论:右美托咪定通过抑制心肺复苏后脑组织炎症反应和脑细胞凋亡,减轻脑损伤和脑水肿,起到对心肺复苏后脑损伤的保护作用。
胡海霞[2]（2021）在《舒芬太尼对大鼠心肺复苏后脑保护作用及其机制探讨》文中提出背景和目的随着心血管疾病的逐渐年轻化,心血管疾病的发病率逐年升高,进而引发的心源性猝死也越来越多。尽管国际心肺复苏指南也逐年不断地升级和完善,但是经过心肺复苏,自主循环恢复后的患者死亡率仍居高不下,脑复苏成功与否一直以来都是临床关注的焦点及难点,现阶段国际心肺复苏相关领域的学科代表们共同接受的是“心搏骤停后综合征”（post-cardiac arrest syndrome,PCAS）这一概念,它涵盖了对心搏骤停患者恢复自主循环后的病理生理、治疗及预后的一系列的阐述。主要的重点指出患者在心搏骤停后重新恢复自主循环时即宣告了之前复苏行为的结束,但同时也是另一个更为复杂的复苏阶段的开始。心肺复苏（Cardiopulmonary Resuscitation,CPR）成功后通过对心脏骤停后复苏病理生理机制的研究,寻求更有效的治疗措施,可以改善心搏骤停（cardiac arrest,CA）患者的出院存活率及神经预后。自主循环恢复后,造成神经系统损害因素很多,其中以发病初期的缺血性损害和再灌注后的再灌注损伤为主要因素,在这个过程中,机体发生强烈的氧化应激反应,神经、内分泌、血管活性物质都发生了剧烈改变并导致多脏器功能障碍,其中脑组织对缺氧极其敏感,损害更为突出,所以CA后的脑损害不仅是CPR后的表现,也是导致死亡率升高的主要原因之一。大多数幸存者复苏后表现为昏迷,或最终造成不可逆的慢性伤残。如多数患者存在语言、知觉、运动等方面不同程度的脑神经功能缺陷,部分患者甚至处于植物状态或死亡,远期预后不容乐观。研究已经证明了,CPR后脑损伤与脑组织缺血再灌注后一系列病理生理变化密切相关。缺血、缺氧是导致心肺复苏后神经功能损伤的始动因素,包括氧自由基（ROS）的释放、钙超载、兴奋性氨基酸蓄积、细胞死亡通路激活在内的一系列级联反应。近些年来研究比较热门的细胞凋亡与线粒体结构和功能损伤存在密切关系。线粒体膜通透性转化孔（mPTP）开放后释放出细胞色素C（Cyt C）和凋亡诱导因子（AIF）,胞质中半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）和半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）增加,诱导神经细胞凋亡。加速了神经细胞死亡,使神经系统发生不可逆性损伤。而导致线粒体膜通透性转化孔持续开放的决定性因素是ROS的大量产生及钙超载,由此可见机体的抗氧化机制在整个损伤过程中起到关键性自我保护机制,发挥抗氧化作用,以降低此种级联反应,减少神经细胞凋亡。随着对一系列分子机制的认识和研究,研究者们又发现机体为了对抗这些氧化应激所产生的自由基和有毒物质,自身也形成了一套复杂的应答系统,诱导生成一系列的保护蛋白,来缓解细胞损害。这种反射是由编码保护性蛋白DNA上游调节区的抗氧化反应元件来调控的（ARE）。近年来的研究发现,核因子NF-E2相关因子（Nrf2）通过与ARE相互作用调节编码抗氧化蛋白,是目前为止发现的最为重要的内源性抗氧化应激通路。Nrf2结合抗氧化反应元素（ARE）可激活下游一系列分子的表达,目前为止已证实Nrf2/ARE信号通路可编码的保护性基因有氧化蛋白类基因、Ⅱ相解毒酶基因、分子伴侣类基因和抗炎因子类基因,基因对应编码的蛋白有常见的抗氧化蛋白酶:HO-1血红素氧合酶Ⅰ;γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶;超氧化物歧化酶（SOD）;依赖还原型辅酶/Ⅱ琨氧化还原酶等。抗氧化酶类通过催化自由基转化为无毒物质和增加其水溶性利于自由基排除而发挥抗氧化作用,是维持机体氧化还原平衡的重要因素。正常情况下,细胞浆中Nrf2与Keap1相结合,被泛素降解,在氧化应激条件下,Keap1特定的半胱氨酸残基被修饰,半胱氨酸残基的存在是Nrf2活化分子的一个共同特征。Nrf2与Keap1解离被释放出来,进入到细胞核中,与ARE结合后,诱导保护基因的转录及表达,激活防御系统。磷酸化信号转导通路的激活也可能刺激Nrf2依赖性细胞防御,导致构象的改变,Nrf2因子免于泛素化降解,在磷酸化产物如PI3K等的参与下,诱导Nrf2发生磷酸化,随着我们实验组对该通路研究的深入化,我们发现在该通路活化过程中,磷酸化产物（PI3K）诱导Nrf2磷酸化,调节转录的作用至关重要,而磷酸化产物PI3K是PI3K/AKT通路活化后的产物。所以磷酸化PI3K/AKT通路活化后参与Nrf2/ARE信号通路的过程是真实存在的。目前研究比较明确的是蛋白激酶C（protein kinase C,PKC）致使Nrf2域的Ser-40磷酸化,能导致Nrf2和Keap1的解离。酪氨酸激酶Fyn致使Nrf2分子上Tyr-568磷酸化后,可使Nrf2从核中移出。于是我们设想在机体发生氧化应激时,应用促进PI3K/AKT通路磷酸化的药物是否可以在更大程度上上调Nrf2/ARE信号通路,发挥抗氧化应激作用,达到脑保护的目的?带着这样的研究思路和目的,我们经过查阅大量文献发现舒芬太尼这个药物具有更强的促进PI3K/AKT通路磷酸化的作用。它主要作用于μ阿片受体,亲脂性高,相对于芬太尼具有更容易透过血脑屏障等优势。大量实验研究证实舒芬太尼可以激活PI3K/AKT信号通路（磷脂酰肌醇-3-激酶-苏氨酸激酶）,抑制线粒体通透膜转化孔的开放。且有很多实验证明舒芬太尼在心肌缺血再灌注中发挥了重要的心肌细胞保护作用,减少心肌细胞凋亡,发挥细胞保护作用,但是其在治疗心肺复苏后脑缺血再灌注损伤中的具体作用及分子生物学机制文献报道较少。目前有少数报道发现瑞芬太尼处理后的缺血再灌注老年大鼠神经髓鞘碱性蛋白表达减少,进而降低了神经元损伤,由此推测瑞芬太尼存在脑保护作用,具体机制仍不明确。我们通过前期的实验研究发现Nrf2/ARE信号通路和PI3K/AKT通路的内在联系,PI3K/AKT通路活化后的磷酸化产物PI3K参与Nrf2/ARE信号通路的上调,从而增加抗氧化应激保护性蛋白如NQO-1和SOD的表达,降低了细胞内氧化应激损伤,使线粒体膜保留完整性,抑制线粒体通透膜转化孔（mPTP）开放,减少细胞凋亡的发生,从而发挥脑保护作用。所以舒芬太尼通过激活PI3K/AKT通路进而上调Nrf2/ARE信号通路,有可能通过降低氧自由基产生和减少神经细胞凋亡途径而达到改善心肺复苏术后脑组织病理生理过程和改善预后的目的。本研究的目的:1、通过窒息法建立可靠稳定的大鼠心肺复苏模型。2、对应用舒芬太尼处理的心肺复苏后存活大鼠检测神经细胞凋亡的发生情况及凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）、半胱氨酸蛋白酶-9（caspase-9）的变化,测定Bcl-2和Bax及二者的比值变化,炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的变化,同时对大鼠进行神经功能mNSS评分和空间学习能力评分,探讨舒芬太尼对心肺复苏后大鼠神经元凋亡的影响及发挥脑保护作用的可能机制。3、复苏成功后大鼠一组给予应用舒芬太尼进行处理,另一组在应用舒芬太尼同时给予PI3K/AKT磷酸化特异性抑制剂,对比大鼠海马区磷酸化产物含量变化及Nrf2/ARE通路的相关蛋白表达关系,Nrf2/ARE通路表达的蛋白包括抗氧化应激产物醌氧化还原酶（NQO-1）和超氧化物歧化酶（SOD）含量的测定;此外反应氧化应激产物8-异前列腺素f 2α（8-iso pgf2α）和8-羟基-2’-脱氧鸟苷（8-ohdg）含量的测定,进一步探讨舒芬太尼在心肺复苏后大鼠脑组织中是否上调Nrf2/ARE通路的表达,进而发挥脑保护作用,并探讨其可能的机制;第一部分 窒息法建立大鼠心脏骤停模型目的:通过窒息法建立大鼠心脏骤停（cardiac arrest,CA）模型。方法:实验地点在吉林大学基础医学院动物实验室,选择30只健康成年雄性SD大鼠,体重260-320g。分笼饲养,4只/笼。饲养环境维持在室温23±2℃,湿度在40%-70%,12h明/暗周期,实验期间大鼠自由摄食和饮水。在进行实验前,所有大鼠饲养1周以适应实验室环境。所有的动物实验均遵照国家实验动物饲养和使用指南。实验分组,分为窒息6min组15只和窒息7min组15只。大鼠称体重,用2-5%的异氟醚和氧气混合物（100%氧气中含有2-5%的异氟醚）麻醉大鼠。完全麻醉后固定,在腹股沟区暴露股静脉建立静脉通路,连续注入盐水（以0.1ml/h的速度）,以维持基线血压和液体平衡。持续监测体温并维持在37℃,有加热垫和外置加热灯。颈部正中切口,分离右侧颈动脉置管接压力换能器行血压监测,并常规行心电图监测,分离气管,气管切开后插管,然后等待大鼠血压、心率稳定后,在大鼠呼气末夹闭气管插管,CA发生后及开始给予纯氧机械通气（频率80次/分,潮气量6ml/kg）,同时由机械按压机进行胸外心脏按压,按压频率为200次/分,深度为大鼠胸廓前后径的1/3,同时经股静脉推注0.02mg/kg肾上腺素,按压直至自主循环恢复（ROSC）。持续行CPR 10min仍未恢复自主循环者,定位心肺复苏失败。结果:我们将实验中的30只大鼠全部诱发CA成功,每组各15只大鼠,从夹闭气管造成窒息开始至CA发生的时间是（324±38）s。在整个窒息过程中,我们发现,当窒息达到6min时,所有大鼠颈动脉血压监测均迅速下降到25mmHg以下,搏动波形消失,达到CA标准,其中窒息6min组心室颤动（VF）发生率为66.7%（10只/15只）,电机械分离20%（3只/15只）,心脏停搏13.3%（2只/15只）;窒息达7min组,大鼠心室颤动（VF）26.6%（4只/15只）,电机械分离46.7%（7只/15只）,完全停搏率26.7%（4只/15只）;组间比较,随着窒息时间的延长,大鼠心电图发生室颤数量减少,出现电机械分离和心脏停搏的数量逐渐增多,（P<0.05）,差异有显着性。同时窒息6min组进行CPR在5分钟内恢复ROSC率较高,当窒息达到7min时,大鼠绝大多数发生了心脏停博,而此时行CPR需要的时间也相应延长。两者存在显着性差别（P<0.05）。复苏成功后大鼠的6小时、3天、7天生存率可见窒息6min组明显高于窒息7min组,存在显着差异（P<0.05）。结论:6min即可诱发实验大鼠达到CA的模型,是心肺复苏模型较为理想的窒息时间,此窒息成功模型CPR在5min之内ROSC的大鼠比例高,且无论是6小时生存率,3天生存率及7天生存率都比窒息7min大鼠明显增高。窒息6min的模型建立更加稳定,方便实验研究。第二部分 舒芬太尼对心肺复苏后大鼠神经元凋亡的影响目的:探讨舒芬太尼是否具有抑制神经元凋亡,改善大鼠的神经缺陷和空间学习能力而发挥脑保护作用及其可能机制方法:健康成年雄性SD大鼠,体重260-320g。所有动物均获得吉林大学动物伦理委员会的批准。实验动物分笼饲养,四只/笼。饲养环境维持在室温23±2℃,湿度在40%-70%,12h明/暗周期,实验期间大鼠自由摄食和饮水。在进行实验前,所有大鼠饲养1周以适应实验室环境。所有的动物实验均遵照国家实验动物饲养和使用指南。将性别、鼠龄、和体重互相匹配大鼠,随机分成四组,第1组对照组（N=20）:大鼠接受同样的手术,气管插管,不给予窒息和心肺复苏术。第2组模型组（N=30）:进行CA和CPR,并给予0.5ml生理盐水/12h（7天）。第3组舒芬太尼组（N=30）:进行CA和CPR,并在CA后注射1.0μg/kg/12h的舒芬太尼（7天）。第4组舒芬太尼+PI3K特异性抑制剂组（N=30）:进行CA和CPR,并在CA后注射1.0μg/kg/12h体重的舒芬太尼,同时静脉注射PI3K特异性抑制剂wortmannin 15μg/kg/12h（7天）。将实验大鼠处死后,提取大鼠脑内海马组织,应用Western Blot免疫印迹法和ELISA法检测海马与细胞凋亡相关的caspase-3、caspase-9、Bcl-2、Bax蛋白的相对表达,以及海马组织炎症介质白介素-1β（IL-1β）,白介素-6（IL-6）,肿瘤坏死因子（TNF-α）含量。采用改良的神经严重程度评分（mNSS）和空间工作记忆评分（spatial workingmemory performance）评价大鼠神经功能缺陷。结果:1)、舒芬太尼对心肺复苏术后大鼠进行处理后,大鼠海马区caspase-3和caspase-9表达下降,海马组织Bcl-2表达增加、Bax表达下调,Bax/Bcl-2比值下降,对应的神经元凋亡指数降低,炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量降低,与心肺复苏组相比较差异有显着性p<0.05;而应用PI3K特异性抑制剂组可见caspase-3和caspase-9表达增加,海马组织Bcl-2表达减少、Bax表达上调,Bax/Bcl-2比值上升,对应的神经元凋亡指数增加,炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α含量增加;与舒芬太尼组比较差异有显着性p>0.05;2)、舒芬太尼组大鼠细胞凋亡指数下降的同时,大鼠在mNSS评分及空间学习能力均较其他组有显着差异p<0.05。而PI3K特异性抑制剂组与CA组比较,差异无显着性p>0.05;结论:舒芬太尼能够抑制海马CA1区神经元病变,抑制该区域神经元凋亡、降低凋亡指数,上调海马组织Bcl-2表达、下调Bax表达,使Bax/Bcl-2比值下降,下调海马组织Caspase-3、Caspase-9蛋白表达,降低炎症细胞因子IL-（β、IL-6、TNF-α含量;在减轻脑缺血再灌注损伤方面发挥了脑保护作用。而磷酸化作用被抑制后,则神经元凋亡增加,海马组织Caspase-3、Caspase-9蛋白表达,使Bax/Bcl-2比值上升;由此得出舒芬太尼抑制神经元凋亡,发挥脑保护作用的可能机制与舒芬太尼对PI3K/Akt信号通路的磷酸化相关,激活Akt蛋白磷酸化,使下游一系列凋亡蛋白的活性发生变化相关,进而发挥脑保护作用。第三部分 大鼠心肺复苏后应用舒芬太尼对P13K/AKT及Nrf2/ARE信号通路的影响目的:1、探讨舒芬太尼处理心肺复苏后大鼠,是否增加了神经细胞PI3K/AKT通路的磷酸化,同时上调Nrf2/ARE信号通路的表达。2、应用PI3K/AKT特异性磷酸化抑制剂后,测定磷酸化产物含量的变化及与Nrf2/ARE信号通路表达的关系,进而推测舒芬太尼对PI3K/AKT通路的磷酸化受抑制后是否Nrf2/ARE信号通路的上调作用也随之降低,验证舒芬太尼参与Nrf2/ARE通路活化的可能机制及与PI3K/AKT通路的磷酸化相关。方法:健康成年雄性SD大鼠,体重260-320g。所有动物均获得吉林大学动物伦理委员会的批准。实验动物分笼饲养,四只/笼。饲养环境维持在室温23±2℃,湿度在40%-70%,12h明/暗周期,实验期间大鼠自由摄食和饮水。在进行实验前,所有大鼠饲养1周以适应实验室环境。所有的动物实验均遵照国家实验动物饲养和使用指南。将性别、鼠龄、和体重互相匹配大鼠,随机分成四组,第1组对照组（N=12）:大鼠接受同样的手术,气管插管,不给予窒息和心肺复苏术。第2组模型组（N=30）:进行CA和CPR,并给予0.5ml生理盐水/12h（7天）。第3组舒芬太尼组（N=30）:进行CA和CPR,并在CA后注射1.0μg/kg/12h的舒芬太尼（7天）。第4组舒芬太尼+PI3K特异性抑制剂组（N=30）:进行CA和CPR,并在CA后注射1.0μg/kg/12h体重的舒芬太尼,同时静脉注射PI3K特异性抑制剂wortmannin 15μg/kg/12h（7 天）。结果:1）、无药物干预的心肺复苏组大鼠的氧化应激产物8-iso pgf2α和8-ohdg明显增加,提示脑组织缺血再灌注损伤较重,而给予舒芬太尼处理组相对应的氧化应激产物含量减少,P-PI3K,P-AKT,P-Nrf2含量增加,具有抗氧化作用保护性蛋白NQO1和SOD含量也明显增加,与对照组及心肺复苏组相比有显着性差异（P<0.05）;2)、同时给予舒芬太尼和PI3K抑制剂组的氧化应激产物8-iso pgf2α和8-ohdg含量再次增加,P-PI3K,P-AKT,P-Nrf2含量减少,具有抗氧化作用的保护性蛋白NQO1和SOD含量也减少,与舒芬太尼组相比具有统计学意义（P<0.05）。而与心肺复苏组比较无统计学意义（P>0.05）;结论:应用舒芬太尼处理心肺复苏大鼠可以促进PI3K/AKT通路的磷酸化,使P-PI3K,P-AKT磷酸化产物增加,同时P-Nrf2含量也增加,上调了 Nrf2/ARE信号通路,保护性蛋白表达增加,从而发挥了脑保护作用。当舒芬太尼的PI3K/AKT通路的磷酸化作用被抑制后,Nrf2/ARE信号通路上调作用也受到抑制。
廖少山[3]（2020）在《PRV激活三叉神经节细胞NF-κB信号通路的探究》文中进行了进一步梳理伪狂犬病（Pseudorabies,PR,又名Aujeszky’s disease,AD）,是由伪狂犬病毒（Pseudorabies virus,PRV）引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病,该病是危害养猪业的主要传染病之一,每年造成巨大的经济损失。伪狂犬病病毒（PRV）属于疱疹病毒科中的α疱疹病毒亚科,在PRV的潜伏感染期,动物体内检测不到病毒粒子,也不向外排毒,但在相应应激因素的刺激下,潜伏感染的PRV可被激活,可重新产生感染性病毒粒子,导致动物发病,并向外排毒。关于PRV潜伏感染的建立、维持及激活机制尚不明确,控制和根除伪狂犬病所面临的主要障碍是PRV的潜伏感染问题。现有报道显示,猪体外接种PRV可导致神经节细胞的激活,猪神经节细胞的活化主要表现为形态的变化、炎症因子的分泌以及细胞的增殖,而NF-кB信号通路是病原感染引起神经节细胞分泌炎症因子的关键信号通路,病毒激活NF-κB信号通路,NF-κB信号通路的活化会启动很多炎症因子的表达,继而激活宿主的免疫系统;细胞因子方面,病毒感染免疫细胞后造成细胞死亡,导致很多细胞因子的释放,如IL-1、IL-6和IL-8以及TNF-α、INF-α和INF-β。PRV通过何种信号通路激活TG细胞,其分子机制仍不清楚。为了进一步帮助更好地解决上述问题,本研究开展了PRV激活小鼠三叉神经节细胞（TG）NF-кB信号通路的探究,其相关研究内容如下:1、PRV感染小鼠三叉神经节细胞的研究本研究采用胰蛋白酶、DNA酶、胰蛋白酶和胶原蛋白酶的组合消化成年小鼠三叉神经节制备TG细胞,培养1～3 d贴壁,5～6 d生长成熟,TG细胞尼氏染色为蓝色,第7～8 d开始衰老死亡,11～12 d全部死亡。通过分离培养观察鉴定,小鼠TG细胞的正常形态是个体较大,边缘有许多的类似神经元细胞突触的结构,但突触的形状、大小各有不同,细胞边缘成不规则的齿轮状,细胞核一般在细胞的中心位置,TG细胞衰老的过程是呈现出细胞先出现周边逐渐变亮、变小,核的颜色变深,最后是突触断裂、消失和细胞变圆变亮而死亡。研究结果表明:采用该培养方式能够成功分离培养出小鼠TG细胞,而且生长良好,形态稳定,但不能消化传代和冻存,只能原代培养。用PRV感染TG细胞,观察发现TG细胞被PRV感染后期均能出现相应的细胞病变效应（CPE）,研究发现:在接毒PRV 48 h后开始出现CPE,72 h内细胞开始死亡,与对照组的正常TG细胞相比较,接毒组死亡时间提前2～3 d,而对照组Vero细胞接毒后24 h后就出现CPE现象,48 h内细胞几乎全部死亡,而TG细胞出现CPE和死亡的现象要晚约36 h,而且病变时间较长,这个可能与TG细胞的自我潜伏、复制保护机制有关,与实验预期结果相符。病变开始是TG细胞的突出结构断裂、消失,细胞体积缩小,细胞核变大、核颜色变深、位置边移,细胞的轮形逐渐变圆,随后出现细胞周边变亮和逐步死亡的现象。采用细胞间接免疫荧光技术研究发现:使用两种荧光观察同一个位置,然后两个荧光图片合并,两种荧光所显示的位置相同,分别在第24 h和第48 h都检测到了相应的荧光,在接毒后第48 h比第24 h的荧光明亮更明显,说明PRV感染TG细胞后,PRV能迅速进入TG细胞,而且能在TG细胞内快速复制增殖。进一步通过检测TG细胞培养液中5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）的含量来检测PRV对TG细胞生长的影响,研究发现:对照组中的BrdU含量在生长期间持续升高,达到峰值7.85 pg/m L后逐渐下降,BrdU含量达到峰值的时间是156 h,是TG细胞培养第6～7d的样子,与TG细胞成熟时期相符合。而接种PRV病毒液的实验组的BrdU含量在接毒120 h时立刻下降,而且下降幅度大,接毒PRV后的第12 h,实验组检测值从6.67 pg/mL突然下降到2.81 pg/mL,说明此时的TG细胞分裂速度迅速减慢,甚至有可能是停止分裂,当到达144 h时,BrdU含量降到最低,同时又开始迅速增加,原因可能是TG细胞接毒后期,TG细胞受到PRV的破坏,TG细胞通透性增加或破裂,BrdU陆续释放到细胞外而导致BrdU在感染PRV的后期又有升高的现象。对照组的后期（第8～11 d细胞死亡时）也检测到含量BrdU有反弹上升的现象。2、PRV对三叉神经节细胞NF-кB通路影响的研究将小鼠TG细胞培养至第5 d后接PRV,并设空白对照组,分别在接毒感染后3 h、6 h、9 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h取样,用IL-Valukine TMM ELISA方法检测IL-1和IL-6的含量变化,IL-1和IL-6都是NF-κB信号通路激活的下游因子,特别IL-1是该通路的标志性炎症因子,通过测量IL-1的含量来推知NF-κB信号通路激活情况。实验结果表明,在接毒36 h时,IL-1的含量开始明显升高,在感染60 h时IL-1的含量达到峰值10.55 pg/mL,实验组IL-6的含量在24 h就达到了峰值165.109 pg/mL,而且对照组中的IL-1和IL-6含量基本没有变化,同时也设计Vero细胞接毒实验进行比较,Vero细胞接毒后24 h IL-1的含量达到峰值9.161 pg/mL,说明TG细胞感染PRV以后产生的IL-1的反应较慢,大约晚36 h,可能是与PRV病毒在神经元细胞的潜伏机制有关,IL-1是细胞炎症因子,IL-1含量达到峰值的时间与细胞开始大量凋亡时间相吻合。实验证明PRV能在感染后期激活TG细胞的NF-κB信号通路,并能通过激活该通路来调节细胞的凋亡。通过合成MyD88和TRIF的siRNA,再利用脂质转染法分别把siRNA转染到培养好的小鼠TG细胞内,分别沉默MyD88和TRIF基因,同时设计空转染组进行对照,转染后24～36 h开始接毒PRV,接毒后第3 h、6 h、9 h、12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h取样,直至接毒细胞大部分细胞死亡,取完后用IL-1 ValukineTMELISA方法检测IL-1的含量变化,以峰值为参考比较沉默效果,MyD88基因沉默效果分别为21.67%、18.60%和39.52%,TRIF基因沉默效果分别是9.55%和5.86%。进一步进行MyD88基因和TRIF基因同时沉默实验,双沉默效果为27.12%和33.08%。实验结果显示:MyD88基因沉默效果要比TRIF基因的沉默效果好,平均沉默效果高出18.89%,说明MyD88是NF-кB通路激活的途径,NF-кB通路激活是通过MyD88活化途径来激活的。3、PRV对细胞NF-кB通路影响研究的体内验证选择成年小鼠12只,实验组与对照组分别6只,实验组小鼠一次性脑内接活PRV病毒液10μL,同时对照组脑内注射PRV神经元细胞培养液10μL,脑组织接毒后第24h和48 h分别取3只小鼠脑组织,测量脑组织中IL-1的含量变化,实验结果显示:对照组小鼠脑组织的IL-1含量变化不大,实验组中小鼠脑组织的IL-1含量明显升高。按照上述方法取样进行荧光定量PCR检测实验,每个样品分别做3个复孔,根据公式2一△△ct计算每个样本mRNA的相对表达量,以0 h的结果为参照,对照组24 h转录上调2.35倍,对照组48 h上调4.78倍,接毒组24 h及48 h分别上调了5.82倍和11.61倍,接毒组的p65转录因子含量明显升高,说明PRV感染TG细胞后对p65转录因子的产生起到了直接作用。按照上述方法取样进行Western Blot实验,待测样品上样量均为10μL,总蛋白上样量在20～50μg/孔,通过WB实验得到化学发光图,再利用photoshop软件读出各个印迹的平均灰度值,根据内参蛋白和p65表达蛋白之间的灰度值比例关系计算出p65表达蛋白的相对含量,接活PRV组24 h、48 h时,p65蛋白灰度值/内参蛋白灰度值的比值明显低于对照组和接毒前组的值,比值分别是接毒0 h为1.386、对照组24 h为1.381、对照组48 h为1.379、实验组24 h为1.277、实验组48 h为1.141,接毒组的曲线斜率明显变化,可以说明接毒组中的NF-κB p65蛋白表达量明显升高。小鼠体内验证实验结果与体外实验一致,更进一步验证了本研究结果的可靠性。综上所述,PRV感染TG细胞后,能够迅速进入TG细胞内增殖,并能够使TG细胞产生相应的CPE,同时对TG细胞的生长有很强的抑制作用,该研究进步一证实了该TG细胞的病变与PRV感染有直接的关系。PRV能在感染TG细胞后期激活NF-κB信号通路,而且NF-кB通路激活途径是通过MyD88途径而实现的,该研究不仅可以为深入阐明PRV致病与免疫机理奠定基础,为进一步揭示猪伪狂犬病病毒潜伏感染及其致病机理提供了新的线索,也可为其它疱疹病毒类似科学问题的揭示提供借鉴。
武健,刘景艳,卢永存[4]（2020）在《右美托咪啶对心肺复苏后脑损伤的治疗作用及其机制研究》文中提出目的通过窒息后心脏停搏建立大鼠心肺复苏（CPR）模型,探讨右美托咪定（DEX）对缺血缺氧脑损伤的的保护作用及机制。方法取大鼠63只,采用随机法分为Sham组（S组）、常规复苏模型组（C组）和右美托咪定组（D组）,各21只。C组和D组采用窒息后心跳骤停法建立大鼠心肺复苏模型,S组大鼠仅行气管插管不夹闭窒息,D组于复苏成功后尾静脉注射负荷剂量右美托咪定4μg/kg,S组和D组分别给予等容量0.9%氯化钠溶液。于心肺复苏后24、48、72 h分别断头取脑,测定脑水含量和血管通透性,并进行脑组织病理检测和蛋白分析。结果 D组神经功能评分明显高于C组,脑水含量和血管通透性降低;脑组织H&E染色和透射电子显微镜检测结果显示,D组中脑组织结构与C组比较有显着改善,脑细胞凋亡率降低。此外,与C组相比,D组中脑组织内的炎性细胞因子减少,抗炎细胞因子增加。C组凋亡相关的信号分子TLR4,NF-кb,Caspase-3和BAX的表达高于S组,而D组明显低于C组。结论右美托咪定可以抑制炎症反应,减少氧化应激反应,调节细胞外信号转导因子,调节自噬和凋亡,具有一定脑保护作用,有较高研究价值。
刘永飞[5]（2019）在《电针对窒息性心跳骤停大鼠复苏后脑损伤的保护作用》文中指出心跳骤停发病紧急、危害严重,虽然心肺复苏技术的普及和其它辅助措施应用提高了复苏成功率,但脑保护效果依然不令人满意。如何有效的修复损伤神经元,减轻心肺复苏后中枢神经系统并发症,提高复苏后患者的存活率以及生存质量,仍然是亟待解决的临床医学难题。电针有着操作简单、方便可控、易于掌握、副作用小等优点。大量研究表明电针能够减少大鼠脑梗后的梗死体积,改善脑缺血引起的神经功能缺损,而抑制炎症反应是电针脑保护的重要机制之一。心跳停止引起脑缺血,短时间内脑组织即可发生炎症反应,自主循环恢复后,大脑恢复血流再灌注也会过度产生炎性因子,这些都是导致神经元损伤的重要原因。因此本研究首先以窒息性心跳骤停大鼠为模型,模拟麻醉过程因气道阻塞造成心脏停跳的意外情况,通过行为学、形态学以及分子生化技术观察电针对大鼠复苏后脑损伤的影响。此外,胆碱能抗炎通路作为神经炎症反应的关键调控者,通路中的α7nAChR受体在炎性反应过程中发挥重要作用。敲除α7nAChR基因的小鼠,其促炎细胞因子的含量就会增加,上调α7nAChR减少缺血再灌小鼠梗死体积及神经元调亡数目。动物实验证实,电针改善缺血再灌注及痴呆大鼠的学习记忆认知障碍,其机制可能与上调α7nAChR减少炎性因子释放有关。本实验第二部分观察α7nAChR受体以及炎症因子在电针减轻心跳骤停后脑损伤过程中的作用,初步探讨其作用机制,为临床心跳骤停后脑损伤提供新的治疗思路。实验一电针对大鼠心肺复苏后脑损伤的影响目的:探讨电针对大鼠心肺复苏后脑损伤的保护作用及不同穴位之间的差异方法:雄性SD大鼠随机分五组:假手术组（Sham）、模型组（CA）、电针组1（EA1）、电针组2（EA2）、电针组3（EA3）。大鼠窒息8min后进行心肺复苏（CA）,电针组于复苏同时分别在水沟、百会（EA1）;水沟、内关穴（EA2）;尾尖（EA 3）插入毫针并予以电针刺激。计算大鼠复苏成功率,记录复苏后各组大鼠自主循环恢复时间,于复苏后24h及72h对大鼠进行神经功能缺损评分（NDS）,通过水迷宫检测各组大鼠学习记忆等行为能力,尼氏染色观察海马区神经元形态及存活数量。结果:各组大鼠复苏成功率差别无统计学意义。与Sham组相比,剩余各组24、72h NDS明显降低,海马CA区神经元存活数量也明显减少,大鼠空间学习记忆能力减弱;与CA相比,EA1、EA2自主循环恢复时间缩短,24、72h NDS明显增高,海马CA区神经元存活数量也明显增多,大鼠空间学习记忆能力增强;EA3与CA相比,上述指标的不同没有统计学差异;EA1在训练第二天逃避潜伏期明显缩短,EA2于第三天明显缩短,但其余指标的差异没有统计学意义。结论:联合刺激百会穴、水沟穴以及联合刺激水沟穴、内关穴可以改善心肺复苏后大鼠的脑损伤,在改善大鼠学习记忆方面,前者要优于后者。实验二电针通过调节α7nAChR表达减轻大鼠心肺复苏后脑损伤目的:探讨α7nAChR在电针对大鼠心肺复苏后脑保护中的作用方法:雄性SD大鼠随机分4组:假手术组（Sham）、模型组（CA）、电针组（EA）、电针组+甲基牛扁亭碱（EA+MLA）。大鼠窒息8min后进行心肺复苏（CA）,电针组于复苏同时在水沟、百会插入毫针并予以电针刺激。EA+MLA在电针刺激后,经腹腔注射α7nAChR拮抗剂甲基牛扁亭碱。通过免疫荧光和Western blot检测各组大鼠海马及皮层α7nAChR的表达,通过Western blot检测海马及皮层炎性因子IL-1、IL-6、TNFα和小胶质细胞表面标志物Iba-1的表达。结果:与Sham组相比,其余各组α7nAChR明显降低,IL-1、IL-6、TNFα、Iba-1表达增高;EA组α7nAChR高于CA组,IL-1、IL-6、TNFα、Iba-1的表达低于CA组,然而使用拮抗剂MLA后,可以逆转EA产生的效应。结论:电针改善心跳骤停后的脑损伤,可能与激活α7nAChR表达,减少炎性因子产生,从而减轻神经炎性造成的脑损伤有关。
李娟[6]（2019）在《远隔缺血后处理通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路减轻心肺复苏脑损伤》文中研究指明心搏骤停（cardiac arrest,CA）是临床常见的急症,指心脏突然停止搏动,或不能有效泵血,使得全身血液循环中断,进而引起呼吸停止,意识丧失。目前认为抢救的黄金时间是4分钟,因此,及时有效的心肺复苏至关重要。在非心脏病性的心脏骤停中,气道梗阻所致的窒息性心脏骤停占大部分,且多见于儿童及老年,造成严重的后果,由于第一目击者常为家人、周围群众,缺乏专业的培训,常使心肺复苏不能及时有效的进行,造成患者全身重要脏器的损伤,即使抢救成功也常因复苏后的脑损伤留下严重的神经系统后遗症,影响患者的神志及生活自理能力,给患者本人和家人带来负担。除了及时的胸外心脏按压,如何减轻心肺复苏后脑损伤一直是临床医学亟待解决的难题。目前唯一被证实有效的仅有亚低温治疗。近几年,人们发现缺血后处理对缺血再灌注损伤有很好的保护作用,在临床上人们已经发现在冠状动脉重新开放后,运用球囊膨胀、收缩可对缺血性心肌产生保护作用;在动物实验中人们也发现缺血后处理对脑缺血再灌注损伤有保护作用。远隔缺血后处理是缺血后处理的其中一种,是在缺血再灌注后对肢体进行的一系列短暂的机械闭塞和再灌注。由于它在缺血发生后实施,且简单易行,对于减轻突发的心脏骤停引起的脑损伤不失为一种补救措施,特别是院外心脏骤停患者,更早的进一步高级生命支持或可减轻其复苏后的脑损伤。既往研究中已发现远隔缺血后处理对心肺复苏后脑损伤的保护具有重要的临床价值,可通过上调小鼠核因子E2相关因子2（nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2）、血红素氧化酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）及磷酸酰胺腺嘌呤二核苷酸醌氧化还原酶-1（NADPH quinineoxidoreductase-1,NQO-1）的表达,减轻小鼠脑局灶性缺血再灌注损伤;远隔缺血后处理可减轻缺血再灌注后的炎症反应,进而减轻窒息性心搏骤停所致的全脑缺血再灌注损伤。Nrf2是治疗脑缺血再灌注损伤的一个有前途的治疗靶点,它的活性可被许多食物、中草药及其他因素增强,是机体内源性保护机制的关键调节因子,可以大大增强细胞的抗炎、抗氧化应激等能力。本研究采用窒息性心搏骤停（asphyxial cardiac arrest,ACA）模型,观察大鼠自主循环恢复（restoration of spontaneous circulation,ROSC）后远隔缺血后处理对全脑缺血再灌注后损伤海马组织的形态、海马组织中Nrf2、HO-1蛋白的表达及血清中神经元特异性烯醇化酶（neuron specific enolase,NSE）的浓度的影响,并通过运用磷酸肌醇-3激酶（phosphoinositide-3 kinase,PI3K）的特异性拮抗剂LY294002进一步揭示PI3K/Akt/Nrf2信号通路在远隔缺血后处理减轻心肺复苏后全脑缺血再灌注损伤中的作用。第一部分Nrf2/HO-1在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤过程中的表达目的:研究Nrf2、HO-1在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤中的的表达变化及意义。方法:45只成年雄性大鼠随机分为假手术组（Sham组）、窒息性心肺复苏模型组（Control组）、远隔缺血后处理组（RIPost组）3组,每组15只。RIPost组大鼠在自主循环恢复（ROSC）后即刻行肢体远隔缺血后处理。在ROSC后24 h分别采用HE染色、ELISA检测血清神经元特异性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）观察脑组织的损伤情况;Western Blot、免疫组化、RT-PCR检测脑组织Nrf2、HO-1蛋白及m RNA表达情况。结果:与Sham组相比,Control组呈急性缺血性改变,海马区神经元有明显的损伤,血清NSE含量显着升高（P<0.05）,而RIPost组病理学改变轻于Control组,血清NSE含量也较Control组明显降低（P<0.05）;Control组、RIPost组的脑海马组织Nrf2核蛋白和HO-1蛋白表达均高于假手术组（Sham组）,且RIPost组HO-1蛋白表达显着高于Control组（均P<0.05）。RT-PCR显示三组间Nrf2 m RNA表达水平无明显变化（P>0.05）;RIPost组HO-1 m RNA的表达较Control组升高更显着（P<0.05）。结论:远隔缺血后处理可减轻大鼠心肺复苏脑损伤,其作用机制可能与上调大鼠Nrf2/HO-1通路有关。第二部分PI3K/Akt/Nrf2信号通路在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤中的作用目的:探讨磷酸肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/Nrf2信号通路是否参与了远隔缺血后处理减轻大鼠窒息性心搏骤停脑损伤。方法:SD雄性大鼠40只,随机分为六组:假手术组（Sham组,n=5）、窒息性心肺复苏模型组（Control组,n=7）、远隔缺血后处理组（RIPost组,n=7）、LY294002+远隔缺血后处理组（LY294002+RIPost组,n=7）、LY29400组（n=7）及DMSO组（n=7）。Sham组大鼠仅进行股动静脉穿刺及气管插管;Control组按8 min窒息性心肺复苏模型处理;RIPost组大鼠在此基础上,于ROSC后即刻行右下肢缺血后处理;LY294002+RIPost组大鼠在造模前30 min静脉给予PI3K特异性抑制剂LY2940021.8 mg/kg,造模后于自主循环恢复即刻行肢体远隔缺血后处理;LY294002组:在造模前30 min腹腔注射LY294002 1.8 mg/kg,心肺复苏后不给予远隔缺血后处理;DMSO组:于造模前30 min腹腔注射单纯的稀释后的DMSO,后建立窒息性心肺复苏模型。自主循环恢复后24 h采用ELISA测定皮层炎症因子IL-1β、TNF-α及IL-6的表达;Western Blot检测海马组织中p-Akt、Nrf2和HO-1蛋白表达情况。结果:与Sham组相比,Control组、RIPost组、LY294002+RIPost组、LY294002组及DMSO组皮层脑组织中IL-1β、TNF-α及IL-6浓度均显着升高（P<0.05）;与Control组相比,RIPost组皮层脑组织中IL-1β、TNF-α及IL-6浓度明显降低（P<0.05）,而给予拮抗剂后皮层脑组织中IL-1β、TNF-α及IL-6浓度降低不明显,差异无统计学意义（P>0.05）;与Sham组相比,CA后大鼠脑海马组织中p-Akt、核Nrf2蛋白及HO-1蛋白表达增加,RIPost处理后脑海马组织中p-Akt、核Nrf2蛋白及HO-1蛋白的表达显着增高,而给予LY294002后,脑海马组织中p-Akt、核Nrf2蛋白及HO-1蛋白表达较RIPost组下调,两组间差异有统计学意义（P<0.05）。结论:PI3K/Akt/Nrf2信号通路可能通过上调p-Akt、核Nrf2蛋白及HO-1蛋白的表达,参与远隔缺血后处理对大鼠窒息性心搏骤停脑损伤的保护作用。
栗甜[7]（2019）在《ACE2-Ang（1-7）-MasR轴在大鼠心肺复苏后早期脑损伤中的作用研究》文中研究指明目的:探讨ACE2-Ang（1-7）-Mas R轴在大鼠心搏骤停-心肺复苏（cardiac arrestcardiopulmonary resuscitation,CA-CPR）后早期脑损伤中的作用,为心肺复苏后脑损伤临床治疗提供新思路。方法:用室颤法（ventricular fibrillation,VF）制作CA-CPR模型,54只大鼠随机分为假手术组（sham,n=18）、常规复苏组（control,n=18）、Mas R激动剂Ang（1-7）组（n=18）。留取大鼠复苏后2h、4h、6h脑组织及血清标本。用比色法检测脑组织NO、O2-表达,ELISA法检测血清AngⅡ、ACE、ACE2、Ang（1-7）、S100B及脑组织3-NT的表达,Western Blot法检测脑组织AT1R、AT2R、i NOS、e NOS及Mas R蛋白的表达情况,HE染色法检测脑海马回组织病理情况。结果:1.CA-CPR后RAS系统、氧化应激、硝化应激及脑损伤变化:与sham组比较,control组CPR后2h、4h、6h Ang II、Ang（1-7）、ACE、ACE2、AT1R和AT2Rm RNA、AT1R、AT2R和Mas R蛋白表达、NO、3-NT、O2-、iNOS和e NOSm RNA、e NOS和i NOS蛋白表达、S100B表达均明显升高,CPR后4h、6h Mas Rm RNA表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）;Ang（1-7）组CPR后2h、4h、6h ACE、ACE2、AT1R和AT2R蛋白表达、Mas Rm RNA和Mas R蛋白表达、O2-、NO、e NOSm RNA和e NOS蛋白表达、S100B表达均升高,CPR后4h、6h AT1R和AT2Rm RNA表达升高,CPR后6h脑组织中3-NT和i NOS蛋白表达稍升高,差异有统计学意义（P<0.05）。2.给予Mas R激动剂Ang（1-7）对CACPR后RAS系统、氧化应激、硝化应激及脑损伤的影响:与control组比较,Ang（1-7）组CPR后2h、4h、6h ACE、ACE2、AT1R和AT2Rm RNA、AT1R和AT2R蛋白表达、3-NT、O2-、i NOSm RNA和i NOS蛋白表达、S100B浓度均降低,CPR后2h e NOS蛋白表达稍降低,CPR后2h、4h、6h Mas Rm RNA和Mas R蛋白表达、NO、e NOSm RNA表达均升高,CPR后4h、6h e NOS蛋白表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）。3.CA-CPR后及给予Mas R激动剂Ang（1-7）对海马回组织病理变化的影响:与Sham组比较:control组与Ang（1-7）组CPR后6h海马回组织病理均出现了神经细胞稀疏,排列不规则,细胞核固缩深染、细胞排列不整齐,间质水肿等改变;与control组比较:Ang（1-7）组CPR后6h海马回组织细胞间质水肿稍减轻,细胞核固缩深染的数量减少。结论:1.CA-CPR后早期脑组织氧化应激和硝化应激反应被过度激活;2.CA-CPR后早期促进ACE2-Ang（1-7）-Mas R轴的激活通过上调e NOS表达,下调O2-、i NOS的表达,降低氧化应激和硝化应激反应水平,稍减轻脑组织病理损伤。
千磊[8]（2019）在《右美托咪定对大鼠心肺复苏后脑损伤的保护作用研究》文中研究指明研究背景:心肺复苏后脑损伤是心脏骤停患者致残和死亡的最主要原因之一。由于大脑的独特易损性,所以它对缺血/再灌注损伤的耐受性极为有限,因此缺血性脑损伤仍然是心跳骤停后产生恶劣预后的重要因素,其病理生理主要包括两方面:缺血后细胞内稳态失衡促凋亡及再灌注后促炎性反应。右美托咪定已被证实具有神经保护作用,可以减轻脑组织损伤,但其是否对心肺复苏后脑损伤产生保护作用尚不清楚。研究目的:本研究旨在探讨右美托咪定后处理对大鼠心肺复苏后脑功能的影响及可能机制。研究方法:本实验采用呼气末夹闭气管导管合并静脉给予顺式阿曲库铵模拟窒息制备大鼠心跳骤停-心肺复苏模型。选择雄性SD大鼠30只,随机分为3组:假手术组（Sham组,n=6）、对照组（Control组,n=12）、右美托咪定后处理组（Dex组,n=12）;Sham组大鼠仅行气管插管及动静脉穿刺,Control组和Dex组进行6min窒息造模;Dex组大鼠在自主循环恢复后使用微量注射泵静脉输注25μg/kg盐酸右美托咪定注射液,Control组在自主循环恢复后输注等量生理盐水。分别对各组大鼠在自主循环恢复后24h、48h、72h进行神经功能缺损评分,在5d时进行转杆测试;采用ELISA法在2h、24h、48h检测各组大鼠血清中的IL-1β、TNF-α表达水平;自主循环恢复5天后,取大鼠脑皮层,使用Tunel染色计算各组大鼠脑细胞凋亡指数,Western Blot检测各组大鼠脑皮层组织中Caspase-3和NF-κB蛋白的表达水平。研究结果:1.与Control组比较,Dex组大鼠在心肺复苏后五天内的累计生存率明显升高,其中Control组五天累积生存率为50%,Dex组为66.7%;2.自主循环恢复后24h、48h、72h,对大鼠进行Geocadin神经功能缺损评分,结果发现:与Sham组比较,Control组各时间点神经功能缺损评分均降低（p<0.01）,然而与Control组相比,Dex组神经功能缺损评分在各时间点均升高（p<0.05）;3.转杆测试结果显示:Dex组大鼠较Control组在转杆上的爬行时间、爬行距离、平均速度均增加（p<0.05）,而Dex组与Sham组无统计学差异;4.与Control组比较,Dex组大鼠2h血清中TNF-α水平显着降低（p<0.05）,24h和48h三组之间无显着性差异,而Dex组与Sham组无显着性差异;5.与Control组比较,Dex组2h、24h和48h各时间点大鼠血清中的IL-1β的表达明显减少（p<0.05）,而Dex组与Sham组相比则无统计学差异;6.与Control组比较,Dex组大鼠心脏骤停/心肺复苏诱导的脑细胞凋亡指数显着降低（p<0.001）,而Dex组与Sham组无显着性差异;7.与Control组比较,Dex组大鼠脑组织中Caspase-3的表达明显减少（p<0.05）,而Dex组与Sham组无统计学差异;8.与Control组比较,Dex组大鼠脑组织中NF-κB的表达明显减少（p<0.05）,而Dex组与Sham组无统计学差异。研究结论:右美托咪定后处理可以减少大鼠心肺复苏后脑细胞凋亡,降低中枢神经系统炎症反应,改善大鼠自主循环恢复后五天的生存率、神经功能评分以及运动损伤,减轻大鼠心肺复苏后脑损伤。
刘敏[9]（2019）在《一氧化碳释放分子2对心脏骤停-心肺复苏大鼠复苏后心功能不全保护作用及其机制的研究》文中提出目的探索一氧化碳释放分子2（CORM-2）对心肺复苏大鼠复苏后心功能不全的保护作用及其机制。方法采用冰氯化钾致停跳联合窒息4min,人工胸外心脏按压3min,建立大鼠心脏骤停-心肺复苏（Cardiac arrest-cardiopulmonary resuscitation,CA-CPR）复苏后心功能不全模型,采用随机数字表法将40只大鼠分为5组:假手术组（Sham组）、心肺复苏组（CPR组）、CORM-2组、灭活型CORM-2组（i CORM-2组）及DMSO组,每组8只鼠。Sham组（仅置入相关导管,不行CPR术）,其余各组均置入相关导管并行CPR术。CORM-2组（1mg CORM-2粉末用20 ul DMSO溶解,980ul生理盐水稀释）、i CORM-2组（灭活的CORM-2溶液）均以4mg/kg术前12h腹腔注射。Sham组（生理盐水）、CPR组（生理盐水）、DMSO组（20ul DMSO,980 ul生理盐水稀释）均以4ml/kg（置管）术前12h腹腔注射。（1）各组大鼠复苏（或置管）后连续监测4h血流动力学:平均动脉压（MAP）,左室内压最大上升速率（+dp/dtmax）及下降速率（-dp/dt）。（2）复苏（或置管）后4h取心肌组织,透射电镜观察心肌组织超微结构。（3）复苏（或置管）后4h下腔静脉取血,离心分离血清,乳酸-丙酮酸法测血清乳酸脱氢酶（LDH）活性,ELISA法测血清肌酸激酶同工酶（CK-MB）浓度。（4）复苏（置管）后4h取心室肌组织,Western blot检测心肌组织Caspase-3,Caspase-9,胞浆Cyt-C、线粒体分裂蛋白Drp1,融合蛋白Mfn2表达水平。（5）取复苏（置管）后4h心室肌组织,冰冻切片荧光定量检测各组大鼠心肌组织ROS含量。（6）取复苏（置管）后4小时心室肌组织,分光光度计测OD值检测线粒体呼吸复合体Ⅳ酶活性。结果1.各组大鼠复苏（置管）后4h血流动力学变化与Sham组相比,CPR组、iCORM-2组、DMSO组在复苏后各时间点MAP均明显降低,+dp/dtmax,-dp/dt在复苏后0.5h,1h,2h降低（均P<0.05）。CORM-2组各时相点MAP,+dp/dtmax,-dp/dt与Sham组相比均无差异（均P>0.05）,且复苏后0.5h,1h,2h+dp/dtmax,-dp/dt均高于其他复苏组（均P<0.05）。CPR组、i CORM-2组、DMSO组三组间血流动力学资料无统计学差异（均P>0.05）2.各组大鼠复苏（置管）后4h心肌组织超微结构变化电镜下,Sham组心肌纤维排列整齐,线粒体结构清晰,嵴排列规整。CPR组心肌纤维排列稀疏,肌节紊乱,线粒体肿胀,线粒体嵴部分消失。CORM-2组心肌纤维排列整齐,肌节规整,大部分线粒体嵴清晰。i CORM-2组、DMSO组线粒体肿胀,嵴断裂稀疏,可见透光区,有的线粒体几乎全部破坏,可见多个空泡。3.各组大鼠复苏（置管）后4h血清LDH酶活性及CK-MB酶浓度变化与Sham组比较,CPR组、iCORM-2组、DMSO组血清中LDH活性,CK-MB浓度明显增高,CORM-2组仅CK-MB浓度升高（均P<0.05）;CORM-2组LDH活性,CK-MB浓度均低于其他复苏各组（均P<0.01）。4.各组大鼠复苏（置管）后4h心肌组织Caspase-3,9,胞浆Cyt-C表达变化与Sham组相比,CPR组、iCORM-2组、DMSO组Caspase-3,Caspase-9,胞浆Cyt-C表达均显着增高（均P<0.05）;CORM-2组仅Caspase-3,Caspase-9表达升高（均P<0.05）。且CORM-2组上述3种蛋白表达均低于其他复苏组（均P<0.05）。5.复苏（置管）后4h心肌组织ROS含量变化与Sham组相比,CPR组、iCORM-2组、DMSO组ROS含量明显增多（P<0.05）,CORM-2组的ROS含量略高于Sham组（P<0.05）;而CORM-2干预后的ROS含量明显低于CPR组、i CORM-2组、DMSO组（P<0.05）。6.复苏（置管）后4h心肌组织呼吸复合体Ⅳ酶活性与Sham组相比,CPR组、iCORM-2组、DMSO组中线粒体呼吸复合体IV酶活性明显降低（P<0.05）;CORM-2干预组酶活性较CPR组、i CORM-2组、DMSO组明显升高（均P<0.05）;后三组之间上述指标比较差异无统计学意义（P>0.05）。7.复苏（置管）后4h心肌组织Drp1,Mfn2表达变化与Sham组相比,CPR组、iCORM-2组、DMSO组Drp1表达显着增加（P<0.05）。与Sham组相比,上三组Mfn2蛋白表达量降低（P<0.05）;与CPR组相比,CORM-2干预组能明显抑制Drp1表达,而增加Mfn2的表达（P<0.05）;CPR组、i CORM-2组和DMSO组中Drp1和Mfn2的表达无显着差异。结论CORM-2可通过减少线粒体途径介导的心肌细胞凋亡,保护复苏后大鼠心功能。同时,CORM-2减少心肌线粒体分裂,促进融合,改善线粒体的动力学平衡可能也是其保护复苏后心功能的机制之一。
谢吐秀[10]（2019）在《NLRP3炎症小体介导小鼠心肺复苏后细胞焦亡的研究》文中研究说明研究背景与目的:心搏骤停是最常见的临床急危重症之一,心肺脑复苏作为其有效的救治手段,一直在不断的改进,但心搏骤停患者的预后并未得到显着的改善。心搏骤停心肺复苏后的幸存者普遍存在不同程度的神经功能障碍。众所周知,炎症反应在脑缺血/再灌注损伤过程中扮演着至关重要的角色。然而,心搏骤停心肺复苏后全身缺血/再灌注损伤过程中,脑缺血/再灌注损伤所致的炎症反应机制尚不明确。细胞焦亡作为一种程序性死亡方式,已成为近年来研究的热点。本研究旨在探讨NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡在心搏骤停心肺复苏后脑缺血/再灌注损伤过程中的作用及相关机制。方法:1.采用C57BL/6小鼠和NLRP3-/-小鼠制备高钾合并窒息心搏骤停心肺复苏模型,根据复苏后取材时间点的不同,将这两种品系的小鼠分别分为复苏前组、复苏后2h组、复苏后12h组和复苏后24h组。评估这两种小鼠的总体复苏情况,并记录各组小鼠的神经功能评分。通过免疫印迹法（Western blot,WB）检测脑组织中NLRP3、炎性Caspase-1、细胞焦亡的执行蛋白GSDMD的表达。应用免疫荧光观察复苏后不同时间点海马回区NLRP3和GSDMD的表达趋势和定位。2.培养人脑胶质瘤细胞U87细胞,用NLRP3 RNAi慢病毒和空载慢病毒分别感染U87细胞,并用嘌呤霉素进行筛选,得到U87 NLRP3 RNAi和U87空载的稳定细胞系。接着,对正常U87细胞、U87 NLRP3 RNAi细胞以及U87空载细胞进行糖氧剥夺12h/复氧12h。最后,倒置显微镜下观察各组细胞的细胞形态,用WB检测细胞焦亡相关蛋白的表达,用CCK8试剂检测各组U87细胞的细胞活力,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组U87细胞上清液中IL-1β的浓度。结果:1.与C57BL/6小鼠相比,NLRP3-/-小鼠心搏骤停心肺复苏后的自主循环恢复率、自主呼吸恢复率和2小时存活率均显着提高（P<0.05）,而其自主循环恢复时间和自主呼吸恢复时间均显着缩短（P<0.05）。此外,NLRP3-/-小鼠复苏后2h、复苏后6h、复苏后12h和复苏后24h的神经功能评分均分别高于C57BL/6小鼠复苏后2h、复苏后6h、复苏后12h和复苏后24h的,差异具有统计学意义（P<0.05）。2.C57BL/6小鼠和NLRP3-/-小鼠在心搏骤停心肺复苏后脑缺血/再灌注损伤过程中都发生了细胞焦亡。C57BL/6小鼠脑组织中NLRP3蛋白、Caspase-1蛋白以及细胞焦亡的执行蛋白GSDMD的表达在复苏后6h达到高峰,随后逐步降低,在复苏后24h仍未恢复至基线水平（P<0.001）;与复苏后同时间段的C57BL/6小鼠相比,NLRP3-/-小鼠在心搏骤停心肺复苏后脑缺血/再灌注损伤过程中,脑组织中NLRP3蛋白不表达,其下游的Caspase-1蛋白和GSDMD蛋白呈显着低表达（P<0.001）。3.NLRP3蛋白表达定位于海马回区细胞质,GSDMD蛋白表达定位于海马回区细胞膜。4.正常U87细胞在糖氧剥夺12h/复氧12h后,细胞形态明显发生改变,细胞贴壁能力和细胞活力均显着降低,而NLRP3、炎性Caspase-1和GSDMD蛋白的表达水平会显着上调（P<0.001）,并产生大量的炎性因子IL-1β（P<0.001）;U87 NLRP3 RNAi稳定细胞经过糖氧剥夺12h/复氧12h处理后,细胞形态明显改善,细胞贴壁能力和细胞活力均显着增强,而NLRP3、炎性Caspase-1和GSDMD蛋白的表达水平均显着降低（P<0.001）,产生的炎性因子IL-1β也明显减少（P<0.001）。结论:（1）NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡在心肺复苏后海马回区缺血/再灌注损伤过程中扮演着重要的角色;（2）沉默或者敲低NLRP3基因可抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD这条介导细胞焦亡信号轴的激活,改善细胞形态、增强细胞贴壁能力和细胞活力、降低炎性因子水平,继而显着提高小鼠心肺复苏后2h存活率、自主循环恢复率、自主呼吸恢复率,显着缩短心肺复苏后自主循环恢复时间和自主呼吸恢复时间,显着改善小鼠心肺复苏后的神经功能评分
二、心肺复苏后大鼠脑神经元中NF-кB的表达（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、心肺复苏后大鼠脑神经元中NF-кB的表达（论文提纲范文）
（1）右美托咪定对心肺复苏后大鼠脑损伤的作用及机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 引言 |
| 1 实验材料 |
| 1.1 实验仪器和设备 |
| 1.2 主要试剂 |
| 2.实验方法 |
| 2.1 实验动物与分组 |
| 2.2 心肺复苏模型的建立 |
| 2.3 心肺复苏后处理 |
| 2.4 神经功能评价 |
| 2.5 脑组织标本的采集 |
| 2.6 脑水肿程度的测定计算公式 |
| 2.7 脑组织HE染色 |
| 2.8 透射电子显微镜(TEM)分析 |
| 2.9 石蜡切片荧光TUNEL检测 |
| 2.10 酶联免疫吸附(ELISA)测定 |
| 2.11 蛋白质印迹Western blotting分析 |
| 统计学分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 右美托咪定的脑保护作用机制及研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 中英文缩略词对照表 |
| 致谢 |
（2）舒芬太尼对大鼠心肺复苏后脑保护作用及其机制探讨（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 第1章 文献综述 药物通过 Keap1-Nrf2-ARE 通路发挥脑保护作用的治疗进展 |
| 第2章 窒息法建立大鼠心脏骤停模型 |
| 背景 |
| 2.1 材料与方法 |
| 2.1.1 实验动物及分组 |
| 2.1.2 模型制备及给药方法 |
| 2.1.3 指标观察 |
| 2.1.4 数据处理 |
| 2.2 结果 |
| 2.2.1 建立大鼠心脏骤停模型结果 |
| 2.2.2 窒息时间长短与CPR成功所需时间和复苏成功率的关系 |
| 2.2.3 复苏成功后大鼠的6 小时、3 天、7 天存活率比较 |
| 2.3 讨论 |
| 2.4 结论 |
| 第3章 舒芬太尼对心肺复苏后大鼠神经元凋亡的影响 |
| 背景 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 材料 |
| 3.1.2 方法 |
| 3.1.3 统计学分析 |
| 3.2 结果 |
| 3.2.1 正常大鼠和心肺复苏后大鼠大脑海马组织结构(HE染色) |
| 3.2.2 不同实验组大鼠大脑海马组织形态结构(TUNEL染色) |
| 3.2.3 不同实验组大鼠海马组织神经元凋亡TUNEL染色表现及凋亡指数对比 |
| 3.2.4 各实验组蛋白caspase-3和caspase-9 的表达 |
| 3.2.5 各组大鼠海马组织炎症细胞因子白介素-1β(IL-1β),白介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子(TNF-α)含量 |
| 3.2.6 各实验组大鼠海马Bcl-2、Bax表达 |
| 3.2.7 实验组神经功能缺损评分及自发交替运动能力评定(见表3.2) |
| 3.3 讨论 |
| 3.4 结论 |
| 第4章 大鼠心肺复苏后应用舒芬太尼对PI3K/AKT通路及对Nrf2/ARE 信号通路的影响 |
| 背景 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 材料 |
| 4.1.2 方法 |
| 4.1.3 统计学处理 |
| 4.2 结果 |
| 4.2.1 各组间海马组织氧化应激产物8-iso pgf2α和8-ohdg的表达 |
| 4.2.2 抗氧化应激反应的保护性蛋白NQO1和SOD表达情况 |
| 4.2.3 磷酸化产物测定 |
| 4.3 讨论 |
| 4.4 结论 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（3）PRV激活三叉神经节细胞NF-κB信号通路的探究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 第一章 文献综述 |
| 1 猪伪狂犬病概述 |
| 1.1 猪伪狂犬病主要流行病学特征 |
| 1.2 伪狂犬病毒致病机理研究进展 |
| 1.3 病毒对信号通路的影响在致病机理中的作用研究 |
| 1.4 伪狂犬病毒感染细胞的信号通路研究 |
| 2 伪狂犬病毒对NF-кB信号通路影响的研究进展 |
| 2.1 信号通路和NF-кB信号通路简介 |
| 2.2 NF-κB通路活化途径分类和正负调节 |
| 2.3 病毒调节NF-кB信号通路的研究进展 |
| 2.4 PI3K/Akt/NF-кB信号通路与细胞凋亡的关系 |
| 2.5 TLRs信号转导途径与NF-кB信号通路的关系 |
| 2.6 NF-кB信号通路在PRV激活三叉神经节细胞中的作用有待揭示 |
| 2.7 本研究的目的和意义 |
| 第二章 PRV感染小鼠三叉神经节细胞的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 病料与细胞 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液的配制 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 PRV增毒培养 |
| 2.2 小鼠三叉神经节细胞培养 |
| 2.3 PRV感染小鼠三叉神经节细胞的病变观察 |
| 2.4 细胞间接免疫荧光法检测PRV在TG细胞内的增殖情况 |
| 2.5 小鼠三叉神经节细胞感染PRV以后的增殖情况 |
| 3 结果 |
| 3.1 PRV增毒培养结果 |
| 3.2 成年小鼠三叉神经节细胞的分离培养结果 |
| 3.3 TG细胞接毒PRV后出现的CPE现象 |
| 3.4 细胞间接免疫荧光法检测PRV在TG细胞内的增殖结果 |
| 3.5 小鼠三叉神经节细胞感染PRV以后的增殖情况 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第三章 PRV对三叉神经节细胞NF-кB通路影响的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 病料与细胞 |
| 1.2 主要试剂 |
| 1.3 主要溶液的配制 |
| 1.4 主要实验仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 利用双抗夹心法ELISA检测样本中IL-1的含量 |
| 2.2 MyD88和TRIF基因沉默实验 |
| 3 结果 |
| 3.1 Vero细胞接PRV后IL-1含量检测(浓度pg/mL)结果 |
| 3.2 TG细胞接毒PRV后IL-1检测(浓度pg/mL)结果 |
| 3.3 TG细胞接毒PRV后IL-6检测(浓度pg/mL)结果 |
| 3.4 沉默MyD88和TRIF后IL-1检测结果(浓度pg/mL) |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第四章 PRV对细胞NF-КB通路影响研究的体内验证 |
| 1 材料 |
| 1.1 病料与细胞 |
| 1.2 主要试剂和配方 |
| 1.3 主要仪器 |
| 2 方法 |
| 2.1 小鼠脑内接毒PRV实验 |
| 2.2 小鼠脑组织中IL-1含量检测 |
| 2.3 实时荧光定量PCR检测p65转录因子 |
| 2.4 Western Blot实验检测p65表达蛋白量 |
| 3 结果 |
| 3.1 小鼠接毒PRV到脑组织后出现的瘙痒症状 |
| 3.2 PRV接毒到小鼠脑组织后IL-1的含量检测结果 |
| 3.3 实时荧光定量PCR检测NF-кB p65 转录因子含量的结果 |
| 3.4 Western Blot实验检测p65 表达蛋白量的结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 主要参考文献 |
| 附录一 研究生期间参与的课题 |
| 附录二 攻读硕士学位期间参与发表的论文 |
| 附录三 本文用到的部分英文缩写及含义说明 |
| 致谢 |
（4）右美托咪啶对心肺复苏后脑损伤的治疗作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 1 材料与方法 |
| 1.1 材料 |
| 1.2 模型的构建与CPR |
| 1.3 方法 |
| 1.3.1 脑组织H&E染色 |
| 1.3.2 透射电子显微镜（TEM）分析 |
| 1.3.3 TUNEL凋亡分析 |
| 1.3.4 细胞因子和炎症因子ELISA测定 |
| 1.3.5 蛋白质印迹Western blotting分析 |
| 1.4 统计学方法 |
| 2 结果 |
| 2.1 心肺复苏后不同组的神经功能 |
| 2.2 心肺复苏后不同组脑水含量和脑部血管通透性表现 |
| 2.3 脑组织病理切片 |
| 2.4 心肺复苏后脑细胞损伤 |
| 2.5 右美托咪定治疗可抑制心肺复苏后脑细胞的凋亡 |
| 2.6 右美托咪定抑制炎症因子并促进抗炎细胞因子的分泌 |
| 2.7 右美托咪定下调脑细胞TLR4,NF-кb,Caspase-3、BAX的蛋白表达 |
| 3 讨论 |
（5）电针对窒息性心跳骤停大鼠复苏后脑损伤的保护作用（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 实验一 电针对大鼠心肺复苏后脑损伤的影响 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验设备 |
| 1.4 实验药物配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 大鼠模型制备 |
| 2.3 电针处理 |
| 2.4 一般情况、复苏成功率及自主循环恢复时间 |
| 2.5 神经功能缺损评分 |
| 2.6 水迷宫的测试 |
| 2.7 冰冻切片 |
| 2.8 尼氏染色 |
| 2.9 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 电针缩短心肺复苏后大鼠自主循环恢复时间 |
| 3.2 电针改善心肺复苏后大鼠神经功能和预后 |
| 3.3 电针提高大鼠学习记忆认知功能 |
| 3.4 电针减轻心肺复苏后大鼠海马神经元损伤数目 |
| 4 讨论 |
| 实验二 电针通过调节α7nAChR表达减轻大鼠心肺复苏后脑损伤 |
| 1 材料 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验试剂 |
| 1.3 实验设备 |
| 1.4 实验药物配制 |
| 2 方法 |
| 2.1 动物分组 |
| 2.2 动物模型 |
| 2.3 电针处理 |
| 2.4 冰冻切片 |
| 2.5 免疫荧光 |
| 2.6 Western blot |
| 2.7 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 EA抑制海马和皮质α7nAChR的下调 |
| 3.2 EA可通过抑制α7nAChR的下调来抑制海马和皮质中炎症因子的表达 |
| 3.3 EA通过抑制α7nAChR的下调减少海马和皮质中的小胶质细胞活化 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（6）远隔缺血后处理通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路减轻心肺复苏脑损伤（论文提纲范文）
| 缩略语表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 文献回顾 |
| 第一部分 Nrf2/HO-1 在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤过程中的表达 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 PI3K/Akt/Nrf2 信号通路在远隔缺血后处理减轻大鼠心肺复苏脑损伤中的作用 |
| 1 材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 个人简历和研究成果 |
| 致谢 |
（7）ACE2-Ang（1-7）-MasR轴在大鼠心肺复苏后早期脑损伤中的作用研究（论文提纲范文）
| 中英缩略词对照表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 材料 |
| 方法 |
| 统计学方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（8）右美托咪定对大鼠心肺复苏后脑损伤的保护作用研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 主要中英文缩略语对照 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 研究工作的背景与意义 |
| 1.2 国内外研究历史与现状 |
| 1.2.1 心肺复苏后脑损伤的发病机理 |
| 1.2.2 右美托咪定的神经保护作用及其相关机制的研究进展 |
| 1.3 本文的主要贡献与创新 |
| 1.4 本论文的结构安排 |
| 第二章 右美托咪定后处理对大鼠心肺复苏后脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究 |
| 2.1 材料 |
| 1.2.1 实验动物 |
| 1.2.2 主要实验试剂 |
| 1.2.3 主要实验耗材 |
| 1.2.4 主要实验仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 大鼠窒息性心脏骤停/心肺复苏模型的制备 |
| 2.2.2 动物的随机分组及给药方式 |
| 2.2.3 研究方案 |
| 2.2.4 生存分析以及神经功能评估 |
| 2.2.5 转杆实验 |
| 2.2.6 ELISA法检测大鼠血清炎性因子表达 |
| 2.2.7 TUNEL染色检测细胞凋亡 |
| 2.2.8 Western Blotting |
| 2.2.9 统计学方法分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 右美托咪定后处理对大鼠ROSC后五天生存率的影响 |
| 2.3.2 右美托咪定后处理对大鼠ROSC后血流动力学的影响 |
| 2.3.3 右美托咪定后处理对大鼠ROSC后 NDS评分的影响 |
| 2.3.4 右美托咪定后处理对大鼠ROSC后运动功能的影响 |
| 2.3.5 右美托咪定后处理对大鼠ROSC后血清中炎性因子表达的变化 |
| 2.3.6 右美托咪定后处理对大鼠ROSC后神经元凋亡的影响 |
| 2.3.7 右美托咪定后处理对大鼠ROSC后脑皮层Caspase-3 表达的变化 |
| 2.3.8 右美托咪定后处理对大鼠ROSC后脑皮层中NF-κB表达的变化 |
| 2.4 本章小结 |
| 第三章 全文总结与展望 |
| 3.1 全文总结 |
| 3.2 后续工作展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间取得的成果 |
（9）一氧化碳释放分子2对心脏骤停-心肺复苏大鼠复苏后心功能不全保护作用及其机制的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 大鼠心脏骤停-心肺复苏(CA-CPR)复苏后心功能不全模型的构建 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分 一氧化碳释放分子2对心肺复苏大鼠复苏后心功能保护作用的研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分 CORM-2 对复苏后大鼠心功能不全线粒体凋亡及线粒体动力学平衡的影响 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 文献综述 一氧化碳及其释放分子的潜在治疗作用 |
| 综述参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 |
| 个人简介 |
| 开题、中期及学位论文答辩委员组成 |
（10）NLRP3炎症小体介导小鼠心肺复苏后细胞焦亡的研究（论文提纲范文）
| 论文创新点 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 第一部分 NLRP3 炎症小体介导小鼠心肺复苏后细胞焦亡 |
| 1 材料与方法 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验方法 |
| 4 统计分析 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 NLRP3 炎症小体在糖氧剥夺过程中介导U87 细胞焦亡 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 统计分析 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间主要科研成果 |
| 致谢 |
四、心肺复苏后大鼠脑神经元中NF-кB的表达（论文参考文献）
- [1]右美托咪定对心肺复苏后大鼠脑损伤的作用及机制研究[D]. 武健. 青岛大学, 2021
- [2]舒芬太尼对大鼠心肺复苏后脑保护作用及其机制探讨[D]. 胡海霞. 吉林大学, 2021(01)
- [3]PRV激活三叉神经节细胞NF-κB信号通路的探究[D]. 廖少山. 贵州大学, 2020(01)
- [4]右美托咪啶对心肺复苏后脑损伤的治疗作用及其机制研究[J]. 武健,刘景艳,卢永存. 当代医学, 2020(21)
- [5]电针对窒息性心跳骤停大鼠复苏后脑损伤的保护作用[D]. 刘永飞. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [6]远隔缺血后处理通过PI3K/Akt/Nrf2信号通路减轻心肺复苏脑损伤[D]. 李娟. 中国人民解放军空军军医大学, 2019(06)
- [7]ACE2-Ang（1-7）-MasR轴在大鼠心肺复苏后早期脑损伤中的作用研究[D]. 栗甜. 遵义医科大学, 2019(08)
- [8]右美托咪定对大鼠心肺复苏后脑损伤的保护作用研究[D]. 千磊. 电子科技大学, 2019(01)
- [9]一氧化碳释放分子2对心脏骤停-心肺复苏大鼠复苏后心功能不全保护作用及其机制的研究[D]. 刘敏. 宁夏医科大学, 2019(07)
- [10]NLRP3炎症小体介导小鼠心肺复苏后细胞焦亡的研究[D]. 谢吐秀. 武汉大学, 2019(06)